Krooninen sairaus

tiivistelmä

Johdanto

Agonistisia vasta kohdistaminen TRAIL-reseptorit 1 ja 2 (TRAIL-R1 ja TRAIL-R2) kehitetään uutena terapeuttinen lähestymistapa syövän hoidossa, mukaan lukien haimasyöpä. Kuitenkin solun jakautuminen näiden reseptorien ensisijainen haimasyövän näytteitä ei ole riittävästi tutkittu, eikä tutkimus on vielä käsitellyt heidän ennustetekijöiden merkitystä tässä kasvain kokonaisuus.

Tavoitteet ja menetelmät

hakeminen kudos microarray (TMA) analyysi, teimme immunohistokemiallinen arviointi TRAIL-reseptorien kirurginen näytteissä 84 peräkkäisen sairastuneiden potilaiden haiman adenokarsinooma ja 26 ylimääräistä valittu näytteitä potilaista, joilla ei imusolmukkeiden etäpesäke aikaan leikkauksen. Prognostisia merkitys solukalvojen värjäytymistä ja värjäytymisen intensiteetti TRAIL-reseptorien arvioitiin.

Tulokset

osa haimasyövän näytteiden positiivinen kalvo värjäys TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 oli pienempi kuin että soluja ympäröivistä kuin tuumorikudoksista (TRAIL-R1: p 0,001, TRAIL-R2: p = 0,006). Lisäksi alaryhmä analyysit osoittivat, että menetys kalvon värjäytymistä TRAIL-R2 oli yhteydessä heikompaan ennusteeseen potilailla, joilla ei solmukohtien etäpesäkkeitä (Coxin monimuuttuja regressioanalyysi, riskisuhde: 0,44 [95%: n luottamusväli: 0,22-0,87]; p = 0,019) . Sen sijaan analyysi houkutuslintujen reseptorien TRAIL-R3 ja R4 Tuumorinäytteissä osoitti yksinomaan sytoplasmaattinen värjäyskuvion eikä ennustetekijöiden merkitystä.

Johtopäätös

Tämä on ensimmäinen raportti ennustetekijöiden merkityksestä TRAIL-reseptorien ilmentyminen haimasyövän osoittaa, että TRAIL-R2 saattaa merkitä ennustetyövälineenä merkkiaine varhaisvaiheen potilaiden tauti. Lisäksi meidän tiedot osoittavat, että menetys membraaniin sitoutunut TRAIL-reseptorit voisivat edustaa molekyylimekanismiksi hoidon epäonnistumiseen antamisen jälkeen TRAIL-reseptorien kohdistaminen vasta-aineiden haimasyöpä. Tämä hypoteesi olisi arvioitava tulevaisuudessa kliinisissä tutkimuksissa.

Citation: Gallmeier E, Bader DC, Kriegl L, Berezowska S, Seeliger H, Göke B, et al. (2013) menetys TRAIL-reseptorit on toistuva Feature in Haimasyöpä ja määrittää prognoosi Potilaat, joilla ei solmukohtien Etäpesäke leikkauksen jälkeen. PLoS ONE 8 (2): e56760. doi: 10,1371 /journal.pone.0056760

Editor: Emilio Hirsch, University of Torino, Italia

vastaanotettu: 20 heinäkuu 2012; Hyväksytty: 14 tammikuu 2013; Julkaistu: 27 helmikuu 2013

Copyright: © 2013 Gallmeier et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) avustuksiin DFG TO 605 /2-1 EDT ja DFG GA762 /3-2 EG ja jonka Else Kröner-Fresenius Stiftung kanssa avustuksen 2011_A226 on EDT. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Haimasyöpä on neljänneksi suurin syy syöpään liittyvät kuolemat teollisuusmaissa kokonaispituudeltaan viiden vuoden eloonjääminen keskimäärin alle 5% ja keskimääräinen eloonjäämisaika noin kuuden kuukauden [1]. Sen aggressiivinen biologia, ettei varhain oireita ja puuttuminen luotettavia seulontamenetelmiä ovat vastuussa pitkälle tämän taudin aikaan diagnoosi. Kumpikaan viimeaikaiset parannukset kirurgisten toimenpiteiden eikä radio- tai solunsalpaajahoitojen ole vielä johtaneet merkittävää parannusta potilaan selviytymistä. Näin ollen merkittäviä ponnisteluja on sitoutunut kehittämään uusia ja rationaalinen hoitomenetelmät, jotka kohdistuvat kriittiset molekyylitason ominaisuuksia tässä kasvain kokonaisuus.

Viime vuosina hallinnon agonistinen vasta kohdistaminen reseptorit TNF-sukuinen apoptoosia aiheuttavien ligandi (TRAIL) on ennalta kliinisesti osoitettu edustamaan lupaava terapeuttinen avenue, joka on tällä hetkellä kliinisissä tutkimuksessa lukuisissa kasvaimen yhteisöt kuten haimasyöpä [2] – [6]. TRAIL: lla on rooli erilaisia ​​biologisia prosesseja, mukaan lukien apoptoosin syöpäsoluissa sitoutumisen reseptoreihinsa ulomman solukalvon. Erityisen tärkeää, on osoitettu, että apoptoosin laukaisi TRAIL on kriittinen rooli kasvainten valvonta saamalla immuunivälitteisiä puhdistumaan metastaattisen solujen TRAIL-knockout-hiirissä esiintyy suurempaa etäpesäkkeiden muodostumista [7], menetys TRAIL-reseptorin-ilmentyminen liittyy huonoon ennusteeseen ja kasvaimen uusiutumisen potilailla, jotka kärsivät erilaisia ​​kasvaintyyppien [8], ja ilmentyminen TRAIL-sitoutumisen liukoinen valereseptori osteoprotege- korreloi kasvaimen vaiheen ja etäpesäkkeiden muodostumista peräsuolen syöpäpotilailla [9], luoda vahva perusta kehittämiseen TRAIL-reseptorien kohdistamisen yhdisteiden terapeuttinen syövän vastaista strategiaa.

huolimatta kasvava kiinnostus perävaunu reseptorit kuten terapeuttisena kohteena syövässä, tutkimuksia ilmaisun, jakauma ja merkitystä TRAIL-reseptorit kuten ennustetekijöiden merkkiaineiden haimasyövän ei vielä ole. Erityisesti tiedetään vähän ilmaisun ja toiminnallinen saatavuus erillisten TRAIL-reseptorit pinnalla haimasyöpäsoluissa huolimatta saatavuus agonistinen vasta kohdistaminen joko TRAIL-R1 tai TRAIL-R2 nykyisin käytetään kliinisissä kokeissa. Soveltamalla kudos-microarray joka arvioi TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 ilmentymistilanne suuressa kohortissa kirurgisten yksilöiden haiman adenokarsinooma, huomasimme, että menetys solukalvojen värjäytymistä näiden reseptorien on yhteinen piirre haimasyöpä. Näin ollen, ei ole onnistuttu saavuttamaan terapeuttinen vaikutus käyttäen TRAIL-reseptorien kohdistaminen yhdisteiden kliinisissä tutkimuksissa voi johtua puute valinta potilaille, joilla on kasvaimia, jotka ilmentävät kalvoon sitoutunutta TRAIL-reseptorit. Lisäksi menetys membraaniin sitoutunutta TRAIL-R2 kasvaimia potilailla, joilla ei solmukohtien etäpesäkkeitä aikaan diagnoosi liittyy huonoon ennusteeseen meidän kohortissa, mahdollisesti luoda TRAIL-R2 prognostinen markkeri tietyissä haimasyövän potilaille.

Potilaat ja menetelmät

Ethics lausunto

suuntaviivojen mukaan meidän yliopisto, immunohistokemiallisella värjäyksellä arkistoidut kudosnäytteitä voidaan suorittaa edellyttäen, että nimettömyys on myönnetty. Siksi hyväksyminen tässä tutkimuksessa oli luopunut eettinen komitea Münchenin yliopiston ja kirjallista suostumusta vaadittiin.

Case tunnistaminen, valinta ja Potilaiden seuranta

Potilaat, joilla on histologisesti varmennettu haiman adenokarsinooma, joka leikattiin haimasyövän (Whipple menettely, distaalinen pancreatectomy tai yhteensä pancreatectomy) laitoksella kirurgian Ludwig-Maximilians-University of Munich välillä 31 tammikuu

st, 2003 ja 14 kesäkuu

th, 2007, katsottiin kudosten microarray (TMA) rakentaminen. Toisessa vaiheessa, tämä potilaiden kollektiivisen oli peräkkäin laajennettiin sisällyttämällä ylimääräinen 26 peräkkäisen potilailla, joilla ei solmukohtien etäpesäkkeitä läpikäymässä leikkaus saakka 7 lokakuu

th 2011, jotta erityisen arvioinnin ennustetekijöiden merkitys TRAIL-reseptorien määritettäessä uusiutumisen riskiä jälkeen radikaali resektio. Kaikki ennusteeseen viittaavia kerättiin tietokannasta Münchenin Syöpärekisterin ja alkuperäinen potilaiden kaavioita.

Tutkimuksessamme suurin osa potilaista (98 110, 89%) sai adjuvanttihoito kuten gemsitabiini, joko monoterapian (n = 35) tai yhdessä sädehoidon (n = 50) ja /tai muita aineita, kuten 5-fluorourasiili, oksaliplatiinia ja sisplatiini.

TMA Hakemisto Rakentaminen

parafinoidut arkistoitu kudos materiaali kasvaimen ja ympäröivän normaalin haiman kudosta käytettiin TMA rakentamiseen. TMA valmistettiin julkaistu ennen [10]. Lyhyesti sanottuna kiinnostava alue, josta näyte otetaan tunnistettiin ja merkitty hematoksyliini- eosiinilla värjättyä kudosta dioja. Vastaavasta parafiiniblokkiin (luovutuslohkon), kudoksen ydin koepaloja (kukin 0,6 mm halkaisijaltaan) otettiin pois ja sitten puettu vastaanottajan TMA lohko manuaalisella ryhmittäjällä (Beecher Instruments, Sun Prairie, WI). Jokainen tapaus edusti kolme keskeistä koepalat eri puolilla haimakarsinooma- ja kaksi keskeistä koepalat vastaavassa normaalissa haimakudoksesta jättää artefakteja johtuen heterogeeninen antigeenin ilmentymisen ja sallimaan vertailun normaalin exocrine haimakudoksesta ja kasvainkudoksen. Immunohistokemia suoritettiin 2 pm osiin TMA.

immunohistokemiallinen värjäys

5 um: n leikkeitä TMA lohkoja käytettiin immunohistokemiallisella värjäyksellä. Anti-TRAIL R1 polyklonaalista vuohen vasta-ainetta (Santa Cruz Biotechnology Inc., Heidelberg, Saksa) ja anti-TRAIL R2 polyklonaalista kanin vasta-ainetta (Calbiochem, CA, USA) sovellettiin ensisijaisena vasta-aineita. Molemmat vasta-aineet oli aiemmin validoitu immunohistokemialla TRAIL-reseptorien laboratoriossamme [8]. Sillä antigeeni haku, kohdat esikäsiteltiin keittämällä mikroaaltouunissa 2 kertaa 15 minuuttia 750 W Target Retrieval Solution (Dako, Hampuri, Saksa). Endogeeninen peroksidaasi estettiin inkuboimalla 7.5% vetyperoksidia 10 minuuttia. Vectastain ABC-Kit Elite Universal (Vector Laboratories, CA, USA) sarja otettiin vasta-aineiden havaitsemista ja AEC (Zytomed Systems) käytettiin kromogeeniä. Objektilasit vastavärjättiin hematoksyliinillä (Vector). Arviointiin decoy-reseptorien TRAIL-R3 ja TRAIL-R4 seuraavia vasta-aineita käytettiin: TRAIL-R3 polyklonaalista kanin vasta-ainetta (Gene Tex, CA, USA) ja TRAIL-R4 hiiren monoklonaalinen vasta-aine (US Biology, MA, USA). Positiivista värjäytymistä TRAIL-reseptorien ensin luokiteltu sen solun jakautuminen ja riippumatta intensiteetti signaalin seuraavasti: positiivista värjäytymistä sytoplasmassa vain positiivista värjäytymistä solukalvon vain, ja positiivista värjäytymistä sekä solukalvon ja sytoplasmaan. Tilastoanalyyseihin, kasvaimet näytteille TRAIL-reseptorien värjätä solukalvojen ( ”kalvo värjäytymistä” ryhmä) verrattiin tuumoreihin TRAIL-reseptorit värjäys tai TRAIL-reseptorien ilmentyminen rajoittuu sytoplasmaan vain ( ”no solukalvojen värjäytymistä” ryhmä) mukaan perustelut että TRAIL-reseptorit ovat toiminnallisesti aktiivisia vain, jos sijaitsevat pinnalla solukalvojen [11]. Lisäksi teimme semikvantitatiivinen analyysi haimasyövän näytteiden nimeämällä pisteet riippuen yleisestä TRAIL-reseptorit värjäyksen intensiteetti (0: ei värjäystä, 1+ alhainen värjäytymisen intensiteetti, 2+ korkea värjäytymisen intensiteetti).

tilastot

Kokonaiselossaoloaika määriteltiin aikaväli alkaen leikkauksen kuolemaan tai viimeisimmän yhteystiedot (for sensuroitu tapahtumat) 1. syyskuuta

st, 2012. Categorical tietoja verrattiin Chi -Square tai Fisherin testejä, jatkuvan datan verrattiin t-testin. Kaiken eloonjäämismediaani kertaa arvioitiin käyttämällä Kaplan-Meier-menetelmällä. Log-rank-testi käytettiin testaamaan homogeenisuuden eloonjäämiskäyrien. Yhden ja usean Coxin suhteellisten riskien mallia käytettiin vaikutusten arvioimiseksi muuttujien eloonjäämiseen. Seuranta juoksuaika oli validoitu arvioinnin seuranta käyrät elävän potilaiden pyritty varmistamaan seurannan aikoina eloonjäämiskäyristä välillä vastaavien riippumattomien [24]. Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen tilastollista paketti Sciences ohjelmisto (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Kaksipuolinen

P

arvot alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Potilaiden valinta ja sekä kliinis-

84 peräkkäisen Histologisesti vahvistettu haiman adenokarsinooma, joka leikattiin haimasyövän laitoksella kirurgian Ludwig-Maximilians-University of Munich välillä 31 tammikuu

st, 2003 ja 14 kesäkuu

th, 2007, tunnistettiin. Koska ilmaus TRAIL-reseptorien on osoitettu vaikuttaa kemoterapian ja sädehoidon [12] – [14], potilailla, jotka saivat neoadjuvanttikemoterapian tai neoadjuvant säteilytys ei otettu huomioon tilastolliset analyysit. Lisäksi potilaat, jotka kuolivat seurauksena välittömän leikkauksen jälkeisiä komplikaatioita ja potilaille, joille ei ole seuranta ollut saatavilla suljettiin.

Jos histologista tiedot puuttuivat (TRAIL-R1:5 normaalin kudosnäytteiden, TRAIL-R2:9 normaali kudosnäytteitä ja 5 kasvain kudosnäytteitä) vain vastaavia näytteitä harkitaan vertailua kategorisen datan välillä normaalin ja kasvaimen kudoksissa. Kaikki potilaat valittiin tähän tutkimukseen (n = 84) oli täydellinen seurantaan joko kuolemaan saakka (n = 72) tai kunnes heidän viimeisimmät yhteystiedot (n = 12) 1. syyskuuta 2012. lyhin seurannassa leikkauksen jälkeen potilaat yhä elossa 1. syyskuuta

st 2012 oli 62,6 kuukautta. Pisin seurannan potilaille vielä elossa oli 106,5 kuukautta. Mediaani potilaan ikä aikaan leikkaus oli 65 vuotta (vaihteluväli 32-81). Yhteenveto viittaavia tekijöitä tämän potilaan kohortin on esitetty taulukossa 1. Toisessa vaiheessa, potilaiden kollektiivisen laajennettiin lisäämällä 26 peräkkäisen potilailla, joilla ei ole solmukohtien etäpesäkkeitä aikaan kirurgisen toimenpiteen jotka käsiteltiin seuraavien kolmen vuoden aikaväli, kunnes 7 lokakuu

th 2011. yhteenveto clincopathological piirteitä Ei potilaiden alaryhmä annetaan taulukossa S1.

immunohistokemiallinen värjäys TRAIL-reseptorit 1 ja 2 haimasyöpä ja osuvan ympäröivien kudosten

sen arvioimiseksi TRAIL-reseptorit asemasta haimasyövän näytteiden ja Hyväksytty ympäröivään kudokseen, ensin suoritti semikvantitatiivinen analyysi TRAIL-reseptorien-1 ja -2 värjäys voimakkuus riippumatta niiden solujen jakelu soveltamalla intensiteetti värjäyksen pisteet väliltä 0 2.

Positiivinen värjäytyminen TRAIL-R1 todettiin 77% kasvaimen näytteistä ja 89% Hyväksytty ympäröivään kudokseen. Sen sijaan, positiivista värjäytymistä TRAIL-R2 havaittiin 99%: lla sekä kasvaimen näytteiden ja sovitettu ympäröivän haiman kudoksen (taulukko S2). Kuitenkin, kun arvioidaan värjäystä intensiteetin TRAIL-R2, tämä reseptori näytti olevan alhaisempi värjäytymistä kasvain kudosnäytteitä verrattuna sovitetun kuin kasvainkudoksen, jossa suurin osa ei-kasvain näytteet osoittavat korkean intensiteetin-värjäyksen (korkean intensiteetin-värjäytymisen ei-kasvain kudosnäytteistä = 71% vs. 48% kasvaimen kudosnäytteiden – McNemar-Bowker testi: p = 0,021, taulukko S2). Mitä suurempi osuus kasvaimen näytteistä osoittaa negatiivisen värjäyksen TRAIL-R1 ja koko suurempi intensiteetti värjäytymisen sijoituksen TRAIL-R2 ei-Tuumorinäytteissä osoittaa tappiota TRAIL-reseptorien ilmentyminen Tuumorinäytteissä vs. täsmäsi kuin kasvain kudosnäytteitä.

Seuraavaksi analysoimme spatiaalinen solunsisäisen jakautumisen TRAIL-reseptorien ottamalla huomioon murto-osa soluista syövän ja ympäröivän ei-tuumorikudoksissa sen mukaan, onko immunohistokemiallinen analyysi osoitti sytoplasmista värjäytymistä, kalvo värjäys tai molempia. Edustavia lukuja eri värjäytymiskuvioissa TRAIL-R2 esitetään (kuva 1). Tärkeää on, TRAIL-R1 positiivisesti kalvon värjäytymistä 84% normaalista ympäröivän haiman kudosnäytteitä, mutta vain 44%: lla haimasyöpä näytteitä, kun taas TRAIL-R2 positiivisesti kalvon värjäytymistä 99% normaalista ja 81% haimasyöpä näytteiden ( kuva 2). Siten osa näytteistä näytteille kalvon värjäytyminen oli merkittävästi vähemmän syöpään kuin Hyväksytty ympäröivä normaaleissa kudoksissa (McNemar testi: TRAIL-R1: p 0,001; TRAIL-R2: p = 0,006).

Mittaviivat edustavat 50 pm.

Suhteellinen näytteiden näkyvissä mitään värjäytymistä (ei mitään), sytoplasmaattinen värjäys (solulimassa vain), kalvo värjäys (kalvo vain) tai molemmat (m + c).

korrelaatio TRAIL-reseptorien värjäys kliinis-kasvainkudosnäytteet ja Ympäröivät Normaali haimakudoksesta

sen arvioimiseksi, onko TRAIL-reseptorit värjäys tuumorinäytteissä ja sovitettu ei-kasvain kudosnäytteistä liittyi erityisiä kliinis-, kalvo värjäys TRAIL-reseptorien korreloi kliinisten ja patologisten ominaisuuksien kasvainten, kuten luokittelua, koko ja pysähdyspaikan kasvainten, läsnäolo tai puuttuminen kasvaimettomina marginaalit jälkeen kirurgisen resektion ja post-interventionaalisen soveltamista radio- ja /tai kemoterapian. Ei kuitenkaan ole merkittäviä korrelaatioita välillä havaittiin TRAIL-reseptorien värjätä solukalvojen haimasyövän (taulukko 2) tai ympäröiviin soluihin (ei esitetty), ja kaikki edellä mainitut ominaisuudet. Samoin analyysit korreloivat nämä parametrit värjäytymisintensiteettiä TRAIL-reseptorien riippumatta solun jakautuminen ei osoittanut mitään merkittävää yhteyttä (tuloksia ei ole esitetty).

Prognostic merkitys TRAIL-reseptorien Värjäysmenettely potilailla, joille Leikkaus

Kuten odotettua, Kaplan-Meier ja yhden muuttujan Coxin regressioanalyyseissä osoittanut imusolmukkeiden (nro vs. N1), etäpesäkkeitä (M0 vs. M1) ja kasvaimen kokoa (mediaani, 3,5 cm verrattuna ≥3.5 cm ) edustaa merkittävää determinantteja kokonaiselinaika (kuva S1, taulukko 3). Sen sijaan ei ole yhteyttä ei havaittu välillä eloonjäämiseen ja membranous ilmentyminen TRAIL-R1 tai TRAIL-R2, vastaavasti (Kaplan-Meier log rank testi: TRAIL-R1: p = 0,842, TRAIL-R2: p = 0,176, kuva 3A ja 3B). Samoin analyysit ositettiin potilaiden mukaan semikvantitatiivinen arvio TRAIL-reseptorien värjäys voimakkuus riippumatta solun jakautuminen (pisteytys alueella 0 2+) ei tuottanut merkittäviä selviytymisen eroja (Kaplan-Meier pitkä rank testi: TRAIL-R1: p = 0,279; TRAIL-R2: p = 0.339- tietoja ei ole esitetty). Kuitenkin alaryhmä analyysit paljastivat, että potilailla, joilla ei solmukohtien etäpesäkkeitä aikaan leikkauksen oli parempi ennuste, jos kalvoon sitoutunut värjäytymistä TRAIL-R2 oli positiivinen (HR: 0,30 [+0,12-,76]; p = 0.011- tietoja ei ole esitetty), kun taas mitään merkittäviä yhdistyksiä löytynyt kalvoon sitoutuneita TRAIL-R1 ilmaisun ja selviytymistä tässä alaryhmässä (HR: 1,21 [0,58-2,54], p = 0,608). Tueksi hankittuja tietoja TRAIL-R2, monimuuttujamenetelmin lukien liittyvät muuttujat yleistä selviytymistä yksiulotteista analyysien kanssa p 0,2, osoitti, että TRAIL-R2 solukalvojen värjäytyminen oli riippumaton tekijä eloonjäämisen tässä alaryhmässä (laskettu HR: 0,36 [ ,,,0],0,14-0,91], p = 0,031).

Käyrät osoittavat selviytymisen mukaan TRAIL-R1 solukalvojen värjäytymistä (A), TRAIL-R2 solukalvojen värjäytymistä (B) ja alaryhmäanalyysi selviytymisen mukaan TRAIL-R1 (C ) ja TRAIL-R2 (D) solukalvojen värjäytymistä potilailla, joilla ei ole solmukohtien etäpesäkkeitä aikaan leikkauksen.

Tukeakseen meidän tuloksia ei väestöön, me laajennettiin myöhemmin koskemaan koko tämän alaryhmä sisältää 26 ylimääräistä Ei potilaille, jotka leikattiin haimasyövän kolmen vuoden ajan sen jälkeen, kun edellisen TMA kollektiivinen. Analyysi selviytymisen laajennetun osajoukko yhteensä 58 potilasta vahvisti, että vain kalvon värjäytymistä TRAIL-R2 liittyi parempi eloonjääminen (yhden muuttujan analyysi: TRAIL-R1: HR 1,22 [+0,66-+2,25], p = 0,514; TRAIL-R2 ( HR 0,45 [0,22-0,88], p = 0.019- kuvio 3 C, D). Monimuuttuja-analyysi, mukaan lukien liittyvät muuttujat yleistä selviytymistä yksiulotteista analyysien kanssa p 0,2 (eli sukupuoli, ryhmittely, mediaani kasvaimen koon, ja perävaunu R2 kalvo värjäys) vahvisti riippumaton ennustetekijöiden merkitys kalvon värjäytymistä TRAIL-R2 tässä alaryhmässä (oikaistu kaikkien: HR 0,47 [0,23-0,96], p = 0,041; taaksepäin poistaminen: HR 0,44 [0,22-0,87], p = 0,019 ).

Värjäys ja Cellular jakelu Decoy reseptorit TRAIL-R3 ja TRAIL-R4 haimasyöpäsoluissa

Decoy reseptorit TRAIL ovat osoittautuneet rooli patogeneesissä kasvainten paljastui julkaisemissa raporteissa aiemmin meidän ja muiden laboratorioiden [9], [15], [16], mutta tällä hetkellä ei ole tietoa ennustetekijöiden merkityksestä houkutuslintuna reseptorit TRAIL haimasyövän on käytettävissä. Tutkia mahdollisuuksia näiden reseptorien roolin antagonoimaan vaikutuksia TRAIL-R1 ja -R2, lisämäärityksistä tehtiin ja TRAIL-R3 ja TRAIL-R4 värjäystä Tuumorinäytteissä meidän potilaiden kollektiivista arvioida. Suostumuksella edelliseen raporttien meidän analyysit osoittivat positiivista TRAIL-R3 ja TRAIL-R4 värjäytymisen 52% ja 69% kasvaimen näytteistä vastaavasti, ja korkean intensiteetin värjäytymisen 10% ja 16% tapauksista vastaavasti. Kuitenkin värjäytyminen näiden reseptorien rajoitettiin yksinomaan sytoplasmaan ja ollut ennustetekijöiden merkitystä meidän kohortin (TRAIL-R3: HR 0.95 [+0,59-1,51], p = 0,840; TRAIL-R4: HR 1,06 [0,64-1,76], p = 0,806).

keskustelu

Kohdennetut Therapies ja TRAIL-signaloinnin Haimasyöpä

Tunnustamalla roolin TRAIL-välitteisen apoptoosin prosessissa immuunivalvonnan torjua kasvainmuodostusta on johtanut kehittämiseen ja kliiniseen työhön TRAIL-reseptorien kohdistaminen yhdisteet syöpähoitojen; tällä hetkellä, monoklonaalisia vasta-aineita suunnattu TRAIL-R1 (esim mapatumumab [17]) tai TRAIL-R2 (esim. tigatuzumab [18]), tai yhdistelmä-DNA-muotoja ihmisen TRAIL [19], on meneillään laajaa kliinistä tutkimusta. Vaikka pelkkä ilmaus reseptorit TRAIL ei edusta pelkästään determinantti vastaus apoptoottinen vaikutus TRAIL [20], on todennäköistä, että näiden yhdisteiden tehoa tulee toimia TRAIL-reseptorin ilmentymisen riippuvalla tavalla yksittäisten kasvaimia. Yllättäen kuitenkin, kun taas usein menetys TRAIL-reseptorien on raportoitu useita kasvaimen yhteisöt voisivat haitata kliininen tehokkuus näiden yhdisteiden [8], [21] – [23], eikä suuria systemaattista raportti alueellisen solun jakautuminen sekä varoituksia merkitys TRAIL reseptorien haimasyövän on vielä saatavilla (tarkistetaan [3]). Lisäksi, vaikka varhaisessa vaiheessa kliinisten tutkimusten TRAIL-reseptorien kohdistamisen yhdisteitä tai vasta-aineita ovat juuri aloitettu potilailla, joilla on haimasyöpä, tulokset kliinisissä tutkimuksissa TRAIL-reseptorien kohdistamisen yhdisteiden peräsuolen ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä on osoittanut pettymys tulokset [17], [19], jossa kehotetaan ajoissa selventäminen roolin näiden aineiden kiinteiden tuumorien hoidossa.

Värjäys ja solunsisäinen lokalisaatio TRAIL-reseptorien kasvaimet Versus Ympäröivät Haiman kudokset

Kun tarkastellaan kokonaisuutena värjäytyminen kasvaimen ja vastaaviin normaaleihin haiman näytteitä havaittiin, että lähes kaikki näytteet värjättiin positiivisia TRAIL-R2; sen sijaan, TRAIL-R1 värjätty negatiivinen 23% kasvaimen näytteistä ja 11% vastaaviin normaaleihin haiman näytteitä. Menetys TRAIL-R1 värjäystä kasvainsoluissa verrattuna yhteistyössä värjätty ympäröivän ei-tuumorikudoksista samasta potilaasta on samaa mieltä aiempien raporttien muissa elimissä yksiköt [23], [24] ja

in vitro

todisteita, jotka osoittavat, että menetys TRAIL-reseptorien haimasyövän solulinjoissa myötävaikuttaa vähentyneeseen herkkyyteen TRAIL-indusoidun apoptoosin [25]. Kuitenkin ainoa julkaistu tutkimus yleisyydestä TRAIL-reseptorien haimasyövän osoitti ylössäätely TRAIL-R1 38 haimasyövän näytteitä verrattuna 31 hyvänlaatuisen haimatiehyen kudosnäytteitä verrokeilla [26]. Useista syistä erilaiset tulokset Tässä tutkimuksessa saadut vs. Tutkimuksessamme myös alempaa potilasnumero toisessa kohortissa, lähde ja edustavuus näytteiden (osittain koepaloja toisessa tutkimuksessa verrattuna yksinomaan kirurgisista näytteistä tutkimuksessamme), ja sisällyttäminen (11 34 potilasta) verrattuna sulkeminen potilaat olivat saaneet neo-adjuvanttihoito sekä se, että ilmaus TRAIL-reseptorien lisääntyy kemo- /tai sädehoidon [27], [28].

Useimmat aiemmat raportit TRAIL-reseptorit sen erilaisissa kasvaimen yksiköiden perustuivat puolikvantitatiivinen kriteerien [22], [26], [29]; Kuitenkin viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että erityisesti Saharan sijainti solun TRAIL-reseptorien saattaisi vaikuttaa niiden toimintaan; Erityisesti, kun taas sisäistämisen pro-apoptoottisten reseptori CD95: lla on stimuloiva rooli transduktion apoptoottisten signaloinnin, internalisaatioon TRAIL-reseptorien estää kaspaasi aktivaation [30]. Olemme hiljattain ehdottaneet, että TRAIL-reseptorien ilmentyminen olisi arvioitava analysoimalla osa kalvoon sitoutuneiden TRAIL-reseptorit, logiikalla arvioinnin osa TRAIL-reseptorien tehokkaasti altistaa kiertävän TRAIL kuin muka hallitseva ennustetekijöiden tekijä [8]. Näin ollen meidän pitää paitsi värjäytymisen intensiteetti, mutta myös solunsisäistä jakelua värjäystä, ts osa kasvainten jolla TRAIL-reseptorien värjätä solukalvojen tutkimukseen. Olemme havainneet, että 56% kasvaimen näytteistä ei ollut mitään solukalvojen värjäytymistä varten TRAIL-R1 ja 19% TRAIL-R2 laajuus solukalvojen värjäytymistä vaihtelevat käänteisesti kanssa sytoplasmaattinen värjäys, mikä viittaa siihen, että sisäistäminen TRAIL-reseptorien voisi olla mekanismi menetyksen funktionaalisten TRAIL-reseptorien erottavaksi ominaisuudeksi haiman syöpäsoluja, hypoteesi äskettäin tukevat muut tutkimukset

in vitro

[11], [31].

Prognostic vaikutus TRAIL-reseptorit Expression in haimasyöpä

Sen arvioimiseksi, onko menetys kalvoon sitoutuneiden TRAIL-reseptorit ehkä prognostista merkitystä, me myöhemmin korreloi TRAIL-reseptorit värjäämisen selviytymistä. Viiden vuoden eloonjääminen potilaiden kätkeminen kasvaimia näytteille TRAIL-R1 tai TRAIL-R2 ei merkittävästi poikkea muista potilaista. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin kerrostamiselimen potilaat mukainen TRAIL-reseptorit intensiteetin värjäyksen tulokset. Kuitenkin kalvo värjäytymistä TRAIL-R2 liittyi parempaan ennusteeseen alaryhmässä potilailla, joilla ei solmukohtien etäpesäkkeitä aikaan leikkauksen, joka on yhdenmukainen äskettäin todisteita siitä, että osa kalvoon sitoutuneiden reseptorien määrää heidän toimintakunto [11], [31] ja sillä on ennustetekijöiden rooli potilailla, joilla maksasyövän [8].

Vaikka emme löytäneet mitään erityistä korrelaatiota TRAIL-reseptorien ilmentymisen ja kasvainten vaiheessa meidän kohortin että TRAIL-reseptorit ilme oli ei liity mihinkään patologiseen parametri tukee oletusta, että sen sijaan vaikuttavat kasvain aloittamista menetys TRAIL-reseptorien voi vaikuttaa syövän etenemiseen myöhemmin johtuen valintaan solukloonien resistenttejä verenkierrossa TRAIL ja immuunivälitteisiin sääteleviä mekanismeja puhdistumaan metastaattinen soluihin [32], [33]. Siten välisen korrelaation puuttuminen TRAIL-reseptorien asema ja ennusteen potilailla, joilla on etäpesäkkeitä aikaan leikkaus on todennäköisesti syyksi muihin vallitseva etäpesäkkeiden määrittäviä tekijöitä kumoavat vaikutukset TRAIL-reseptorien menetys myöhemmissä vaiheissa. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että apoptoosin etusijassa laukaistaan ​​haiman syöpäsoluissa TRAIL-R1 erityisesti yhdessä XIAP estäjien, kun taas stimulaatio TRAIL-R2 edellyttää rajat yhdistävät tehokkaasti apoptoosin induktion [34]. Nämä tiedot viittaavat siihen, että TRAIL-R1 olisi ensisijaisen tavoitteen TRAIL-R-kohdistaminen aineina haimasyövän. Tuloksemme osoittavat alempaa yleisyys kalvo värjäytymisen TRAIL-R1 vs. TRAIL-R2 näyttävät vahvistavan, että menetys funktionaalisten TRAIL-R1 on merkittävä askel syövän. Kuitenkin, prognostisia merkitystä TRAIL-R2 potilailla, joilla ei ole etäpesäkkeitä aikaan leikkauksen viittaa siihen, että tämä reseptori voi käyttää fysiologinen rooli kasvaimen vaimennin tässä vaiheessa kasvaimen kehittymisen.

vastustusta positiivinen prognostisia merkitys TRAIL-R2, löysimme mitään korrelaatiota TRAIL-R3 tai TRAIL-R4 ja selviytymistä. Decoy reseptorit TRAIL ovat osoittautuneet rooli patogeneesissä kasvainten paljasti raportit haitallinen ennustetekijöiden vaikutuksen TRAIL-R3 ilmentymistä kolorektaalisyövässä [15] tai TRAIL-R4 rintasyövän [16], ja meidän aiemmin julkaistua tietoa roolista liukoisen valereseptori OPG määritettäessä vastuksen apoptoosin peräsuolen syöpäpotilailla [9]. Meidän todetaan, että TRAIL-R3 ja TRAIL-R4 värjäystä Tuumorinäytteissä esiintyy ainoastaan ​​sytoplasmassa on yhtä mieltä aiempaan toteamukseen positiivinen värjäytyminen TRAIL-R1 ja -R2, mutta merkityksetön värjäytymistä TRAIL-R3 ja R4 voivat olla löytyy pinnalla eri haimasyövän solulinjoissa FACS-analyysillä [34]. Jatkotutkimuksissa on arvioitava, onko puuttuminen kalvon värjäytymistä TRAIL-R3 ja -4 saattaa heijastaa puute ennustetekijöiden merkitystä näiden reseptorien haimasyövän toisin kasvaimen yhteisöt, joihin negatiivinen korrelaatio eloonjääminen osoitettiin.

kliiniset seuraukset TRAIL-reseptorien tappio haimasyöpäsoluissa

kliinisessä seurauksena usein toiminnallinen menetys TRAIL-reseptorien haimasyövän voi edustaa se, että monet haiman kasvaimet eivät reagoi Erityisellä agonistinen vasta kohdistaminen joko TRAIL-R1 kuten Mapatumumab tai TRAIL-R2 kuten Tigatuzumab [27]. Siksi kliinisten tutkimusten perusteella antaminen tällaisten aineiden joutua ottamaan tilan kunkin kalvon värjäytyminen huomioon.

mekanismia, joilla TRAIL-reseptorit menetetään kasvainsoluissa ei ole vielä täysin ymmärretty. Geneettinen menetys tai mutaatio TRAIL-reseptorien on harvinainen tapahtuma syöpäsoluissa, keskimäärin 1% maksasolukarsinoomassa [21], [35], ja on poissa haimasyövän laajamittainen kattava geneettisiä analyysejä [36], [37] . Lisäksi, kuten useita yhdisteitä [11], [38] – [42] voi lisätä TRAIL-reseptorien ilmentymisen tai valotuksen solukalvon epigeneettiset geenien ja TRAIL-reseptorit sisäistämisen ilmoittavat mahdollisesti palautuvia mekanismi menetys funktionaalisten TRAIL-reseptorien syöpä. Mikä tärkeintä, se on viime aikoina osoittanut, että hiljentäminen Hur täydentää TRAIL-R2 tuotanto mahdollistamalla sen käännös, täten parantaa TRAIL-välitteisen apoptoosin [43]. Siten kasvaimet näytetään negatiivinen kalvo värjäyksen TRAIL-reseptorit saattavat olla alttiita aineita, jotka kykenevät lisäämään TRAIL-reseptorien ilmentyminen, ja näin palauttaa tehoa endogeenisen TRAIL [44], [45].