Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Koska välttämätöntä osana PI3K /Akt /mTOR-reitin , nisäkkään rapamysiinin kohde (mTOR) on osoitettu lisääntyvän mahalaukun syövän solujen ja kasvaimia. Tutkimuksemme tutkittu suhdetta yhden nukleotidin polymorfismin (SNP) rs2295080 in

mTOR

promoottorialue ja mahalaukun syövän riski (GC).

Methods

seitsemänsadanviidenkymmenen -kolme (753) mahalaukun adenokarsinoomaa potilasta ja 854 terveisiin verrokkeihin rekrytoitiin syövän yhdistys tutkimuksessa ja 60 kudoksia käytettiin testaamaan ilmaus

mTOR

. Ehdoton logistinen regressio valittiin arvioimaan assosiaatiota rs2295080 T G-polymorfismi ja GC riski. Sitten tutkittiin toiminnallisuutta promoottorin geneettistä varianttia mukaan lusiferaasianalyysissä ja EMSA.

Tulokset

Yksilöiden G-alleelin oli 23% pienentynyt riski GC, vertaamalla niitä kuljettavat T-alleelin (oikaistu OR = 0,77, 95% CI = ,65-,92). Tämä suojaava vaikutus G-alleelin erottui paremmin miehen ryhmässä. Samaan aikaan, GC potilaat kuljettavat TG /GG-genotyyppi näytetään myös vähentynyt mRNA taso

mTOR

(

P

= 0,004). Lusiferaasin määrityksessä T-alleelin taipumus parantaa transkriptionaalista aktiivisuutta

mTOR

kanssa noin 0,5-kertainen verrattuna G-alleelin. Lisäksi EMSA testit selitti, että eri alleelien rs2295080 näytetään eri sukua joitakin transkriptiotekijä.

Johtopäätös

mTOR

promoottori polymorfismi rs2295080 oli merkitsevästi yhteydessä GC riski. Tämä SNP, joka tehokkaasti vaikuttaa ilmentymistä

mTOR

, voi olla uusi biomarkkereiden varhaisen diagnoosin mahalaukun syövän ja sopiva indikaattori hyödyntäen mTOR-estäjä hoidossa GC.

Citation: Xu M, Tao G, Kang M, Gao Y, Zhu H, Gong W, et al. (2013) polymorfismi (rs2295080) in

mTOR

promoottorialueen ja sen yhteys mahasyövän kiinalainen Population. PLoS ONE 8 (3): e60080. doi: 10,1371 /journal.pone.0060080

Editor: Paolo Peterlongo, IFOM, Fondazione Istituto FIRC di Oncologia Molecolare, Italia

vastaanotettu: 26 marraskuu 2012; Hyväksytty: 21 helmikuu 2013; Julkaistu: 29 maaliskuu 2013

Copyright: © 2013 Xu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus osittain tuettu National Natural Science Foundation of China (81230068, 30972444, 81001274 ja 81102089), Key Program of Natural Science Foundation of Jiangsun maakunnassa (BK2010080), Natural Science Foundation of Jiangsun maakunnassa (BK2011773 ja BK2012842), Key Program Basic Research Jiangsu Provincial Department of Education (11KJB330002 ja 12KJA330002), Qing-Lan Project Jiangsu Provincial Department of Education, ja Priority Academic ohjelmasuunnitteluosastolle Jiangsun korkeakouluista (terveys- ja ehkäisevän lääketieteen). Haluamme myös kiittää Luo Y (Nanjing Punaisen Ristin veripankki) hänen apua toiminnallisia kokeita. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet mitään eturistiriitoja.

Johdanto

Mahasyöpää (GC) on useimmin esiintyvä syöpä maailmassa miehillä kanssa 640556 ja naisten 349042 uutta tapausta ja 738069 liittyvät kuolemat vuonna 2008 [1]. Kun otetaan huomioon terapeuttisen tehokkuuden, kirurginen resektio voi olla ensisijainen parantavaa hoitoa varhaisemmissa GC potilaista [2]. Valitettavasti useimmat mahasyöpäpotilaista havaitaan pitkälle, jona aikana kasvain ovat leikattavissa enempää. Lisäksi uusiutuminen leikkauksen jälkeen on toinen kauhea tapahtuma huono 5 vuoden pysyvyys. Ottaen huomioon potilailla, joilla on pitkälle edennyt tai toistuvia mahasyöpä, ei ole epäilystäkään siitä, että löytö biomarkkereita ja niiden soveltaminen mukana perinteisiä diagnoosi voisi olla arvokas osoitus ja laaja ohje muotoilla ehkäisyä ja hoitoa strategiaa.

Mammalian tavoite rapamysiinin (mTOR) koostuu 2549 aminohaposta järjestetty erittäin konservoitunut domeeni [3]. Rakenteellisesti mTOR sisältää rapamysiinin sitovan domeenin sen keskiosassa ja kinaasidomeeni in C-päässä [4]. Koska keskeinen osa PI3K /Akt /mTOR-reitin, mTOR läheisesti merkitystä pääoman solun prosesseja, kuten solun kasvua, lisääntymistä, aineenvaihduntaa, muuttoliike, angiogeneesi, ja apoptoosin [5] – [7]. Tähän asti

mTOR

tuotteiden osalta kahtena erillisenä kompleksit (ts mTORC1 ja mTORC2) eri herkkyys [8], [9]. mTORC1 on rapamysiini-herkän kompleksin, joka sisältää mTOR plus FK506-sitovan proteiinin 12 kDa: n (FKBP12), nisäkkään LST8 (mLST8), ja sääntely liittyvä proteiini mTOR (raptor). Sen sijaan mTORC2 koostuu kanssa sin1, mLST8 ja rapamysiini erottelua kumppani mTOR (rictor) [10] – [12]. Häiriöstä

mTOR

usein esiintyy erilaisia ​​syöpiä aikana syövän synnyn ja heikkeneminen. Kuitenkin syitä tähän poikkeavalle ilmiötä vielä glutted kanssa keskusteluja.

Useat tutkimukset ovat tutkineet rooli yhden nukleotidin polymorfismien (SNP: t) on

mTOR

geeni etiologiassa syöpien eri elimissä, mukaan lukien ruokatorven syöpä [13], keuhkosyöpä [14], virtsarakon syöpä [15], paksusuolen syöpä, peräsuolen syöpä [16], ja akuutti lymfaattinen leukemia [17]. Useimmat näistä SNP sijoittumaan eksonien tai intronien tuntemattomia funktionaalisia vaikutuksia. Viime aikoina yhä useammat tutkimukset ovat keskittyneet SNP istuma-geenin promoottorialueen, jotka osoittautuivat vaikuttavan sitova kyky joitakin transkriptiotekijöitä (TF: t) ja vaikuttavat seuraavat geenin transkription. Tässä tutkimuksessa olemme arveltu, että

mTOR

rs2295080 T G polymorfismi promoottorialueella saattavat vaikuttaa alttiuteen GC. Tämän hypoteesin testaamiseksi, me genotyyppi taajuus

mTOR

rs2295080 testata sen merkitystä GC riskiä jatkuvaa, sairaala-pohjainen, tapauskontrollitutkimuksessa kiinalaisessa väestöstä. Näin ollen emme havainneet

mTOR

mRNA eri genotyyppejä kudoksissa mahalaukun syöpäpotilailla. Lisäksi olemme edelleen tunnettu toiminnallisuutta geneettinen muunnelma

mTOR

promoottori transkription lusiferaasianalyysissä ja EMSA.

Materiaalit ja menetelmät

Tutkimus aiheet

tutkimus käsitti 753 potilasta, joilla on histologisesti vahvistettu mahalaukun adenokarsinooman ja 854 syöpää vapaa valvontaa. Kaikki potilaat rekrytoitiin Cancer Clinical Research Base Nanjingin Medical University välillä maaliskuussa 2006 ja tammikuussa 2010. Ja kaikki demografiset ja kliiniset tiedot, kuten ikä, sukupuoli, kasvaimen koko, kasvainpaikkaa, histologisia tyyppejä, syvyys invaasio, imusolmuke etäpesäke, etäinen etäpesäke, ja TNM vaiheessa saatiin käyttämällä lyhyeen kyselyyn ja kliiniseen potilastietoja.

taajuus verrokit näihin tapauksiin iän (± 5 vuotta) ja sukupuoli kerättiin samana aikana ja alueiden jotka eivät liity geneettisen suhteen mahalaukun sairauksien ja ruoansulatuskanavan kasvaimet. Kukin osallistuja allekirjoittaneet kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen ja lahjoitti 5 ml laskimoverta varten genomisen DNA: n eristämiseksi. Tutkimus protokolla hyväksyi Institutional Review Board of Nanjingin Medical University.

DNA Extraction ja SNP genotyypin

Perimän DNA uutettiin verinäytteistä kuten aiemmin on kuvattu [18]. Genotyypin valmistui TaqMan SNP genotyypin määritys käyttäen ABI 7900HT reaaliaikaisia ​​PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ja Sequence Detection System versio 2.4 (SDS 2.4). Sekvenssit alukkeiden ja koettimien olivat saatavilla pyynnöstä, ja verrokit sisälsivät kullekin levylle tarkkuuden varmistamiseksi genotyyppitestien. Genotyypin määritys suoritettiin kaksi henkilöä itsenäisesti sokkotavalla. Yli 10% näytteistä valittiin satunnaisesti vahvistusta, ja tulokset olivat 100% yhtäpitävät. Alukkeita ja koettimia taulukossa S1.

Cell Culture ja rakentaminen Promoottori Reporter Plasmidit

Yksi normaali mahan limakalvon epiteelisolujen linja (GES-1) ja kolme erilaista mahasyövän solulinjoissa (BGC -823, MGC-803, ja SGC-7901) hyväksyttiin tähän tutkimukseen. Kaikki solut viljeltiin Dulbeccon modifioidussa Egalen Medium /korkea glukoosi elatusaineeseen, jossa oli 10% FBS: ää, 10 mM HEPES, 2 mM L-glutamiinia, 1 mM pyruvaattia natriumia, 100 U /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä 37 ° C: ssa kostutetussa ilmakehässä, joka sisälsi 95% ilmaa ja 5% CO

2. Useimmat reagenssit saatiin GIBCO (Burlington, Ontario, Canada).

lusiferaasireportteri plasmideja, ihmisen

mTOR

promoottorisekvenssejä eri alleelit rs2295080 T G-polymorfismi syntetisoitiin ja rakennettiin osaksi pGL3-basic vektorin (Promega, Madison, WI, USA) Generay Company (Shanghai, Kiina). Kaikki plasmidit varmistettiin DNA-sekvensoinnilla. Alukkeita mukana testissä oli lueteltu taulukossa S2.

Transient Transfektio ja lusiferaasimäärityssysteamiä

GES-1, BGC-823, MGC-803, ja SGC-7901-solut transfektoitiin Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), 0,8 ug kutakin rakennettu vektori, joko T-alleeli tai G-alleeli. Samanaikaisesti 10 ng PRL-SV40 kuoppaa kohti transfektoitiin myös sisäisenä kontrollina korjaamiseksi transfektion tehokkuutta. Ennen kuin se, solut siirrostettiin 24-kuoppaisille levyille yli yön varmistaa 90% -95% konfluenssiin aikaan transfektion. Kaksikymmentäneljä tuntia transfektion jälkeen lusiferaasiaktiivisuus mitattiin Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, WI, USA) ja ilmaistiin suhteena tulikärpäsen lusiferaasi ja Renilla lusiferaasiaktiivisuudet. Kaikki solut tehtiin kolmena kappaleena kanssa samoissa olosuhteissa.

elektroforeettinen liikkuvuus Shift Assay (EMSA) B

tunne Koetinsekvenssit olivat seuraavat: rs2295080 T anturi, 5′-AGGGTTCCCATCCCTGAGGAC-3 ’; rs2295080 G koetin, 5’-AGGGTTCCCAGCCCTGAGGAC-3 ’. Nuclear proteiinit uutettiin NE-PERTM Ydin- ja Sytoplasmiset Extraction reagenssit (Pierce, Rock-ford, IL, USA). DNA-koettimet valmistettiin biotiini 3’-End DNA Labeling Kit (Pierce, Rock-ford, IL, USA). Elektroforeettisen liikkuvuuden siirtymän määrityksellä (EMSA) suoritettiin LightShift Kemiluminesenssiin EMSA Kit (Pierce, Rock-ford, IL, USA). Sitovat reaktiot suoritettiin seuraavalla tavalla: tumauutteita (8 ug proteiinia) ja 1 x sitomispuskurissa 2,5% glyserolia, 5 mM MgCl

2, 50 ng /ul poly (dl-dC), 0,05% NP-40, ja 20 fmol biotiinileimattua rs2295080 T /rs2295080 G koettimia inkuboitiin jäillä 30 min: n tilavuudessa 20 ui. Kilpailun tutkimukset tumauutteita inkuboitiin leimaamattoman oligonukleotidin 30 min ennen kuin lisätään leimattu oligonukleotidi.

Expression tasot

mTOR

mRNA.

Kokonais-RNA 60 mahalaukun syöpä kudoksia, sisältyvät 753 tapauksissa, joilla on erilaiset genotyypit uutettiin käyttäen Trizol-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). MRNA mitattiin kvantitatiivisella reaaliaikaisella PCR: llä (ABI 7300) sen jälkeen, kun käänteisen transkription. GAPDH käytettiin sisäisenä kvantitatiivinen ohjaus kullekin näytteelle. Käytetyt alukkeet mTOR vahvistus olivat F: 5′-TTGCTTGAGGTGCTACTG-3 ’ja R: 5′-CTGACTTGACTTGGATTCTG-3′; alukkeet GAPDH: lle olivat F: 5’-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC-3 ’ja R: 5′-GGGGTCATTGATGGCAACAATA-3’. Suhteellinen kvantitointi

mTOR

mRNA laskettiin käyttämällä 2-ΔΔCt menetelmällä. Kertamuutoksia normalisoitiin suhteessa GAPDH, ja kukin määritys tehtiin kolmena kappaleena.

Tilastollinen analyysi.

Hardy-Weinberg tasapaino (HWE) arvioitiin chi-neliö hyvyyttä testi verrata havaittuun genotyypin taajuudet odotettuihin keskuudessa valvontaa. Yhdistykset välillä genotyyppien ja mahalaukun syövän riski arvioitiin laskemalla kertoimet suhdeluvut (syrjäisimmillä alueilla) ja 95%: n luottamusvälit (CI) alkaen logistinen regressio analyysit säätö iän ja sukupuolen. Kaksipuolisen χ

2 testiä tilastollisen merkityksen suoritettiin käyttäen SAS-ohjelmiston (versio 9.1.3, SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA) ja

P

0,05 pidettiin tilastollisen merkitys.

tulokset

ominaisuudet tutkimushenkilöillä

valitut ominaisuudet näistä tapauksista ja valvonta on koottu taulukkoon 1. tapausten ja kontrollien näytti riittävästi Hyväksytty ikä (

P

= 0,424) ja sukupuoli (

P

= 0,406). Niistä 753 tapauksessa tuumorikohdat mukana 295 cardia syöpä (39,2%) ja 458 ei-cardia syöpä (60,8%). Potilaat, joilla on diffuusi tyyppi (437, 58,0%) oli hieman suurempi suhde kuin suoliston tyyppi (316, 42,0%). Perustuen TNM luokittelu amerikkalaisen sekakomitean Cancer (AJCC syöpä pysähdyspaikan manuaalinen, 6

th edition) [19], 17,3%, 17,3%, 50,6%, ja 14,8%: lla potilaista oli T1, T2, T3, ja T4, vastaavasti. Samaan aikaan 60,6% potilaista oli positiivinen imusolmuke etäpesäke ja 13,0% oli olemassa etäinen etäpesäke. Näiden kliinisiä piirteitä, kaikki potilaat lopulta tunnistettiin vaiheessa I, II, III, ja IV 26,8%, 21,9%, 35,3%, ja 16,0%, tässä järjestyksessä.

kokonaisvaikutukset rs2295080 Polymorfismi on vaara GC

genotyyppi jakaumat ja alleelifrekvenssien rs2295080 on esitetty taulukossa 2. genotyyppi taajuuksia ohjaus ei yhteisymmärryksessä HWE mallin (

P

= 0,569 ). Kuten on esitetty taulukossa 2, genotyyppi taajuudet rs2295080 olivat 64,0%, 32,7%, ja 3,3%, että TT, TG, ja GG genotyyppien joukossa tapauksissa ja 58,2%, 35,7%, ja 6,1% välillä kontrolleina. Ero tapausten ja kontrollien välillä oli tilastollisesti merkitsevä (

P =

0,008). Myös G-alleelin frekvenssi oli huomattavasti pienempi joukossa tapauksia kuin valvonta (19,7% vs. 23,9%,

P

= 0,003). Lisäksi yhdistetyn TG /GG-genotyypin frekvenssi oli pienempi joukossa tapauksia kuin valvonta (36,0% vs. 41,8%,

P

= 0,016). Kun otetaan TT genotyyppi viitteenä, huomasimme, että variantti genotyypit (TG ja GG) olivat yhteydessä alentuneeseen GC annosvasteellisella tavalla verrattuna TT genotyyppi (oikaistu OR = 0,83, 95% CI = +0,67-+1,02 TG, ja 0,49, 0,30-0,80 GG;

P

trendi = 0,003). Samoin myös havaittu, että yhdistetyn TG /GG genotyypit liittyi tilastollisesti merkitsevästi pienempi alttius GC verrattuna TT genotyyppi (0,78, ,64-+0,96). Yhdessä nämä tiedot osoittivat, että

mTOR

rs2295080 G-alleelin voi olla oletettua suojaava alleelin.

Urokset olivat alttiimpia syöpään kanssa rs2295080 polymorfismi

koska se on vakiintunut, ikä ja sukupuoli olivat tärkeitä tekijöitä kasvain syövän synnyn myös mahasyövän. Mukaan kerrostuneisuus analyysin iän ja sukupuolen tekijät, huomasimme, että merkittävää yhteyttä havaittiin miehen ryhmässä, eikä naisten ryhmässä (taulukko 3). Miehillä kuljettaa rs2295080 G alleeli oli merkitsevästi vähentynyt riskitekijä (OR = 0,72, 95% CI = 0,56-0,93 TG /GG vs. TT), vertaamalla kuljettavat T-alleeli. Kuitenkin, ei ollut tilastollista eroa nuorten ja vanhojen aiheita.

kerrostunut analyysi assosiaatioiden rs2295080 polymorfismi ja kliininen muuttujat mahasyövän

Toteutimme kerrostuneisuus analyysi rs2295080 polymorfismi kaikissa aineissa mennessä kliinisiä piirteitä GC. Kaikista riippumattomia muuttujia, suojaavia vaikutuksia havaittiin pääasiassa potilailla, joiden cardia mahalaukun syöpä (OR = 0,68, 95% CI = +0,52-+0,91), suoliston tyyppi (0,73, 0,56-0,96), T3 syvyys invaasio (0,78, 0,60 -1,00), positiivinen imusolmuke etäpesäke (0,79, 0,62-1,00), negatiivinen etäpesäkkeiden (0,76, 0,62-0,94), ja paikallinen vaihe (0,76, 0,59-0,98) (taulukko 4).

vaikutus rs2295080 polymorfismin on transkriptioaktiviteettia

saadakseen käsityksen biologinen toiminnallinen vaikutus rs2295080 polymorfismin vaikutus

mTOR

transkriptio, GES-1, BGC823, MGC803 ja SGC-7901-soluja transfektoitu eri lusiferaasin raportti plasmideja, mukaan lukien villityypin (T-alleelin) ja mutate tyyppi (G-alleelin). Kuten on esitetty kuviossa. 1A, huomasimme, että transkriptio aktiivisuus T-alleelin oli suurempi kuin G-alleelin kanssa noin 1,5-kertaiseksi yli neljä solulinjoissa, mikä viittaa siihen, että rs2295080 G alleeli toimi puolustajana mahasyövän vähentämällä transkriptiota

mTOR

.

(A) Promoottori aktiivisuus eri alleelien

mTOR

rs2295080 polymorfismi. T-alleelin kuvattiin noin 0,5-kertaiseksi G-alleelin kyky sisällä lusiferaasianalyysissä neljän monenlaisia ​​mahalaukun solulinjojen (GES-1, BGC-823, MGC-803 ja SGC-7901). (B) Nuclear proteiineja sitova aktiivisuus eri alleelien

mTOR

rs2295080 polymorfismi. Biotinylated antureista (20 fmol) inkuboitiin 8 ug ydin- otteita SGC-7901-soluissa. Kompetitiokokeissa, 10-, 100- ja 200-kertainen molaarinen ylimäärä leimaamatonta rs2295080 T /rs2295080 G koettimet käytettiin osoittamaan erityispiirteet kunkin sitovan reaktion.

Nuclear proteiiniin sitoutumisen aktiivisuus vaihtoehdot vuonna rs2295080

Seuraavaksi teimme EMSA kokeen analysoida biologinen seuraukset rs2295050 polymorfismin SGC-7901-soluissa. Yksi vahva nauha (proteiini-kompleksi) on siirtynyt, kun tumauutteita inkuboitiin biotiini-leimattu rs2295080 T koetin, kun taas heikompi juova havaittiin, kun tumauutteita inkuboitiin biotiini-leimattu rs2295080 G-koettimella. Siirretyt vyöhykkeet merkittävästi inhiboi molaarinen ylimäärä leimaamatonta rs2295080 T tai rs2295080 G kilpailija annoksesta riippuvat tavalla (Fig. 1 B). Nämä tulokset osoittivat, että rs2295080 G-alleeli saattaa vähentää ydinaseiden proteiini sitoutumisaktiivisuutta jossain määrin.

Association between

mTOR

rs2295080 polymorfismin ja Expression tasot

mTOR

mRNA

kuusikymmentäkolme mahasyövän kudosten eri genotyypit

mTOR

rs2295080 olivat saatavilla meidän esillä olevassa tutkimuksessa. Koska alhaisen taajuuden GG-genotyyppi, lisäsimme sen näytteiden TG genotyypin analyysiä varten. Kuten on esitetty kuviossa. 2 ekspressiotasot

mTOR

mRNA oli merkittävästi suurempi potilailla, joilla TT genotyypin kuin niillä, joilla TG tai GG-genotyyppi (keskiarvo ± SEM TT vs. TG /GG: 12,35 ± 1,51 vs. 6,17 ± 1,32,

P

= 0,004).

TT versus TG /GG genotyyppiä,

P

= 0,004.

keskustelu

Tässä tutkimuksessa osoitimme, että G-alleelin

mTOR

promoottori polymorfismi rs2295080 liittyi merkittävästi vähentynyt riski GC. Olemme havainneet, että T-G muutos rs2295080 olennaisesti muuteta transkriptionaalista aktiivisuutta

mTOR

geenin kautta vaikuttavat sitoutumiseen joidenkin transkriptiotekijä. Havaitsimme myös, että

mTOR

rs2295080 T alleeli liittyi korkeampi

mTOR

mRNA ekspressiotasot

in vivo

.

Nisäkkäiden rapamysiinin kohde (mTOR) , joka tunnetaan myös nimellä FRAP1, on yksi välttämätön jäsen PI3K /Akt /mTOR polku ja Keski metaboliseen signalointi [20], [21]. Se voidaan aktivoida insuliini, insuliinin kaltaiset kasvutekijät ja muut kasvutekijät, ja inaktivoitu aikana solujen nälkään. mTOR on olemassa kaksi erilaista monimutkainen, nimeltään mTORC1 ja mTORC2, vastaavasti [22]. MTORC1 kompleksi fosforyloi sen loppupään tiedoksiannon p70S6K, jotka saattavat aiheuttaa hajoamista insuliinin reseptorin alustan ja lisätä insuliinin ajettu Akt-aktiivisuutta. MTORC2 kompleksi fosforyloi C-päähän Akt at Ser473, mikä saattaa johtaa koko aktivoinnin Akt [9]. Terapeuttisena kohteena muissa syövissä [4], [8], [23] – [27], mTOR voisi myös tullut potentiaalinen kohde hoitoon mahasyövän, spontaanisti. Sirolimuusi [28] ja everolimuusin [29] mTOR-inhibiittorit, havaittiin johtavan G1 solusyklin pysähtymiseen ja inhiboivat mahalaukun solulinjoissa. Äskettäin uusi potentiaali

mTOR

promoottorin polymorfismi rs2295080 on kuvattu useissa tutkimuksissa [30] – [32]. Kuitenkin riittämätön toiminnalliset tutkimukset suoritettiin arvioimaan roolia tämän geneettisen variantin säätelyssä

mTOR

ilme. GC, havaintomme kunhan näyttöä siitä rs2295080 T alleeli voisi tehostaa transkription aktiivisuutta

mTOR

jossain määrin GES-1 solulinja jälkeen transfektoitu

in vitro

. Ja edelleen lusiferaasianalyysissä kolmella mahasyövässä solulinjoissa (eli BGC-823, MGC-803 ja SGC-7901) vahvistivat lisäksi tämä vaikutus rs2295080 polymorfismin. Nämä tulokset tämänhetkiseen tutkimuksessa olivat mukaisesti tulosten munuaissyövän solulinjaa ja kohdunkaulan syövän solulinja [32]. EMSA määrityksessä rs2295080 ennustettiin paikantaa mahdollisen sitoutumiskohdan, jonka polymorfisia variantteja voi vaikuttaa rekrytoida transkriptiotekijöiden (käyttäen p-OTTELUN ohjelma, joka käyttää sitoutumiskohdat Transfac; www.gene-regulation.com). Ottanut nämä tulokset yhteen, on todennäköistä, että

mTOR

rs2295080 polymorfismi voi vaikuttaa ilmentymistason

mTOR

ja yksilöllinen herkkyytensä eri syöpiä.

SNP rs2295080, samoin kuin toinen introni SNP rs11121704, raportoivat ensiksi Hildebrandt

et al.

sijoittumaan

mTOR

potentiaali promoottorialue [13]. Kuten on kuvattu ruokatorven syöpä, rs2295080 näyttänyt mitään yhdistystä tai toiminto selviytymisen jälkeen sädehoitoa ja kirurgian. Mutta tähän asti, useat tutkimukset ovat tunnistaneet vaikutus tämän polymorfismin

mTOR

syövän riskiä [30] – [32], jotka kaikki pidetään rs2295080 T-alleelin riskitekijänä. Nykyisessä tutkimuksessa, yhdistyksen välillä rs2295080 T-alleeli GC riski oli sopusoinnussa tulokset aiempien kolmen tutkimuksen [30] – [32]. Lisäksi tuloksemme ehdotti myös, että tämä polymorfismi voisi olla biologinen ydin kehittämiseen GC. Koska eri populaatioissa ja keinoista keskuudessa esiintyminen, kehittäminen, ja selviytymistä, me arveltu, etniseen erot ja mekanistinen tunnustukset saattavat selittää näitä diskordansseja.

Toinen uusi tulos tulee yhdistyksen sukupuolten välillä ja

mTOR

rs2295080 polymorfismin kerrostunut analyysiin. Tämä rs2295080 polymorfismi paljasti enemmän vahva merkitys miehillä kuin naisilla. Lisäksi Hartgrink

et al

. (2009) on raportoitu suhde miesten ja naisten tartunnan mahasyöpä on noin 2:01 vuodessa [33]. Edelleen selitys yhteyksiä näiden tulosten täytyy hakea, ja erilaisia ​​hormoneja ilmaisun miehillä ja naisilla tulla paras vastike, rationaalisesti. Tutkimuksessa, rintasyöpä, Galoian

et al.

On antanut tietojen prolinerich polypeptidi-1 saa aikaan antiproliferatiivisen vaikutuksen kautta estävä mTOR-kinaasiaktiivisuuden in ER-negatiivinen MDA-231, mutta ei ole estävää vaikutusta olemassa luminal T47 -D solu, joka toimii kuin ER-positiivisen solulinjan [34]. Kuitenkin tutkimukset androgen, uskottiin, että androgeenireseptorin saattaa stimuloida mTOR aktiivisuutta PTEN-puutosta syöpäsolujen. Äskettäin julkaistun tutkimuksen androgeenireseptorin parantanut rooli androgen jopa säätelevä mTORC2 toimintaa [35]. On todennäköistä, että androgeenin, sen sijaan, että estrogeeni voi lisätä

mTOR

ilmaisu; androgeenireseptorin voi johtaa yleisyydestä mahalaukun syöpä miehillä ja voimakas merkitys

mTOR

rs2295080 miespuolisilla ryhmässä Tutkimuksessamme.

Osa rajoituksista nykyisen tutkimuksen syytä muistuttaa seuraavasti . Ensinnäkin, rs2295080 ollut ainoa polymorfia merkittävästi olemassa

mTOR

, ja sen merkitystä, että SNP oli laiminlyöty tutkimuksessamme. Toiseksi, kuten ratkaisevia tekijöitä mahasyövän, puutteet, on

Helicobacter pylori

tiedot, tupakointi tiedot, ja juominen tiedot olivat myös riittämättömiä tutkimuksessamme, se on harmillista meille lisätutkimuksia vaikutuksista tämän polymorfismin. Lisäksi, koska suhteellisen pieni otoskoko tutkimuksessamme, mitään merkittävää tulosta näytti löytyvän erityisesti kerrostumissa (ikä alaryhmiä, naisten alaryhmässä, ja muut kliinis-patologinen alaryhmiä) kerrostunut analyysit (taulukko S3 ja S4). Edelleen suurempi tutkimuksessa lisätietoja odotettiin tarkistaa havaintomme.

Yhteenvetona Tutkimuksessamme valaistu

mTOR

rs2295080 paikallistamiseen promoottorialueen

mTOR

geeni oli merkitsevästi liittyvä mahalaukun syövän riski on Kiinan väestön.

tukeminen Information

Taulukko S1.

alukkeiden ja koettimien käytetään genotyypitys.

doi: 10,1371 /journal.pone.0060080.s001

(DOC) B Taulukko S2.

Alukkeet plasmidien.

doi: 10,1371 /journal.pone.0060080.s002

(DOC) B Taulukko S3.

vuorovaikutus analyysit

mTOR

rs2295080 polymorfismi ja ikää tai sukupuolta tila tapauskontrollitutkimuksessa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0060080.s003

(DOC) B Taulukko S4.

vuorovaikutus analyysit

mTOR

rs2295080 polymorfismi ja ikä /sukupuoli tai kliinisten merkkien tapauksessa vain tutkimuksessa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0060080.s004

(DOC)

Kiitokset

Haluamme kiittää Luo Y (Nanjing Punaisen Ristin veripankki) hänen apua toiminnallisia kokeita.