Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

peräsuolen syöpä ( CRC) kehitys liittyy taustalla muutostöissä geneettinen /epigeneettiset tasolla. Tässä tutkimuksessa arvioitiin roolia Kras geenimutaatio ja RASSF1A, FHIT ja MGMT geenin promoottori hypermetylaation yhdessä /itsenäisesti satunnaista CRC Intian väestö ja korrelaatio kliinis muuttujien taudin.

Methods

One satakaksikymmentä neljä peräkkäistä kirurgisesti resektoitiin kudosten (62 kasvain ja yhtä monta normaali vierekkäisen tarkastamiseksi) ensisijainen satunnaista CRC olivat mukana ja potilastiedot mukaan lukien demografisia ominaisuuksia, elämäntapa /ruoka tai juomatottumusten kliiniset ja histopatologiset profiilit tallennettiin. Polymeraasiketjureaktio – restriktiofragmenttipituuspolymorfismin ja suora sekvensointi Kras geenimutaatio ja metylaatiospesifisen-PCR RASSF1A, FHIT ja MGMT geenien suoritettiin.

Tulokset

Kras geenin kodonissa 12 13 ja metyloitu RASSF1A, FHIT ja MGMT geeni havaittiin 47%, 19%, 47%, 37% ja 47% tapauksista, vastaavasti. Alkoholin nauttiminen ja tupakointi olivat merkitsevästi yhteydessä läsnäolo Kras mutaation (kodoni 12) ja MGMT metylointi (p-arvo 0,049). Kasvaimen vaiheesta ja etäpesäkkeiden korreloida läsnä KRAS kodonin 12 (p-arvot 0,018, 0,044) ja metyloituja RASSF1A (p-arvot 0,034, 0,044), FHIT (p-arvot 0,001, 0,047) ja MGMT (p-arvot 0,018, 0,044 ) geenejä. Kombinatorinen vaikutus geenimutaation /metylaatio havaittiin myös (p-arvo 0,025). Kaiken kasvain vaiheessa 3, kohtalaisen eriytetty kasvaimet, läsnäolo imusuonten invaasion ja puuttuminen etäpesäkkeiden havaittiin useammin kasvaimissa mutatoitunut Kras ja /tai denaturoitua RASSF1A, FHIT ja MGMT geenejä.

Johtopäätös

Tehostemateriaalit väliset suhteet näiden geenien satunnaista CRC voidaan käyttää diagnostisina /prognostisten markkereita arvioitaessa yleistä patologinen tila CRC.

Citation: Sinha R, Hussain S, Mehrotra R, Kumar RS, Kumar K, Pande P, et ai. (2013) Kras geenimutaatio ja RASSF1A, FHIT ja MGMT Gene Promoottori hypermetylaation: indikaattorit Kasvain Staging ja etäpesäkkeiden Adenocarcinomatous Sporadic peräsuolen syövän Intian Population. PLoS ONE 8 (4): e60142. doi: 10,1371 /journal.pone.0060142

Editor: Hassan Ashktorab, Howard University, Yhdysvallat

vastaanotettu 15. lokakuuta, 2012 Hyväksytty: 21 helmikuu 2013; Julkaistu: 03 huhtikuu 2013

Copyright: © 2013 Sinha et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on kolmanneksi yleisin syöpä miehillä (663000 tapausta) ja toiseksi naisilla (571000 tapausta), jossa on noin 608000 kuolemantapausta arvioitu maailmanlaajuinen, joten se neljänneksi yleisin kuolinsyy syöpään. Intiassa arvioitu esiintyvyys ja kuolleisuus CRC on 36476 tapausta ja 25690 tapauksissa vastaavasti [1]. CRC hinnat ovat noin 2-5 kertaa suurempi kehittyneissä maissa verrattuna kehitysmaissa, jotka voivat johtua eri vaihtelut sekalaiselle joukko riskitekijöitä ja diagnostisten käytäntöjen [2], [3]. Lifestyle liittyviä altistavia muunneltavissa riskitekijöitä CRC kuuluvat liikunta, ylipaino ja liikalihavuus, punaisen ja lihajalosteiden kulutus, tupakointi ja liiallinen alkoholin käyttö [3].

CRC on heterogeeninen tauti monimutkaisia ​​etiologian ja voi johtua, osittain geneettinen ja epigeneettiset muutokset, jotka voivat toimia synergistisesti ja muuttaa epiteelisolujen adenokarsinooman [4]. Geneettinen muutos, joka tapahtuu adenoomien (10%) sekä karsinoomien (40%), paksusuolen ja peräsuolen syöpä on onkogeenisiä aktivointi Kras geenin mutaatiot [5]. Kras esikasvaintekijän koodaa proteiinia (p21-ras), joka kuuluu perheeseen GTP /GDP-sitovia proteiineja kanssa GTPaasina aktiivisuus ja on mukana transduktion mutageenisten signaaleja [6].

Epigeneettiset hiljentäminen geenien on myös tärkeä rooli inaktivoimiseksi tuumorisuppressorigeeneille karsinogeneesissä [7]. Poikkeava DNA-metylaation CpG saaria promoottorialue alkaa aikaisin kasvaimen kehittymisen ja on tärkeä epigeneettiset mekanismi taustalla inaktivoimiseksi tuumorisuppressorigeeneille [8]. RASSF1 geeni on otaksuttu tuumorisuppressorigeenin toimimalla G1 /S-vaiheen solusyklin etenemisen [9]. Geenien seurauksena poikkeavien promoottorin metylaation RASSF1A voi olla tärkeä aiheuttajaa tapahtuma kasvainten synnyssä ja on tunnustettu vaihtoehtona markkerina downregulate Ras polku [10].

Ihmisen FHIT geeni, tuumorisuppressorigeeniä , on jäsen histidiini kolmikko geeniperheen [11]. Metylointi FHIT geeni on havaittu useita kiinteitä kasvaimia ja lyhennetyn tai täydellinen menetys ilmentymisen FHIT-proteiinin on osoitettu johtuvan geenin metylaatio johtaa sen transkription inaktivointi ja taudin etenemiseen [12].

O

6-metyyliguaniini-DNA metyylitransferaasi (MGMT) on DNA korjaus entsyymi poistamalla alkyyliryhmät päässä O

6 asemaa guaniinin [13]. MGMT promoottori hypermetylaation ja epigeneettiset hiljentäminen laukaista usein esiintyä jo tapahtumista karsinogeneesissä [14].

Tämä tutkimus oli siis suoritettiin roolin tutkimiseksi geneettinen mutaatio Kras geenin ja epigeneettiset muutoksia RASSF1A, FHIT ja MGMT geenejä joko yhdessä tai itsenäisesti adenocarcinomatous satunnaista CRC Intian väestöstä ja niiden korrelaatio kliinis muuttujia CRC.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaille ja kudosnäytteiden

yhteensä 124 peräkkäisen kirurgisesti resektoitiin tuore kudosnäytteiden koostuu 62 kasvain kudosten ja 62 viereisten normaali säätelyalueita (normaali ei tuumori- terve limakalvo at 2 cm: n etäisyydellä kasvain) [15] ensisijainen satunnaista CRC kerättiin analyysiä varten esillä olevassa tutkimuksessa . Vain ne tapaukset, jotka täyttävät meidän kriteereillä kuten peräkkäisen tapauksia päädiagnoosina paksusuolisyövän joille etukäteen leikkaus oli otettu varten tässä tutkimuksessa. Kukaan näistä potilaista ei ollut saanut mitään leikkausta edeltävän hoidon muodossa säteilyä tai kemoterapiaa. Kaikki kudosnäytteet kerättiin 10 minuutin kuluessa resektio. Kudosnäytteet jaettu kahteen osaan; yksi osa on lähetetty histopatologista diagnoosia ja pysähdyspaikkojen ja toinen puoli varastoitiin -80 ° C: ssa molekyylipainon analyysiä. Histopatologisia laadut ja kliinisiä lavastus arvioitiin standardin kriteerien [16] kaksi riippumatonta patologia 5 tapauksissa arvostellaan myös eriytetty adenokarsinooma, 41 kohtalaisen eriytetty adenokarsinooma, 15 niin huonosti eriytetty adenokarsinooma ja 1 potilaan erilaistumaton adenokarsinooma taas 8, 25, 25 ja 4 potilasta sai kuten vaiheessa 1, 2, 3 ja 4, vastaavasti. Vain histopatologisesti vahvistettua tapausta olivat mukana molekyylianalyysille. Tiedot kunkin potilaan liittyvät heidän väestökehityksen, tavat, oireet, henkilökohtainen historia, tutkimukset, kasvaimen ominaisuudet mukaan lukien etäpesäkkeiden ja histopatologia raportteja, jatkokäsittelyä ja seurantaa tiedot tallennettiin myös. Mitä ruokailutottumusten, mausteista ruokaa luokiteltiin käyttö mausteet erityisesti kuuma mausteet ja chili ruokavalio jokaisessa aterian säännöllisesti (3-5 g ateriaa kohti), ei kasvisruokavalio pidettiin saanti punaista lihaa (ainakin kolmesti viikossa) ja rasva ruokavalio arvioitiin kun saanti runsasrasvainen ruokavalio kaikenlaisen käytön lisääminen ruokaöljyt jokaisessa aterian ( 10 ml sinappiöljy ateriaa kohden). Kaikki rekisteröidyt potilaat Tutkimuksessa oli krooninen alkoholisteja (keskimäärin alkoholin 100-150 ml päivässä vähintään 3-4 kertaa viikossa), tupakoitsijoita (vähintään yksi pakkaus 10 savuketta päivässä) ja tupakka chewers (4-6 pakkausta päivässä). Tutkimuksen hyväksyi eettisiä komiteoita osallistuvien laitosten ja etukäteen kirjallinen suostumus otettiin potilailta ennen ilmoittautuminen tutkimuksessa. Tutkimus toteutettiin periaatteiden mukaisesti Helsingin julistuksen [17].

DNA Extraction

Korkean molekyylipainon genomista DNA uutettiin -300 mg kasvaimen ja normaalin viereisen kudosnäytteet standardimenetelmällä proteinaasi K: digestio, jota seuraa fenoli-kloroformi-uutolla [18]. DNA määrä /laatu tarkastettiin spektrofotometrisesti (Nanodrop ND-1000 versio 3.6.0, Thermoscientific, Willington DE USA) /1% agaroosigeelielektroforeesilla ja varastoidaan myöhempää käyttöä varten -20 ° C: ssa.

Kras Mutation Analysis

DNA monistettiin 25 pl reaktioseoksessa, joka sisältää 25 pmol sekä eteen- että taaksepäin-alukkeita, 25 mM kutakin dNTP: tä ja 0,2 U Taq DNA-polymeraasia. Alukkeen sekvenssit on kuvattu muualla [19]. Oligonukleotidialukkeet syntetisoitiin automatisoidulla Applied Biosystems DNA-syntetisaattorilla (Model 381A, Applied Bio-järjestelmät, Foster City, CA, USA) käyttäen fosforamidiittimenetelmää ja puhdistettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografialla (HPLC). Edelleen restriktiofragmenttipituuspolymorfismin analyysi tehtiin MvaI ja Bgll tarkistaa läsnäolo mutaatioiden kodonien 12 ja 13 Kras geenin. Digestiotuotteet visualisoitiin sitten etidiumbromidivärjäyksellä UV-valossa elektroforeesin jälkeen 4% agaroosigeelissä. Tulokset varmistettiin sekvensoimalla.

metylaatiospesifisen polymeraasiketjureaktio (MSP) B

Perimän DNA muokattiin käyttäen EZ DNA Metylointi Gold Kit (Pro Lab markkinointi, Delhi, Intia) annettujen ohjeiden käytettävissä seurasi PCR denaturoidulla ja metyloitumattoman alukkeita määritellä metylaation. Alukkeen sekvenssit kunkin geenin promoottorin sekä metyloidut ja metyloitumattomat muotoja on kuvattu aikaisemmin [7], [20]. Hot start PCR suoritettiin, ja tuotteet ajettiin elektroforeesissa 2,5% agaroosigeelissä ja visualisoitiin UV-valaisun etidiumbromidivärjäyksen jälkeen.

Tilastollinen analyysi

Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin vakiomenetelmillä käyttämällä SPSS tietokoneohjelmat (versio 16, SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Fischerin eksakti testi tai Chi Square Testit käytettiin sovellettavissa. Havainnot katsottiin tilastollisesti merkittävä p arvoilla 0,05. Kokonaiselinaika (OS) laskettiin Kaplan Meier selviytymisen menetelmä [21].

Tulokset

Overall Analysis Perustuu Väestörakenteen Kliiniset profiili ja Survival CRC Potilaat

Näistä 62 tapausta analysoidaan, kasvain sijaitsi paksusuolen, peräsuolen ja rectosigmoid alueilla 66%, 24% ja 10% tapauksista, vastaavasti. Suurin osa potilaista (76%) oli miehiä. Keski-ikä tapauksista mukana tutkimuksessa oli 55 vuotta aikaan diagnoosin. Co sairauksia kuten diabetes, kohonnut verenpaine, tuberkuloosi jne ilmoitettiin 27% tapauksista ja 16% tapauksista oli suvussa syöpää vaikka yksikään tapauksista oli suvussa CRC. Painonlasku oli yleisin merkki (63%, keskimääräinen kesto 6 kk), jonka jälkeen vatsakipu (57%, keskimääräinen kesto 1 vuosi) ja verenvuoto kohti peräsuolen (50%, keskimääräinen kesto 3 kk). Joukossa elämäntapatekijöiden, korkea saanti rasvahappo ruokavalio yleisimmin havaittu (52%) ja sen jälkeen kuin kasvisruokavalio (48%) ja ruokaa runsaasti mausteet (47%) (taulukko 1). Alkoholin nauttiminen ja tupakointi havaittiin 45% ja 42% potilaista tutkimuksessamme. Yhdistys oli edelleen selvästi esiin miespotilaiden jossa 60% ja 53% potilaista oli edellä tottumukset (p-arvot 0,001 0,001, tässä järjestyksessä). Biokemiallinen profiili kaikki potilaat ovat taulukossa S1. Yleinen eloonjääminen potilaista oli 94% 1 vuoden mediaanin 2 kuukautta (vaihteluväli 1-19 kuukautta).

Analyysi Kras Mutaatiot kodonissa 12 ja 13 CRC

Kun otetaan huomioon tärkeä rooli RAS proteiineja, erityisesti Kras karsinogeneesis-, Kras geenimutaatio analysoitiin ja havaittiin 47% (29/62) tapaukset kodonissa 12 ja 19% (12/62) tapaukset kodonissa 13 kasvaimen alueella. Mutaatio havaittiin myös 29% ja 18% vierekkäisten ohjaus alueita kodonien 12 ja 13, vastaavasti. Alkoholin nauttiminen, tupakointi ja saanti mausteinen ruoka havaittiin useammin potilailla, joilla KRAS kodonissa 12 verrattuna niihin villityypin Kras (59%, 69%, 55% vs. 33%, 18% ja 39%, tässä järjestyksessä) ja oli tilastollisesti merkitsevä suhteessa alkoholinkäytön ja tupakoinnin (p-arvot 0,047, 0,001) (taulukko 2). Suurin osa tapauksista, joissa Kras geenimutaatio kodonissa 12 oli samanlainen kuin kasvaimen vaiheen 3 (52%) ja histologisesti kohtalaisen erilaistuneet luokan (66%). Kasvaimen vaiheesta ja etäpesäkkeiden havaittiin myös merkittävästi liittyvän läsnäolon KRAS kodonin 12 (p-arvot 0,018, 0,044). Kuitenkin yhdistys kasvaimen ja imusuonten hyökkäyksen KRAS ei ollut tilastollisesti merkitsevä (taulukko 3).

Analyysi RASSF1A Promoottori Metylointi CRC

Promoottori hypermetylaation vuonna RASSF1A geeni havaittiin 47% (29/62) tapauksia CRC kasvaimen alueella ja 13% vierekkäisten valvontaa. Joukossa elämäntavan tekijät, taajuus alkoholin kulutuksen, rasva ruokavalio ja tupakointi oli enemmän sellaisille potilaille denaturoidulla RASSF1A verrattuna niihin metyloitumattomilla RASSF1A (55%, 55% ja 55% vs. 36%, 49% ja 30% , vastaavasti) (taulukko 2). Huomattava määrä tapauksia, joissa metyloitu RASSF1A geeni oli kasvain vaiheen 3 (45%) ja kohtalaisen erilaistuneet luokan (59%). Kasvain vaiheessa etäpesäke ja imusuonten invaasio korreloivat merkitsevästi kanssa Metyloidun RASSF1A (p-arvot 0,034, 0,044 ja 0,048, tässä järjestyksessä), kuitenkaan ei ollut yhdistys kasvaimen denaturoidulla RASSF1A (taulukko 3).

Analyysi FHIT Promoottori metylointi CRC

Metyloidut FHIT geeni havaittiin 37% (23/62) tapauksia CRC. FHIT metylaatio havaittiin myös 13% tapauksissa viereisen säätelyalue. Potilaat denaturoidulla FHIT geenin ilmaantuvuus oli suurempi kuin kasvissyöjä ja rasva ruokavalio verrattuna metyloitumattomalla ryhmään (61% ja 52% vs. 41% ja 51%, tässä järjestyksessä). Ei kuitenkaan tilastollinen yhteys havaittiin (taulukko 2). Useimmissa tapauksissa denaturoidulla FHIT geeni oli kasvain vaiheen 3 (70%) ja kohtuullisesti erilaistunut histologinen luokka (65%). Kasvain vaiheessa etäpesäke ja läsnäolo imusuonten invaasion merkittävästi liittyy läsnäolo metyloitu FHIT (p-arvot 0,001, 0,047 ja 0,004, tässä järjestyksessä). Olemme kuitenkin jättänyt noudattamatta mitään yhdistyksen välillä kasvaimen ja metyloitu FHIT (taulukko 3).

Analyysi MGMT Promoottori Metylointi CRC

Metyloidut MGMT geeni havaittiin 47% (29/62 ) tapauksia CRC kasvaimen alueella ja 13% tapauksista viereisessä valvonnan alueilla. Myös tupakointi ja alkoholin nauttiminen ilmoittivat useammin potilaiden denaturoidulla MGMT geenin verrattuna metyloitumattomalla ryhmään (66% ja 62% vs. 21% ja 30%, tässä järjestyksessä). Korrelaatio oli erityisen selvää ja vakuuttavaa tapauksessa alkoholin nauttiminen ja tupakointi ja läsnäolo MGMT metylaatio (p-arvot 0,013, 0,001) (taulukko 2). Korkeampi tapausten määrä denaturoidulla MGMT geeni oli kasvain vaiheen 3 (52%) ja kohtalaisen erilaistuneet luokan (66%). Kasvain vaiheessa etäpesäke ja imusuonten invaasio havaittiin korreloi merkitsevästi Metyloidun MGMT geenin (p-arvot 0,018, 0,044 ja 0,048, tässä järjestyksessä). Kuitenkin yhdistys kasvaimen denaturoidulla MGMT geeni ei ollut tilastollisesti merkitsevä (taulukko 3).

Kombinatoriset vaikutus geneettinen mutaatio Kras Gene ja Epigeneettiset Muutos yhtenäisen RASSF1A, FHIT ja MGMT Geenit CRC

Verrattaessa esiintymisen mutaation /metylaation yhden geenin läsnä mutaation /metylaation toisen geenin, havaittiin, että geenit, oli yhdistetty läsnä mutaation /metylaation useimmissa tapauksissa ja tulokset havaittiin olevan tilastollisesti merkitsevä (p-arvot 0,025, 0,005) (taulukko 4). Vain 15% (9/62) potilailla, joilla ei osoita, että läsnä Kras mutaation tai RASSF1A, FHIT ja MGMT metylointi. Mielenkiintoista, Kras mutaatio /RASSF1A, FHIT ja MGMT metylaation olivat yleisempiä potilailla, joilla on aiemmin ollut alkoholin kulutuksesta 89% (25/28), tupakka pureskelua 86% (12/14), tupakointi 96% (25/26), rasva ruokavalio 78% (25/32), epäsäännöllinen saanti hedelmiä 100% (18/18), saanti mausteinen ruoka 79% (23/29) ja ei-kasvisruokavaliolla 87% (26/30). Lisäksi, näistä tapauksista oli läsnä mutaation /metylaation viereisen valvonta-alue, vain eikä kasvaimen alueella. Edelleen vertailun kliinisen profiilin kanssa kombinatorisista vaihtelun vaikutuksia geenien 62 potilaalla on satunnaista CRC tehtiin ja havaittiin, että kliiniset piirteet olivat yleisempää potilailla, joilla on kasvava määrä vaihtelua geenien geneettisten mutaatio Kras geenissä ja /tai promoottorin hypermetylaatio vuonna MGMT, FHIT ja RASSF1A geenien satunnaista CRC (taulukko 5). Yleisesti, kehittynyt kasvain vaiheessa (97%), etäpesäkkeitä (100%), kohtalaisen huonosti eriytetty kasvaimia (84%) ja läsnäolo imusuonten invaasion (92%) havaittiin useammin kasvaimissa mutatoitunut Kras (kodoni 12) ja metyloituja RASSF1A, FHIT ja MGMT geenejä. Myös promoottori hypermetylaation vuonna RASSF1A, FHIT ja MGMT geenit korreloivat merkittävästi läsnäolo imusuonten invaasio toisin mutaation Kras geenissä.

Keskustelu

kehitys CRC on monivaiheinen ja laajasti tutkittu malli kasvainten synnyssä. Taustalla muutokset geneettisen ja /tai epigeneettisiä taso voi olla mukana yleistä kehitystä CRC [4], [22]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat keskittyneet mutaatiot ja metylaation useiden geenien osallisena kehittämiseen CRC. CpG-saarekkeen promoottorin metylaation transkription inaktivointi voi tapahtua eri vaiheissa paksusuolen kasvaimen kehittymisen, jotka vaikuttavat eri CRC eriasteisesti [23]. Tunnistaminen vaikuttavien geneettisten ja epigeneettiset muutokset voivat tukea rakentamiseen yksilöllisiä ja erikoistuneita diagnostisia molekyyliprofiilien ja kehittäminen uudempia hoitostrategioiden [4]. Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen tutkimus valottaa roolia geneettinen mutaatio Kras geenissä ja epigeneettiset muutoksia RASSF1A, FHIT ja MGMT geenien kehittämisessä adenocarcinomatous satunnaista CRC Intian väestöstä.

62 potilasta mukana tutkimuksessa, yleisimmät oireet raportoitu olivat painonlasku (63%), vatsakipu (57%) ja verenvuoto kohti peräsuolen (50%). Myös muissa tutkimuksissa on raportoitu verenvuotoa ulosteessa, vatsakipua, ripulia tai ummetusta tärkeinä viittaavia merkkejä ja oireita CRC [24].

yleinen esiintyvyys Kras mutaation kodonissa 12 ja 13 oli 47% ja 19%, vastaavasti. Mutaatio havaittiin myös 29% ja 18% vierekkäisten ohjaus alueita kodonien 12 ja 13, vastaavasti. Tämä havainto luultavasti huomauttaa kohti sitä, että vaikka vierekkäiset limakalvo oli normaali ja ei tuumori- patologiaan, molekyylitason muutoksia muodossa mutaation saattanut jo aloitettu tällä alueella myös. Tämä voi siis olla mukana taudin leviämisen ja siten Kras mutaatio voidaan pitää varhaisena markkerina tunnistaa taudin leviämisen viereiseen alueille. Tutkimukset maailmanlaajuisesti ovat raportoineet taajuus Kras mutaation CRC valehdella 25-60% [25] ja yleisimmät tyypit mutaatiot ovat G siirtymiä ja G T transversioita [6]. Kras mutaatio analyysi on tullut yhä tärkeämmäksi CRC osoittaa anti-EGFR-vasta terapiassa ennakoiva merkki CRC [26]. Kliiniset kokeet keskitytään erityisesti tähän ryhmään ovat uutena tarvetta tunti.

Useat tutkimukset ovat sekaantuneet taustatekijät ja mekanismit peräsuolen syövän synnyn ja ilmoitetaan osallistumista elämäntapaan liittyvien tekijöiden kuten ravinnosta rasvat, ruokavalio, ruokavalion folaatti ja alkoholin nauttiminen kehittämiseen CRC [5], [27], [28], [29]. Korkea saanti rasvaa liittyy myös lisääntynyt riski mutatoitunut Kras paksusuolen kasvaimissa [5]. Esillä olevassa tutkimuksessa ei kuitenkaan ole tilastollista havaittu yhteyttä ja näitä havaintoja tukevat toisten [30], [31]. Kokeelliset tutkimukset viittaavat siihen, että sivutuotteet, kuten malonidialdehydi (MDA) ja 4-hydroksinonenaalia (4-HNE) voitaisiin rakentaa ylös ja varastoida johtuen peroksidaatiosta v-6 monityydyttymättömiä rasvahappoja (PUFA), joka puolestaan ​​voi reagoida DNA muodostaen additiotuotteiden kuten pyrimidopurinone addukti deoksiguanosiinin (M1G), edelleen johtaen pääasiassa G A ja G T transversioita bakteereissa [5]. On huomionarvoista mainita, että esiintyvyys CRC hälyttävän kasvaa Intiassa lähinnä muutoksista elämäntavoilla. Urban elämäntapa on nähnyt lisäämällä erilaisia ​​muunnoksia ravintotottumuksista liittyy lisääntynyt saanti junk elintarvikkeita. Kotiruokaa korvataan asteittain helppo valmistaa valmiin elintarvikkeita. Hedelmät, vihannekset ja mausteet, jotka sisältävät lisääntyneitä määriä salisyylihappoa on osoitettu olevan syövän vastainen vaikutus herkistämällä normaalit solut kiertää kasvaimen muodostumisen [32]. Kuitenkin väärentämistä mausteiden ja lisääntynyt käyttö kemikaalien keinotekoisten kypsymisen ja kasvun hedelmiä ja vihanneksia on vähentynyt syövän vastaista potentiaalia näitä elintarvikkeita. Magalhaes ym [33] ovat raportoineet, että riski paksusuolen syövän nostettiin korkea saanti punaisia ​​ja lihajalosteiden mutta ei merkittävää yhteyttä ei havaittu peräsuolen syöpä. On ehdotettu, että G4a siirtyy toisessa pohjan kodonin 12 tai 13 Kras geenin ihmisen paksusuolen voisi johtua N-nitroso yhdisteet, läsnä lihajalosteiden tai endogeenisesti muodostunut [34]. Heterosykliset aromaattisia amiineja (HAA) voitaisiin muodostaa korkean lämpötilan vuoksi ruoanlaittoon lihaproteiinien taas grillausta ja savustettu liha synnyttää polysyklisiä aromaattisia hiilivetyjä (PAH) seurauksena rasvaa pudottamalla avotuli [28]. Shin et al ovat ehdottaneet roolia tupakoinnin ja alkoholin kulutusta ja peräsuolen syövän synnyn. Tupakointi todettiin antaa suuremman riskin kehittyneen adenoomien ja 3 tai enemmän adenoomia kuin yhden riskin tai yhden adenoomia [35]. Mahdolliset biologiset mekanismit tämän yhteyden muun muassa syöpää aiheuttavia toiminta polysyklisiä aromaattisia hiilivetyjä (PAH), nitrosamiineja ja aromaattisia amiineja, joko läsnä tai tuotettu, polttamalla tupakkaa [36]. Useita tapoja on ehdotettu alkoholin vaikutusta riskien CRC kuten asetaldehydi, hapettumistuote alkoholia [37]. On myös havaittu, että mikrobiologisesti tuotetun asetaldehydiä etanolista voi lisätä riskiä paksusuolen syöpä kautta folaatin puute [38]. Alkoholi on antagonisti metyyli-ryhmän aineenvaihduntaa ja voi osaltaan epänormaalin DNA metylaatio tai saattaa lisätä riskiä CRC epäsuorasti immunosuppressiota, viive DNA korjaukseen, aktivointi maksan prokarsinogeenien induktiolla Sytokromi P-450-entsyymien, tai muutoksia sapen happo koostumus [39]. Esillä olevassa tutkimuksessa, alkoholin ja tupakoinnin raportoitiin 45% (28/62) ja 42% (26/62) tapauksissa, vastaavasti. Yhdistys näkyi erityisesti kun on kyse miespotilailla jossa 60% ja 53% potilaista nämä tavat ja on yhtä mieltä havaintojen Cho et al [40].

promoottorialueille Useiden tuumorisuppressorigeeneille sisältävät CpG saaret ja saattaa olla mukana geenien metylointi [22]. RASSF1A promoottori metylaatio havaittiin 47% tapauksista. Muut kirjoittajat ovat raportoineet taajuus RASSF1A mehylation välillä 16-81% tapauksista CRC [41], [42]. Siinä on potentiaalia olla ihanteellinen syöpä biomarkkereiden, esiintyy monenlaisia ​​kasvaintyypeissä ja verrattain ole laajalti havaittu normaaleissa kudoksissa [10]. RASSF1A metylaatio havaittiin myös vain 8 tapausta normaalissa limakalvo viittaa siihen, että metylaatio tapahtuma on todennäköisesti aloitettu viereisen alueen myös. Nykyinen ja formerit tupakoitsijat on osoitettu olevan suurempi esiintyvyys RASSF1A metylaation ja esiintyvyys on vielä suurempi kasvaimia korkeamman asteen, myöhemmin ja enemmän invasiivisia tai etäpesäkkeitä [10]. Esillä olevassa tutkimuksessa 42% potilaista oli aikaisemmin ollut tupakoinnin. Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, käänteinen korrelaatio RASSF1A metylaatio ja Kras mutaatio CRC [43]. Ei ole varmaa, miten RASSF1A vaikuttaa sen biologista käyttäytymistä, vaikka niiden suora /epäsuora vuorovaikutus aktivoidulla Ras. Kuitenkin meidän tutkimus on osoittanut synergia näiden kahden geenin, joka voi yksinkertaisesti korostaa isäntä liittyvien geenien signalointireitiksi.

FHIT promoottori metylaatio havaittiin 37% tapauksista. FHIT promoottori hypermehylation on havaittu 20-71% tapauksissa CRC vain kaksi tekijää [44], [45]. Sultana et al ovat osoittaneet, että FHIT geeni voi olla osallisena etiologiassa erilaisten syöpien muiden kuin kohdunkaulan syöpä, kuitenkin tukevat tiedot on vähäistä [46]. Vaikka vaihtoehtoisen silmukoinnin ihmisen FHIT ei ole suoraan liittynyt Karsinogeneesin FHIT voidaan inaktivoida toistuvasti eksonin ohitus, intronin säilyttäminen, ja aktivointi kryptisen silmukointikohdan eksonissa 6. CRC [47]. Epänormaali ilmentyminen FHIT ehdokas tuumorisuppressorigeenin on havaittu erilaisissa ihmisen kasvaimissa, mutta vähän tiedetään sen ekspression aikana peräsuolen kasvaimien syntyyn. Tutkimus Yhdistynyt kuningaskunta on osoittanut vähentänyt ilmentymistä FHIT pienellä osalla paksusuolen syövän esiasteita ja suurempina määrinä ensisijaisen ja metastasoituneen kolorektaalisyövissä viittaa siihen, että FHIT on rooli kehittymistä ja etenemistä noin paksusuolikarsinoomat [48]. Meidän tuore tutkimus on osoittanut romaani missensemutaatio vuonna FHIT geeni ja tulkinnut vaikutus HPV-välitteisen kohdunkaulasyövän Indian women [49].

MGMT promoottori metylaatio havaittiin 47% tapauksista esillä olevassa tutkimuksessa. MGMT promoottori hypermehylation on havaittu 20-41% tapauksissa CRC [8], [25], [50]. Lisäksi, MGMT menetys on havaittu olevan yhteydessä mutaatioita Kras [14]. Sidhu et al [13] ovat osoittaneet, että ilmaantuvuus MGMT hypermetylaation on selvästi yleisempää henkilöillä, joilla aikaisempi tupakointi, alkoholismi ja saanti ei-kasvisruokaa keskuudessa eturauhassyövän tapauksissa valvonta ja potilailla, joilla on eturauhasen hyvänlaatuista liikakasvua. Havaitsimme, että tupakointi (66%) ja alkoholin nauttiminen (62%) olivat yleisimmät elämäntapatekijöiden potilailla, joilla MGMT hypermetylaation. MGMT hypermetylaation ovat osoittautuneet hyödyllisiksi ennustavia ennustetta ja reagointikykyä syöpien ja pahanlaatuisten gliooman [51], [52].

Brink et ai [6] ja Cejas et al [53] eivät ole osoittaneet tilastollinen assosiaatio kasvaimen vaiheen ja etäpesäkkeiden kanssa Kras mutaatio. Kuitenkin meidän tulokset ovat yhdenmukaisia ​​kyseisen havaita mannoosi [54], jossa he havaitsivat, että Kras mutaatiot liittyvät merkittävästi imusolmuke etäpesäke ja kasvain vaiheessa, mutta ei siinä kasvumalli paksusuolen karsinoomia. Kras mutaatiot voivat merkittävästi osallisena biologisessa sairauden kehittymiseen siten vaikuttavat sen yleistä käyttäytymistä ja reagointikykyä.

tulosten perusteella, kombinatorinen läsnäolo mutatoidun kras (kodoni 12) ja denaturoidulla RASSF1A, FHIT ja MGMT geenit voitaisiin karakterisoida paremmin kehittynyt kasvain vaiheessa, etäpesäkkeitä, korkeamman asteen kasvaimet ja läsnäolo imusuonten invaasion kuin erikseen tarkasteltuina. Conjunctional esiintyminen useampi kuin yksi variaatio voi toimia synergistisesti vaikuttavat aggressiivisuus tämän taudin ja aloitetaan tuumorin muodostumiseen näillä alueilla. Nämä geneettiset ja epigeneettiset vaihtelut toimivat yhdessä päätettäessä yleistä kohtalo tauti. Ei ole selvää, mitä tapahtuu ensin, DNA hypermetylaation tai geneettinen mutaatio. Vuonna pahanlaatuisten vaurioiden, este tarkkailun leviäminen DNA: n metylaation peräisin promoottorialueen transkription sivusto on lyhennetty, siis niillä on keskeinen rooli kasvainten kehittymiseen, aloittamisen ja etenemiseen.

Vertailut eloonjäämisessä väliin villityypin /metyloimaton ryhmä vs. mutantti /metyloitu ryhmä tehtiin, mutta eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (p-arvo 0,05). Tämä saattaa johtua siitä, että lyhyemmät seurata datan ja se, että vain 1 tapauksessa (kuolema) esiintyi keskuudessa Potilaskohortti mukana tutkimuksessa.

Yhteenvetona tiedot osoittivat, että kasvain vaiheessa 3, kohtuullisesti erilaistunut kasvaimet, läsnäolo imusuonten invaasion ja puuttuminen etäpesäkkeiden havaittiin useammin kasvaimissa mutatoitunut Kras ja metyloidut RASSF1A, FHIT ja MGMT geenejä. Näin ollen nämä merkit voidaan käyttää arvioitaessa yleistä patologinen tila taudin parempaa kohdistamista tähän heterogeeninen ryhmä syöpiä. Lopuksi geneettinen mutaatio Kras geenin ja epigeneettiset muutoksia RASSF1A, FHIT ja MGMT geenejä satunnaista CRC liittyvät yleiseen taudin kehitystä ja voidaan käyttää diagnostisia tai ennustetekijöitä markkereita tämän ryhmän syöpiä. Synergistinen keskinäistä suhdetta geneettiset ja epigeneettiset tekijät peräsuolen kasvainten synnyssä voi auttaa parantamaan yleistä lähestymistapaa tähän tautiin.

tukeminen Information

Taulukko S1.

doi: 10,1371 /journal.pone.0060142.s001

(DOC) B

Kiitokset

Tekijät haluavat kiittää kaikkia potilaita ja heidän sukulaisiaan tuesta ja yhteistyöstä . Lisäksi haluaisimme tunnustaa Rajiv Gandhi Cancer Institute Tutkimuskeskuksen, Delhi, Intia tarjoamiseksi biologisten näytteiden ja kliiniset tiedot ja Intian neuvoston Medical Research, New Delhi, Intia ja Institute of sytologia Ennaltaehkäisevä Oncology (ICMR), Intia tarjota ydin tarvittavan infrastruktuurin ja institutionaalisten rahoitusta.