Krooninen sairaus

tiivistelmä

korkea kuolleisuus munasarjasyöpiä johtuu myöhäisvaiheen diagnoosi ja puute tehokasta hoitoa. Huolimatta valtavasti työtä kehittää parempia hoitomuotoja kehitettäessä, platinapohjaisen kemoterapian on edelleen hoidon taso munasarjasyöpä potilaille, ja vastus tapahtuu suurella nopeudella. Yksi nopeutta rajoittava tekijät käännös uuden lääkkeen muuntaminen kliinisiksi hoitoja on ollut puutetta sopivista prekliinisissä syövän malleja, joilla on korkea ennustearvo. Olemme aikaisemmin tuotettu geneettisesti hiiri (GEM) mallit perustuvat häiriön

Tp53

ja

Rb

tai ilman

BRCA1

tai

Brca2

kehittäviä serous epiteelin munasarjasyöpä (SEOC) muistuttavista ihmisen taudin histologisen ja molekyylitasolla. Tässä kuvaamme mukaelma nämä GEM mallien potilaalle tehdä allograftien että tasaisesti kehittää kasvaimia lyhyen viiveen ja sopivat ihanteellisesti rutiini prekliinisissä tutkimuksissa. Munasarjojen kasvaimet puutteellisia

BRCA1

vastata sisplatiinihoidolle ja olaparib, PARP estäjä, kun taas

BRCA1

-wild tyypin kasvaimet ovat ei reagoi hoitoon, pääpiirteittäin suhteellinen herkkyydet potilailla. Nämä hiiri malleja tarjoavat mahdollisuuden arvioida tehokkaita hoitomuotoja, kuten ennustaminen ero vasteita

BRCA1

-wild tyyppi ja

BRCA1

vajausta kasvaimia ja kehittää asiaan biomarkkereiden.

Citation: Szabova L, Bupp S, Kamal M, Householderin DB, Hernandez L, Schlömer JJ, et al. (2014) Pathway-Specific Engineered Mouse Allograft mallit Toiminnallisesti kerrata Human seroosit epiteelikasvaimet munasarjasyöpä. PLoS ONE 9 (4): e95649. doi: 10,1371 /journal.pone.0095649

Editor: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japani

vastaanotettu: 10 helmikuu 2014; Hyväksytty: 28 maaliskuu 2014; Julkaistu: 18 huhtikuu 2014

Tämä on avoin-yhteys artikkeli, vapaa kaikki tekijänoikeudet, ja saa vapaasti jäljentää, levittää, välittää, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta. Teos on saatavilla Creative Commons CC0 public domain omistautumista.

Rahoitus: Hanke on rahoitettu kokonaan liittovaltion varoja National Cancer Institute, National Institutes of Health, sopimukseen numero HHSN261200800001E. Pohjimmiltaan tämä julkaisu ei välttämättä edusta tai politiikan Department of Health and Human Services, eikä mainita kaupan nimiä, kaupallisia tuotteita, tai organisaatioiden merkitse, Yhdysvaltain hallituksen. Rahoittaja ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

munasarjojen syöpä on toiseksi yleisin gynecologic syöpä ja yleisin syy gynekologiset syöpään liittyvistä kuolemantapauksista USA: ssa [1], jossa on yli 50%, joka ilmenee serous epiteelin munasarjasyöpä (SEOC). Pisimmällä SEOCs on levinnyt munasarjasta aikaan diagnoosi, ja niiden hallinta liittyy kirurginen de-kokoamis, jälkeen kemoterapiaa yhdistelmä platinaa ja taksaanilääkkeet [2], [3]. Huolimatta aluksi suuri hoitovaste, useimmat potilaat relapsi mediaani ilman taudin etenemistä 18 kuukauden [4], joten etsimään uusia terapeuttisia välttämätöntä.

Viime vuosien paljon on edistytty tunnistamisessa tunnusmerkki geneettiset vauriot liittyvät SEOC. Cancer Genome Atlas (TCGA) tutkimus suuren korkealaatuista SEOC kohortin paljasti, että mutaatiot

TP53

vallalla, joita oli vähintään 96% kasvaimista [5]. Muutokset RB verkon havaittiin 67%: ssa tapauksista, ja noin 20% kasvaimista ollut ituradan tai somaattiset mutaatiot

BRCA1 /2

ylimääräinen 11% menetettyään BRCA1 ilmaisun epigeneettisellä hiljentäminen [5] .

BRCA1 ja BRCA2 tärkeä asema homologinen rekombinaatio (HR), ja menetys joko proteiinin johtaa puute kaksijuosteisen DNA: han katkoksen (DSB) korjaa [6]. HR-vajaiden solujen, DSB korjautuvat virhealtista mekanismeja, jotka voivat johtaa perimän epävakaisuuden. Kemialliset esto yksijuosteisen (ss) DNA: han katkoksen korjaus in HR-vajaiden solujen voi johtaa synteettisten kuolleisuutta johtuen samanaikaista puuttuminen kahden DNA korjaukseen väyliä [7], [8]. Klinikalla, poly (ADP) -ribose polymeraasin estäjät (PARPi) laaditaan arviointi menetelmänä hyödyntää synteettisiä kuolleisuutta terapeuttiseen interventioon. PARP-1 vaaditaan tunnistamiseen ssDNA tauot (SSB) ja rekrytointi korjata proteiinien vaurioitunut sivustoja [9]. Inhibitio tämän prosessin BRCA-vajaiden solujen johtaa kertyminen DSB, koska romahtanut replikaation haarukat, ja lopulta solukuolemaan [10] – [12]. Näiden tulosten perusteella, PARPi on testattu kliinisissä kokeissa yksittäisinä tai yhdistelmänä hoitoihin nähden pitkälle edenneitä kiinteitä kasvaimia [13] – [15]. Äskettäin suun kautta PARPi, olaparib (AZD2281), oli kliinisiä antituumorivaikutus in BRCA liittyvien munasarja- ja rintasyöpiä [15] – [19].

Toistaiseksi kliinisissä kokeissa uusia terapeuttisia aineita ovat luottaneet prekliinisissä tutkimuksissa solulinjoissa ja immuunipuutteisilla solulinjan ksenograftimalleissa. Myöhemmät korkea keskeyttäneiden määrää ihmisen tutkimusten tulokset viittaavat siihen tarvitaan kokeellisissa malleissa paremman ennustearvo [20]. Geneettisesti hiiren malleissa (GEMMs) on tärkeitä etuja verrattuna solulinjaan ksenograftimalleja, että kasvaimia ohjaavat määritellyt geneettisiä tapahtumia ja johtuvat kertyminen ylimääräisiä stokastisen tapahtumien sisällä elimeen ja ovat näin ollen edellyttää viranomaisten microenvironment ja isäntä soluvasteita. Useat epiteelin munasarjasyövän GEMMs jotka kehittävät kasvaimia muistuttavat ihmisen sairauden on raportoitu [21] – [25]; kuitenkin, nämä mallit eivät ole räätälöity tehokkaaseen käyttöön prekliinisissä tutkimuksissa, ja harvat kerrata kaikkia geneettisiä ja biologiset ominaisuudet ihmisen SEOC.

Aikaisemmin on raportoitu GEMMs että kehittää munasarjojen syöpiä geneettisen ja biologisen ominaisuudet ihmisen SEOCs [26]. Kohdennettu munasarjojen pinnan epiteeli, kumota RB tuumorisuppressiogeeneksi (TS) aloitti tauti, ja

Tp53

aberraatiota (missensemutaatio tai poistetaan) helpottanut taudin etenemistä aggressiiviseen vatsakalvon levittämiseen ja etäpesäke. Munasarjojen kasvaimet näistä malleista, myös puutteellisia joko

BRCA1

tai

Brca2

, edustavat kaikki 4 transkription alaluokkien ihmisen SEOC. Täällä käytämme näitä malleja luoda potilaalle tehdä immunokompetentteja elinsiirtojen malleja, ja tuottaa synkronoitu ikäluokat hiirien sopivia prekliinisissä tutkimuksissa. Sen määrittämiseksi, ovatko nämä mallit ovat taipuisa käytettäväksi rutiini tehotutkimukseen ja jos niiden terapeuttinen vastaukset heijastavat havaittujen tulosten ihmiskokeissa teimme yhden tai yhdistelmähoito standardi platina kemoterapiaa ja olaparib. Kuten havaitaan potilailla, hoitovaste oli riippuvainen

BRCA1

asema, mikä osoittaa hyödyllisyyttä näiden mallien arvioitaessa potentiaalisen tehon uudenlaisten hoitomuotoja munasarjasyöpä.

Materiaalit ja menetelmät

Koe-eläimet

Kaikki eläinkokeet suoritettiin mukaisesti eläinten tutkimusprotokollan hyväksymä Institutional animal Care ja käyttö komitean Frederick National Laboratory for Cancer Research ja National Institutes of Health Guide for Care ja käyttö of Laboratory Animals. FNLCR on akkreditoitu AAALAC Internationalin ja seuraa Public Health Service Policy for Care ja koe-eläinten käytön. Eläinten hoito toimitettiin menettelyjen mukaisesti esitetty ”Guide for Care ja käyttö Laboratory Animals” (National Research Council, 1996; National Academy Press, Washington, D.C.). Eläimet pidettiin esteenä laitokseen FNLCR alle HEPA suodatus mikro eristäjä häkeissä ja ruokitaan autoklavoida laboratorio jyrsijöiden ravintoa (LabDiet, St. Louis, MO). Kaikki eläin menettelyt suoritettiin anestesiassa käyttämällä hengittämällä 1-2,5% isofluraania. Päätepiste hiirillä oli muutos yleistä terveydentilaa, erityisesti 20% painonmenetyksen, kyvyttömyys syödä, juoda, tai kiertää, selän asento, hengitysvaikeuksia tai merkkejä hypotermia sekä merkkejä Askites kanssa vatsan turvotus ja konkreettista kasvain noin 2 cm kokoinen. Eläimet, jotka oli kliinisiä oireita, kiinteän kasvaimen kasvua 2cm, tai tuli kuolemaisillaan ennen maksimi askites laajennus (arvioitu kaksinkertaistuminen leveys vatsa) reagoitiin nopeasti lopetettiin CO2 hengitettynä.

Yksityiskohtaiset Hiirikanta tiedot ja sukupolven adenoviraalisesti indusoi SEOC malleja on kuvattu aiemmin [26]. Beige nude [Kr: NIH-bg-nu-XID], atyymisissä nude [Kateenkorvattomia NCR-nu /nu] ja FVB [FVB /NCR] naaras hiiret saatiin Animal Production Program, FNLCR tai Jackson Laboratories [FVB /NJ ].

Orthotopic kasvaimen siirron

Jos haluat suorittaa potilaalle tehdä kasvaimen siirrosta, lannerangan alueella FVB naisilla (5-8 viikkoa) oli ajeltu, eläimet nukutettiin ja iho aseptisesti valmisteltiin leikkaukseen . Lateraalinen pitkittäinen ihoviillon tehtiin kyljen alueelle päällä oikea munasarja ja toinen pienempi viilto tehtiin vatsakalvon. Altistuvat munasarja, ympäröivän rasva pad, oli exteriorized ja pieni luovuttajan kasvainpala (noin 2 mm) työnnettiin alle Bursa kautta pieni kirurginen kyynel. Munasarjat vaihdettiin takaisin vatsaonteloon, vatsakalvon ommeltiin ja iho suljetaan metalliklipseillä.

Soluviljelmät

Ihmisen munasarjasyöpäsolulin- linja HeyA8 oli lahja Dr. Elise Kohn , NCI, ja alun perin kuvattu [27]; linjat 1A9 ja sisplatiini kestävä 1A9CP80 olivat lahja tri Tito Fojo (NCI), ja saatiin kuten [28], [29];

BRCA1

mutanttisolullnjan UWB1.289 saatiin ATCC (Manassas, VA). Kaikki munasarjojen linjat viljeltiin RPMI (Life Technologies, Grand Island, NY), jossa 10% naudan sikiön seerumia (Hyclone, Pittsburg, PA) ja standardi antibiootit; 1A9CP80 soluelatusainetta täydennetty 80 mM sisplatiinin (Tocris, Bristol, UK). Yksityiskohtainen menettely perustamiseen hiiren munasarjasyövän solulinjoissa annetaan Data S1.

In vitro

-sytotoksisuusmäärityksiä

elinkelpoisuus liitteenä munasarjasyöpäsoluja arvioitiin käyttäen XTT kuten on kuvattu [30]. Lyhyesti, solut siirrostettiin 96-kuoppaisille levyille tiheydellä 1-2,000 solua /50 ul /kuoppa ja inkuboitiin 24 tuntia. Sisplatiini (Tocris, Bristol, UK) ja olaparib (AZD2281, Selleck Chemicals, Houston, TX) valmistettiin dimetyylisulfoksidiin (DMSO) varastot ja levitetään päällystetty soluja juuri valmistettuja työliuoksissa laimennossarja väliaineessa. Solut kasvatetaan tuoretta huumeiden 3 päivän kuluttua ja elinkelpoisuus määritettiin 7 päivän jälkeen inkuboimalla viljelmiä XTT ja mittaamalla absorbanssi käyttäen Tecan F200 levynlukijaa (Research Triangle Park, NC). Solutiheys käsitellyissä kuopissa ilmaistiin prosentteina kontrollista. Kokeissa mukana triplikaattinäytteet ja toistettiin vähintään kolme kertaa. IC 50-arvot (pitoisuudet tuottavat menetys elinkelpoisuuden 50% soluista) laskettiin lineaarisella regressiolla.

Prekliiniset hiirillä

in vivo

tutkimuksissa, sisplatiini (Tocris , Bristol, UK) liuotetaan steriiliin 0,9% suolaliuosta ja ruiskutettiin intraperitoneaalisesti, ja olaparib (AZD2281, Selleck Chemicals, Houston, TX), annettiin suun kautta ajoneuvon [PBS, joka sisälsi 10% DMSO: ta (Sigma, St. Luis, MO) ja 10% (2-hydroksipropyyli)-syklodekstriini (Sigma, St. Luis, MO)]. Sillä farmakodynaamiset tutkimukset hiirillä, joilla on todettu potilaalle tehdä munasarjojen kasvaimia (-0,5 cm) käsiteltiin: 1) sisplatiinia (5 mg /kg), n = 3; 2; 3 ja 3 linja 29255; 32233; 39877 ja 30200; vastaavasti, 2) olaparib (50 mg /kg), n = 1; 3; 2 ja 3 linja 29255; 32233; 39877 ja 30200; vastaavasti 3) sisplatiinia (5 mg /kg), jota seurasi olaparib (50 mg /kg) 1 tunti myöhemmin, n = 3; 2; 2 ja 2 linjan 29255; 32233; 39877 ja 30200; vastaavasti tai 4) ajoneuvon, n = 2; 2; 2 ja 1 linja 29255; 32233; 39877 ja 30200; vastaavasti päivänä 1. Ryhmät 2 ja 4 sai toisen annoksen olaparib ja ryhmän 4 uuden annoksen ajoneuvon 24 tuntia myöhemmin. Kaikki eläimet tapettiin päivänä 2, kahden tunnin kuluttua viimeisen annoksen. Kasvaimen kudokset kerättiin ja PAR mitattiin käyttämällä HT PARP

in vivo

Farmakodynaamiset määritys II (Trevigen, Gaithersburg, MD). Kasvaimen lysaatit valmistettiin valmistajan ohjeiden ja 2 ug kokonais proteiinit analysoitiin.

tehoa ja pitkäaikaiseen hoitoon tutkimuksia eläimillä palpoitavissa kasvaimia (-0,5 cm) oli kuvattu ja satunnaistettiin 4 hoitoryhmään, kuten edellä on kuvattu, joka perustuu kasvaimen tilavuus saavuttaa noin sama jakauma määrien kaikissa ryhmissä. Sisplatiini intraperitoneaalisesti kerran viikossa. Olaparib ja ajoneuvojen annettiin suun kautta 5 peräkkäisenä päivänä viikossa. Animals in tehotutkimuksissa hoidettiin 2 tai 3 viikkoa, kuvaamisen muutosten määrittämiseksi kasvaimen tilavuuden ja lopetettiin 2 tunnin kuluttua olaparib /ajoneuvo annostelu. Animals in pitkäaikainen annostelu tutkimuksessa hoidettiin 10 viikon ajan ja kuvattiin toinen viikko ultraäänellä (US) määrittää kasvaintilavuudet. Ne seurattiin hoidon lopettamisen jälkeen tuumorin kehityksen ja uhrattiin kerran kuolemaisillaan takia kasvaintaakkaa. Kasvainkudoksessa kerättiin histologista analyysiä ja immunohistokemia (IHC).

geeniekspressioprofilointi

geeniekspressioprofilointi ja vertailu hiiren ja ihmisen aineistot suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [26]. Tiedot geeniekspressioanalyysiä hiiren ensisijainen ja johdetut potilaalle tehdä SEOC kasvaimet ovat julkisesti nähtävillä Gene Expression Omnibus tietokannasta hakunumerolla GSE51927.

Data S1 sisältää materiaalia ja menetelmiä perustamiseen hiiren ensisijaisen kasvainsolulinjoihin, solu implantaatioiden kuvantaminen ja kasvaimen tilavuus mittauksia, kudoksen keräys, patologinen ja IHC analyysi, määrällinen analyysi IHC tahroja, immunofluoresenssivärjäyksellä ihmisen ja hiiren solut ja kvantitatiivinen PCR-analyysi

BRCA1

tila.

tulokset

Transplant mallit säilyttävät biologisen ja geneettisiin ominaisuuksiin ensisijaisen SEOCs

GEM SEOC mallit saatiin aikaan injektoimalla adenoviruksen Cre vektori munasarjojen Bursa hiirten kätkeminen erilaisia ​​yhdistelmiä Cre-riippuvaisten alleeleja. Kuten aiemmin on kuvattu [26], kun RB-TS toiminto inaktivoitiin kautta ilmaus

TgK18

T121

alleeli yhdistettiin

Tp53

poisto tai missensemutaatio (

p53

R172H

), syövät kehittynyt vuosien kuluessa 8-12 kuukautta tuottaa korkealaatuista etäpesäkkeitä. Menetys

BRCA1

tai

2

yhdistettynä RB-TS inaktivoitumista ei aiheuttanut taudin etenemisen jälkeen vaiheen I ilman samanaikaista Tp53 poikkeavuus, eikä havaittavasti vaikuta biologia sairauden etenemisen yhdistettynä häiriön

Rb

ja

Tp53

. Kuitenkin

BRCA1

tai

Brca2

tila selvästi vaikutuksia tiettyihin hoitotulosten ihmisillä; Siksi oli tärkeää säilyttää malleja sekä ilman villityypin

BRCA1

prekliinisissä tutkimuksissa.

de novo

SEOC mallit ovat erinomaisia ​​ymmärtämiselle taudin etiologiaa ja biomarkkereiden löytö, mutta niillä on pitkä latenssi edenneen taudin, joten ajoitus kohortin tuotannon prekliinisissä tutkimuksissa haastava. Lisäksi johtuen läsnäolo p53

R172H alleeli (null alleeli ennen rekombinaatiota), SEOC GEM malleja voi kehittyä kasvaimia ulkopuolella munasarja kuten lymfoomat ja sarkoomat [26], vähentää ennustettavissa kohortin koko. Nämä ominaisuudet tekevät mallien optimaalinen prekliinisissä terapeuttisia tutkimuksia.

sopeutua näiden mallien tehokkaita prekliinisissä työkalujen säilyttämisen SEOC strooman ominaisuudet ja immunocompetency, me optimoitu potilaalle tehdä elinsiirtoja kasvainkappaleita ensisijainen GEM johdettuja SEOCs osaksi munasarjan Bursa of saajahiiret (Fig. 1A). 35 primaaristen kasvainten, 17 kasvaimia onnistuneesti siirrostettiin syngeenisiin saajahiiret (taulukko 1). Take korko passage 1 vaihteli 20-100% eri tuumorilinjoja on selviä eroja ottaa välinen kurssi

BRCA1

null (

TgK18G

T121

tg /+ /BRCA1

Δ /Δ /p53

Δ /Δ) B ja

BRCA1

villityypin

(TgK18G

T121

tg /+ /p53

Δ /Δ)

kasvaimet (95% ± 5,0 vs. 64,5% ± 5,6, p 0,01). Sekä genotyyppejä, latenssi kehityksen terminaalivaiheessa oli huomattavasti lyhennetty 9,95 ± 1,29-2,12 ± 0,61 kuukautta verrattuna de novo malli (taulukko 1). Myöhemmät

in vivo

siirrostamalla edelleen lyhennetty latenssit parani usein take hinnat (taulukko 1). Havaitsimme myös eroja latenssin välillä -jaettuja kasvaimia

TgK18G

T121

tg /+ /BRCA1

Δ /Δ /p53

Δ /Δ

v

s TgK18G

T121

tg /+ /p53

Δ /Δ

genotyyppejä ensimmäisen (P1) (2,8 ± 0,2 kuukausi vs. 3,6 ± 0,1 kuukautta, p 0,01) ja toinen (P2) passage (1.8 ± 0,1 kuukautta vs. 2,7 ± 0,2 kuukausi, p 0,01). Huomattavaa on, että myös pyrkinyt luomaan potilaalle tehdä siirteen mallia käyttäen soluja viljeltiin primaarikasvaimista tai askites. Vaikka tällaiset viljelmät voitaisiin helposti todettavissa

in vitro

ja osoittautunut hyödylliseksi arviointia lääkkeen sytotoksisuus (katso jäljempänä), potilaalle tehdä istutuksen

in vivo

oli paljon vähemmän onnistunut tehokkaasti luoda kasvaimissa, joissa vaaditaan uskollisuutta verrattuna suoralla elinsiirrot kasvainkudosnäytteet syngeenisissä vastaanottajia (Data S1).

, Allograft malleja SEOC tuotettiin siirtoistutusten munasarjakasvain fragmentteja

de novo

malleja SEOC alla bursae syngeenisten immunokompetenttien hiirillä. Ensisijainen munasarjasyöpäsolulinjoihin tuotettiin samanaikaisesti. Latenssi kasvainten kehittymisen potilaalle tehdä mallien lyhentää huomattavasti verrattuna latenssi

de novo

malli. B, H R5810T, R5838T) ja mutantti (

TgK18G

T121

tg /+ /BRCA1

Δ /Δ /p53

Δ /Δ

; 39647T, 60577T, 60580T, 82394T) hiirisolulinjoja osoittaa merkittävää eroa genotyypit (T-testi, 333,7 ± 54,1 vs. 146,0 ± 8,2, p 0,01 ja 18,2 ± 1,4 vs. 10,4 ± 1,2, p 0,05, vastaavasti huumeiden). Keskimääräinen ja keskivirhe on esitetty.

vertaileva -sytotoksisuusmäärityksiä hiiren ensisijainen SEOC solujen linjat, kätkeminen joko villityypin

BRCA1

tai deleetiomutantin, viljeltiin. Kuten raportoitu aiemmin [31],

BRCA1

vajausta solut kasvavat huonosti kulttuuriin. Siten koska Cre-välitteisen rekombinaatio in vivo ei ole 100%, on vahva

in vitro

valinnan solujen riittämätön

BRCA1

poisto solulinjoissa peräisin pääasiallisesti

BRCA1

puutteellinen kasvaimissa [31]. Out of 32 solulinjoja seulotaan neljä solulinjoja että ylläpidetään pienin

BRCA1

ekspressiotasot (alle 20%) suhteessa

BRCA1

villityypin linjat valittiin edustamaan

BRCA1

-puutos (Fig. 2C). Nämä tasot

BRCA1

olivat verrattavissa niiden vanhempien kasvaimet (Fig. 2 D).

BRCA1

puute vahvistettiin myös funktionaalisella testillä, jossa säteilytettyjä soluja pysty rekrytoimaan RAD51 sivustoille DSB (Fig. S2).

BRCA1

vajausta solulinjoissa (39647, 60580, 60577 ja 82394; kaikki

TgK18G

T121

tg /+ /p53

Δ /Δ /BRCA1

Δ /Δ

genotyyppi) olivat noin 2 kertaa herkempi sisplatiinia kuin

BRCA1

-wild tyyppi linjat (R5810 ja R5838; molemmat

TgK18G

T121

tg /+ /p53

Δ /Δ

genotyypin Fig. 2E-F). Vastaavasti hoito olaparib osoitti enemmän potenssia

BRCA1

vajausta kuin

BRCA1

-wild tyyppiä solulinjoja (Fig. 2 G-H). Tuloksemme osoittavat, että nämä solulinjat jäljitellä suhteellinen herkkyydet ihmisen kasvaimissa, joissa

BRCA

mutaatiot löytyy useammin Platinasensitiivisten kuin platina-resistenttejä [32], [33].

Orthotopic elinsiirron mallit Yhteenvetona

BRCA

-aiheiset erot hoitovaste havaittiin potilailla

Ihannetapauksessa tehokkaaseen käyttöön mitään prekliinisen mallin inhimillisen terapeuttisten ja hoitoon liittyvä biomarkkerit, ennustettavuus tunnettujen ihmisen vastausten olisi perustettava. Tätä varten me vastetta arvioitiin

BRCA1

vajausta ja -wild tyyppi SEOC malleja sisplatiinin ja olaparib. Ensinnäkin, pystyvät määrittämään optimaalisen annostusohjelman, tutkimme kasvaimen kasvukinetiikat sarjaliikenteisenä magneettikuvaus (MR) (Fig. S3). Vastaanottaja eläimille kehittyi pieniä ovarioiden 70-80 mm

3 (-0,5 cm), jonka 21-28 päivää implantaation jälkeen (p. I.), Jota seuraa nopea tuumorin kasvu. Eläimiä tuli kuolemaisillaan johtuen suurista munasarjojen kasvaimia ja Vesivatsanesteestä 40-60 päivää infektoinnin jälkeen Tehon tutkimista varten, hoito aloitettiin kerran pieni ( 80 mm

3) kasvain massa oli kehittynyt, jotta matkia diabeetikoilla, joiden tuumorikuorma seuraava de-täyteaineena leikkaus (tutkimuksen suunnittelu kuviossa. 3A).

A Kaavio on annostusohje ja kuvantamisen tehoa koskevat tutkimukset. B, inhibitio PAR muodostumisen kasvaimen lysaateissa käsiteltiin olaparib 2 (C). Keskimääräinen ja keskivirhe on esitetty. D, edustaja MR kuvat ennen ja jälkeen 2 viikon hoidon ajoneuvon olaparib, sisplatiini tai yhdistelmä olaparib ja sisplatiinin näkyvät. Mittakaava on 1 cm. Valkoinen nuolet osoittavat kasvaimia, vihreät nuolet osoittavat contralateral munasarjat. MRI perustuva kvantifiointi kasvaimen tilavuuden muutosten ilmaistuna RTV Seuraavat 2 viikossa (E) ja 3 viikkoa (F) hoito. Tilastollisesti merkittäviä eroja ryhmien välillä analysoitiin yksisuuntaisella ANOVA ja Tukeyn monivertailuja testi. Jokainen piste edustaa yhtä eläintä. V; ajoneuvo, O; olaparib, C; sisplatiini, O + C; olaparib ja sisplatiinilla.

määrittämiseksi in vivo aktiivisuuden ja tavoite modulaatiota olaparib että potilaalle tehdä mallissa, me testattiin PAR tasoilla käsitelty kasvaimia. Kasvain lysaatit kaikista eläimistä sai olaparib hoito oli suuresti alentunut PAR tasoilla jälkeen lyhyen aikavälin (28 h; p 0,01 linja 32233, p 0,001 linjan 30200) ja pitkän aikavälin (2 viikkoa; p 0,01 linjan 29255 ja 30200, s 0,0001 linjan 39877) annostelu verrattuna hiirillä, joita hoidettiin vehikkelillä tai sisplatiinin (Fig. 3B, C), mikä osoittaa, että kasvain altistuminen olaparib riitti PARP inhibition. Kuten odotettua, ei ollut eroa PAR tasojen

BRCA1

vajausta ja villityypin kasvaimia, sopusoinnussa PAR muodostumista esiintyy ylävirtaan BRCA1, riippumatta tilan HR korjautumismekanismi.

arvioimme tehoa olaparib, sisplatiini ja niiden yhdistelmän

BRCA1

vajausta malleja kahden viikon kuluttua hoidon (Fig. 3d, E) mittaamalla suhteellinen kasvainten (RTV), kasvaimen tilavuuden muutokset lähtötasosta (pre-annostelu) loppuun pisteen määritettynä MRI. Jokainen piste kaaviossa edustaa yksittäisen hiiren. Kaikki 13 ajoneuvon hoidetuista eläimistä 2 itsenäistä kasvainmuodoista osoitti nopea kasvaimen kasvua 2 viikon kuluessa, jossa 3 eläimet uhrataan ennen päivää 14 heikentymisen vuoksi terveys kasvaimen kasvuun liittyvien (Fig. 3d, E). Hoito olaparib johti vaatimaton väheneminen kasvaimen kasvua

BRCA1

vajausta 30200 kasvain malli ja pienentää merkittävästi mallissa 39877 (p 0,01). Kuitenkin molemmissa tapauksissa väheneminen RTV oli selvempi, kun sisplatiinia (p 0,001) ja yhdistelmä sisplatiinin ja olaparib verrattuna olaparib yksin (p 0,01) (Fig. 3d, E).

sen tutkimiseksi, hoitovaste oli riippuvainen

BRCA1

tila, teimme 3 viikon hoitojakson tutkimuksen

BRCA1

vajausta malli 30200 ja

BRCA1

– villityypin malli 29255. Kuusi 9 ajoneuvon käsiteltyjen hiirten molempien linjojen tuli kuolemaisillaan ennen päivää 21. Sisplatiini mono- tai yhdistelmähoidossa oli yhtä tehokas klo 3 ja 2 viikkoa ajankohtina. Kuitenkin laajennettu hoito

BRCA1

vajausta kasvaimista olaparib suurempana kasvain vähennys verrattuna vehikkelillä hoidettuihin kasvaimia (2,037 ± 0,282 RTV vs. 5,598 ± 2,296 RTV, p 0,01) 3 verrattuna 2 viikon hoitojakson (3,008 ± 0,509 vs. 3,710 ± 1,325 RTV, ns), mikä viittaa siihen, että kynnys DNA-vaurion tarvitaan optimaalisen tehon. Sen sijaan,

BRCA1

-wild tyyppi kasvain malli ei vastannut olaparib huolimatta PARP inhibition kasvaimissa, joka osoittaa, kuinka tärkeää on vaurioitunut HR korjauksen olaparib tehoa (Fig. 3B, F). Sisplatiinihoidossa oli yhtä tehoton

Brca1-

villityypin kasvaimia (Fig. 3F).

BRCA1

genotyyppi vasteita platinaan lääkkeet sekä olaparib on dokumentoitu myös potilailla [34] – [37], joten potilaalle tehdä malli on hyödyllinen väline tutkia näitä ero vastauksista ja ennustamiseen mahdollisia tuloksia.

Histopatologisten johtuvia muutoksia olaparib ja sisplatiinihoitoon kuvastavat eroja havaittiin kasvainten

vaikutuksen arvioimiseksi lääkehoidon solutasolla, H & E-värjättyjen tuumorisektioiden analysoitiin histologisia muutoksia (Fig. 4 aa-l). Molemmissa

BRCA1

vajausta malleja, hoito olaparib johti vähemmän eriytetty SEOC lisääntynyt ydinvoiman koon ja pleomorfisimia verrattuna hyvin kohtuullisesti erilaistunut papillaarinen rakenteet munasarjakasvaimia ajoneuvojen käsitellyissä hiirissä (Fig. 4a , b). Sen sijaan, sisplatiinin monoterapiaan oli enemmän suuri vaikutus kasvainhistologiaa (Fig. 4ac), jotka tuottavat heikosti eriytetty papillaarisen SEOC tai erilaistumaton karsinooma jossa kasvaimen strooman nekroottisen pesäkkeet, ja apoptoottisten solujen suurella ydin- pleiomorphism ja läsnäolo epätyypillisten monitumaiset kasvain jättisolut. Hoito

BRCA1

vajausta malleja yhdistelmällä sisplatiinin ja olaparib johti histologia hyvin samanlainen kuin sisplatiinilla yksinään saaneista kasvaimet (Fig. 4ad). Sen sijaan vähäinen lääkehoidon vaikutuksia ei havaittu

BRCA1

-wild tyyppi kasvainmuoto ilmaisee yleisen yksimielisiksi histopatologisia ja kasvaimen tilavuuden muutosten seuraavat lääkehoidon (Fig. S4).

A, esimerkki histologian ja IHC on

TgK18G

T121

tg /+ /BRCA1

Δ /Δ /p53

Δ /Δ

kasvaimet sisplatiinia ja /tai olaparib (a -l).