Krooninen sairaus

tiivistelmä

Uusi hoitomuotoja myöhäisessä vaiheessa ja kastraatio kestävä eturauhassyövän (CRPC) riippuvat määritellään ainutlaatuisia ominaisuuksia ja reitit solun osapopulaatiosta kykenevät ylläpitämään nettokasvu syöpä. Yksi parhaista rikastamiseen järjestelmiä eristämiseksi oletetun varsi /esisolujen päässä hiiren eturauhanen on Lin

-; Sca1

+; CD49f

hi (LSC

hi), joka johtaa entistä yli 10 kertaa runsaammin

in vitro

palloja muodostavan aktiivisuuden. Olemme osoittaneet aiemmin, että LSC

hi alaryhmästä on sekä välttämätöntä että riittävää syövän aloittamista

PTEN

-null eturauhassyöpää malli. Parantaa sitä edelleen rikastamiseen järjestelmään, etsittiin solunpintamolekyylien voimistuvan kun kastraatio hiiren eturauhas- ja tunnistettu CD166 ehdokkaaksi geeni. CD166 koodaa solun pinnan molekyyli, joka voidaan edelleen rikastaa palloja muodostavan aktiivisuuden WT LSC

hi ja

PTEN

null LSC

hi. Tärkeää on, CD166 voisi rikastuttaa palloja muodostavan kyky hyvänlaatuisen ensisijainen ihmisen eturauhasen solujen

in vitro

ja indusoida tubulussolujen kaltaisia ​​rakenteita

in vivo

. CD166 ilmentyminen ylössäädellään ihmisen eturauhasen syöpien, erityisesti CRPC näytteitä. Vaikka geneettinen poisto hiiren CD166

PTEN

null eturauhassyövän malli ei häiritse pallo muodostumista tai estää eturauhassyövän etenemistä ja CRPC kehitystä, läsnäoloa CD166 eturauhasen varsi /esisolujen ja kastraatio kestävä alapopulaatioihin ehdottaa että se on solun pinnan molekyyli, jolla on kyky kohdennettua antoa varten ihmisen eturauhassyövän hoito.

Citation: Jiao J, Hindoyan A, Wang S, Tran LM, Goldstein AS, Lawson D, et al. (2012) tunnistaminen CD166 kuin Surface Marker rikastamiseksi Eturauhasen Varsi /esisolut ja Syöpä Käynnistetään solut. PLoS ONE 7 (8): e42564. doi: 10,1371 /journal.pone.0042564

Editor: Dean G. Tang, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 08 maaliskuu 2012; Hyväksytty: 09 heinäkuu 2012; Julkaistu: 03 elokuu 2012

Copyright: © Jiao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ on tuettu osittain palkinnon päässä Eturauhassyöpä Foundation (ja OW, IPG ja HW), Jean Perkins Foundation ja Department of Defense (ja IPG) ja avustusta National Institutes of Health (R01 CA107166 ja RO1 CA121110 HW ). ONW on tutkija ja Howard Hughes Medical Institute. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

edistysaskelista huolimatta varhaisen havaitsemisen ja eturauhassyövän hoito, kastraatio kestävä eturauhassyöpä (CRPC) jää toiseksi yleisin syy miesten kuolleisuus Yhdysvalloissa [1]. Asennus todisteet viittaavat siihen, että alapopulaatio eturauhasen solujen voi aloittaa eturauhassyövän ja ne voivat olla vastuussa kastraatio vastus [2], [3], [4], [5]. Siksi nämä syöpä aloittamista solujen [6] voi toimia lupaavana solukohteita eturauhassyövän ja tunnistaminen tämän alaryhmän on tullut välttämätön askel kohti tulevaisuuden tehokasta hoitoa.

alkuperä eturauhassyövän aloittamista solut ovat ristiriitaisia ​​[7 ], [8]. Normaalin eturauhasen ihmisen tai hiiren sisältää kolme erilaista solujen, eli luminal eritys-, pohjapinta ja neuroendokriinisoluissa. Koska ihmisen eturauhasen syöpä on ominaista menetys tyvisolujen ja laajentaminen onteloerityssolut, useissa eläinmalleissa kannasta, että luminaalinen erityisiä progenitorit ovat lähteet eturauhassyövän aloittamista [9], [10], [11]. Kuitenkin käyttämällä kudosten uudistumista lähestymistapa, tyvisolut ovat osoittautuneet tehokkaampi kasvaimia synnyttävän tavoitteet sekä ihmisen ja hiiren eturauhassyövän aloittamista [12], [13]. Mielenkiintoista, Xin ryhmä osoitti, että aikuisten hiiren eturauhasen tyvi- ja onteloerityssolut ovat itsestään jatkuvissa suvusta, joka voi sekä toimivat kasvaimia synnyttävän tavoitteet eturauhassyövän aloittamista [14].

PTEN on tärkeä rooli ihmisen eturauhassyövän ja CRPC kehittäminen [15] ja inaktivoidaan 20% ensisijaisen ja 60% etäpesäkeleesioita [16]. Hiiren

PTEN

eturauhassyöpämallin (

Pb-Cre

+; PTEN

L /L

) yhteenveto siitä taudin etenemistä ihmisellä, mukaan lukien CRPC [17], [ ,,,0],18], [19], [20], ja on monia allekirjoitus geneettisiä muutoksia ihmisen sairauden [17]. Tärkeää on, että

Pb-Cre

+; PTEN

L /L

malli tarjoaa ainutlaatuisen työkalu opiskeluun kasvaimen aloittamista solujen enemmistö onteloerityssolut ja alaryhmien tyvisoluihin ovat

PTEN

poisto [17], [18]. Mallin, osoitimme, että

PTEN

poisto aiheuttaa laajentamista tyvi- ja ohimeneviä vahvistava -alapopulaatioiksi ja myöhemmin kasvain aloittaminen

in vivo

[18]. Olemme edelleen osoitti Lin

-Sca-1

+ CD49f

hi (LSC

hi) eturauhasen varsi /esisolut

PTEN

null eturauhasen pystyvät aloittamaan syöpä fenotyyppi joka jäljittelee ensisijainen syövän

PTEN

null eturauhasen malli [19].

Täällä raportoimme tunnistaminen on solunpintamarkkeria, CD166 tai Activated Leukosyyttien adheesiomolekyyliin (CD166 /ALCAM ), joka on erittäin ylössäädelty ihmisen ja hiiren CRPC näytteitä. CD166 voidaan rikastaa kantasoluja /kantaisä alalla muodostavien solujen sekä WT ja

PTEN

null mutantti hiiren prostates. Lisäksi CD166 voi erottaa LSC

hi hiiri varsi /kantasolujen CD166

hi ja CD166

lo alapopulaatioita, jossa LSC

hi; CD166

hi subpopulaatio ottaa paljon suurempi palloja muodostavan aktiivisuutta. Me osoittavat lisäksi, että CD166 voidaan käyttää rikastamiseen maker eristämiseksi ihmisen eturauhasen pallo muodostavien solujen ja tubulussolujen muodostavien solujen.

Tulokset

CD166 ilmentyminen on yliaktiivista Hiiren kastroitu Eturauhasen epiteelin ja voi käytettävä rikastuttaminen Stem /esisolujen

Jyrsijöiden eturauhanen sisältää varsi kaltaisia ​​soluja, jotka on rikastettu kastroitu eturauhanen ja voi suorittaa yli 15 sykliä involuution uudistumista vastauksena androgeenireseptorin peruuttamista ja korvaamista [21] . Me perusteltu, että kastraatio voi myös johtaa säätelyä tai rikastamisen näiden kantasolujen pinnan molekyylejä, jotka voivat mahdollisesti olla merkki eristämiseksi kantasolujen /progenitorisolujen ja kohdennettua lääkeannostelun. Siksi louhitaan julkisesti käytettävissä olevat tietokannat kuvaavat geeniekspressioprofiilien hiiren prostates päivänä 0 ja päivänä 3 kastraation [22], [23]. Me keskityttiin niihin geenejä, jotka laskivat geenissä ontologian luokkaan ”solukalvon” ja tunnistettu CD166 /ALCAM yhtenä vain kaksi yhteistä kastraatio rikastetun solun pinnan molekyylejä (taulukko S1). CD166 lisääntyi merkittävästi (1-tail t-testiä 0,015) 3 vuorokauden kuluttua kastraation verrattuna ennallaan hiiriin. Vaikka Cxcl12 on myös voimistunut, päätimme olla keskittyä tämä geeni, koska se on kemokiini eikä alistaa FACS-välitteisen varsi /kantasolujen rikastamiseen.

CD166 on tyypin I transmembraaniproteiinia Ig-superperheen että välittää solu-solu-vuorovaikutuksia kautta heterofiilisten (CD166-CD6) ja /tai homofiilisiä (CD166-CD166) mekanismien [24], [25]. Huomasimme, että ehjässä hiirillä, CD166 ilmentyy edullisesti varsi /kantaisä rikastettua proksimaalinen alue [21], mutta alhainen varsi /kantaisä-köyhä distaalinen alue WT eturauhasen (kuvio 1A ylempi paneeli). CD166-proteiinin tasot ovat myös säädelty heti kastraation (kuvio 1A alempi paneelit; vertaillaan päivinä 0 ja 3 jälkeinen kastraatio).

(A) Top: Vertailu p63 (punainen) ja CD166 (vihreä) co-IF värjäys välillä eturauhasen proksimaalisen alueen ja distaalialue. Pohja: IHC for CD166 ilmentyminen ehjä vs. kastroitu hiiri eturauhasen. Mitta-asteikko: 50 um. (B) Lin

-; CD166

hi, Lin

-; CD166

lo, LSC

hi; CD166

hi, ja LSC

hi; CD166

lo-solut eristettiin FACS: lla 8- 12-viikon ikäisiä hiiriä. Kaavio näyttää prosentteina pallo muodostavien solujen perusteella pallojen kunkin populaation per 2500 solua maljattiin 8 päivän kuluttua kasvun. Data näytetään keskimääräisenä +/- STD (**, p 0,001, n = 3). (C) Taita muutos LSC

hi; CD166

hi sisältö perustuu ehjänä WT peräisin FACS-analyysi (*, p 0,05, n = 3).

Eturauhasen varsi /kantaisä solut on ominaista niiden kyky muodostaa palloja

in vitro

[26]. Suoritimme palloja muodostavan määritys käyttäen lajiteltu CD166

hi ja CD166

lo soluja ja totesi, että CD166

hi-soluissa on merkittävästi suurempi palloja muodostavan aktiivisuuden verrattuna CD166

lo-solut (kuvio 1 B, vasen ). Koska olimme aikaisemmin kehittäneet LSC

hi rikastamiseen järjestelmään [26], joka tuottaa 10-kertainen rikastuminen WT pallo muodostavien solujen, testasimme CD166 voidaan käyttää edelleen rikastuttava palloja muodostavan aktiivisuuden. Olemme aidatulla LSC

hi soluja niiden CD166 ilmaisun ja totesi, että LSC

hi; CD166

hi-soluissa on 5-kertainen palloja muodostavan aktiivisuus verrattuna niiden LSC

hi; CD166

lo vastine (kuvio 1 B, oikealla). Näin ollen, CD166 voidaan käyttää markkerina edelleen rikastaa alalla muodostavien solujen sisällä WT eturauhasen. Serial siirrostamalla sfäärien syntyvät LSC

hi; CD166

hi solut osoittivat, että tehostetun palloja muodostavan aktiivisuuden voitaisiin säilyttää

in vitro

läpi vähintään kolme kanavaa (kuvio S1A). Sen sijaan vähemmän palloja kertyi LSC

hi; CD166

lo-solut (P0-P2) ja ei voida tehdä jatkuvaa kulku vähäisyyden vuoksi solujen määrä. Havaitsimme mitään merkittävää eroa alalla kokojakauma välillä LSC

hi; CD166

hi syntyy aloilla ja LSC

hi; CD166

lo syntyy aloilla (kuvio S1B ja S1C). Samanlainen LSC

hi subpopulaatio [26], kastraatio johtaa myös paranevat merkittävästi LSC

hi; CD166

hi väestöryhmästä (kuvio 1 C).

CD166

hi ihmisen eturauhasen solut ovat korkeammat Sphere Muotoilu ja Regeneration Mahdolliset

Tietyt solun pinnan markkereita, kuten Sca-1, ovat vain ilmaistu hiiri ja siksi voida käyttää eristämiseen ihmisen kantasolujen /progenitorisolujen. CD166, toisaalta, on ilmaistu erilaisissa ihmisen elinten ja yliaktiivista ihmisen syövissä, mukaan lukien eturauhassyöpä [27]. Voit selvittää CD166 voidaan käyttää rikastaa ihmisen eturauhasen varsi /esiasteita, ensin tutkitaan sen ilme ja totesi, että CD166 ilmentyy voimakkaasti kehittyvässä ihmisen sikiön eturauhasen epiteelin (kuvio 2A, vasen paneeli) ja fokaalisesti ilmaistaan ​​hyvänlaatuinen aikuisten eturauhasen, kanssa päällekkäisiä osajoukon TROP2 ja CD49f – positiivisia soluja (kuvio 2, keskimmäinen ja oikea paneeli).

(A) IHC värjäys CD166 ihmisen sikiön eturauhasessa ja potilaan eturauhassyöpäkudoksille. Mitta-asteikko: 50 um. (B) Yhteensä erottaa eturauhasen soluja, CD166

hi ja CD166

lo populaatiot eristettiin FACS 6 potilaan näytteistä. Kaavio näyttää prosentteina pallo muodostavien solujen perusteella pallojen kunkin populaation per 5000 solua maljattiin 7 päivän viljelyn. Data näytetään keskimääräisenä +/- STD (**, p 0,001). (C) CD166

hi, ja CD166

lo populaatiot eristettiin FACS 3 potilaan näytteistä. CD166

hi ja CD166

lo-solut (2 x 10

5) istutettiin ihonalaisesti NOD-SCID /IL2rγ null hiiret, yhdessä 2 x 10

5 rUGSM induktiivinen mesenkyymisolujen. Graftit kerättiin, kiinteät ja analysoida sen jälkeen 8-16 viikkoa. Vasen, kaavio osoittaa, että CD166

hi ihmisen eturauhasen solut voivat muodostaa enemmän tubulukset siirteen palautuminen määrityksessä verrattuna CD166

lo ihmisen eturauhasen soluja. Oikea, H CD49f

hi) CD166

hi ja LTC; CD166

lo osapopulaatioiden yhdestä potilaasta. Oikea edustava kaavio osoittaa, että LTC; CD166

hi ihmisen eturauhasen solut voivat muodostaa enemmän tubulukset siirteen palautuminen määrityksessä verrattuna LTC; CD166

lo ihmisen eturauhasen soluja.

Sitten arvioidaan, onko CD166 voitaisiin käyttää markkerina rikastamiseksi ihmisen kantasoluja /progenitorisolujen. Hyvänlaatuinen alueilla eturauhasen kudosta kerättiin useista potilaista, joille tehtiin eturauhasen ja hajotettiin yhden soluihin. Yhdenmukaisesti aiempien tutkimusten [13], [28], prosenttiosuudet CD166

+ solut vaihtelevat potilaskohtaisesti (tietoja ei esitetty). Kuitenkin suurin osa alan muodostavien aktiivisuus tunnistettiin CD166

hi väestöstä (kuvio 2B), samanlainen kuin meidän havaintoja hiiren eturauhasen soluja. Tiedot on esitetty 6 edustavasta potilaasta.

Sen arvioimiseksi, CD166 voi rikastaa ihmisen eturauhasessa uusiutumiskyky

vivo

, hyvänlaatuinen ihmisen eturauhasen solut hajotettiin ja mukaan lajiteltuna solun pinnalla CD166 ekspressiotasoja. Sama määrä elinkelpoisia CD166

hi ja CD166

lo-solut (2 x 10

5) istutettiin ihonalaisesti NOD-SCID /IL2rγ null hiiret, yhdessä 2 x 10

5 rUGSM induktiivinen mesenkymaaliset solut. Sen jälkeen 8-16 viikkoa, siirteet korjattu, kiinteät ja upotettiin parafiiniin kvantifiointiin ja analyysejä. CD166

hi soluissa on enemmän kudosten uusiutumiskyky osoituksena lisääntynyt määrä munuaistiehye kaltaisia ​​epiteelin rakenteita löytyy köynnöksen, jota harvoin nähdään CD166

lo siirteitä (kuvio 2C). Lisäksi analyysit osoittivat, että tiehyessä kaltaisia ​​rakenteita aloittanut CD166

hi solut sisältävät CK5 ja p63 ilmentävät tyvisoluissa, CK8 onteloerityssolut ja AR positiivisia soluja (kuvio S2).

yhdistelmä markkereita TROP2 ja CD49f voi erillinen sukulinja-negatiivinen ihmisen eturauhasen epiteelisolujen erilaisiksi alapopulaatioihin, jossa TROP2

hi; CD49f

hi (Lin

-T

HIC

hi tai LTC) soluja, joilla on korkein pallo pystyy muodostamaan

in vitro

[29]. Lisäksi LTC solut voivat kehittyä syöpä kaltaisia ​​fenotyyppi

in vivo

seuraavissa onkogeenisen transformaatio [13]. Testasimme CD166 voi edelleen eristää tämän LTC väestöstä. FACS-analyysi hyvänlaatuinen ihmisen eturauhasen solujen osoitti, että yli 50% LTC kantasolujen /esisolujen myös ilmentävät CD166 pintamerkkiaine (kuvio 2D, vasemmalle ja keskimmäinen paneeli). Lisäksi tutkimme jos erot palautuminen mahdollisten välillä näiden kahden osapopulaatioiden. Lajiteltu LTC; CD166

hi ja LTC; CD166

lo solua injektoitiin ihonalaisesti NOD-SCID /IL2rγ

– null hiirillä 2 x 10

5 rUGSM solut ja analysoitiin 8-16 viikkoa myöhemmin. Meidän

in vivo

tiedot viittaavat siihen, että LTC; CD166

hi solut voivat aiheuttaa enemmän kiemuratiehyessä kaltaisia ​​rakenteita, kun taas LTC; CD166

lo-solut ovat vähemmän uusiutumiskyky (kuvio 2D, oikea paneeli).

CD166 voidaan rikastuttaa kasvaimen Sphere muodostavia soluja

PTEN

Null Eturauhassyöpä Model

tutkia CD166 voi rikastuttaa kasvain aloittamista solujen jälkeen kastraation, vertasimme prosenttiosuus CD166

hi alaryhmässä välillä koskemattomina ja kastroitu

PTEN

mutanttihiirien ja havaittu laajentamiseen CD166

hi alaryhmässä jälkeen kastraation (kuvio 3A). Seuraavaksi vertasimme alalla muodostumista ominaisuuksia LSC

hi; CD166

hi, LSC

hi; CD166

lo, LSC

lo; CD166

hi, ja LSC

lo; CD166

lo osapopulaatioiden edeltävässä syöpä PIN (6 viikkoa) ja syövän vaiheissa (11 viikkoa). Huomasimme, että LSC

hi; CD166

hi alaryhmästä on paljon korkeampi palloja muodostavan kyky, ja lähes kaikki palloja muodostavan aktiivisuuden syövän vaiheessa asuu LSC

hi; CD166

hi alaryhmässä (Kuvio 3B). Yhdenmukainen aiempien havainto, että

PTEN

mutantti pallot ovat suurempia kuin WT-ohjaus pallot [19], sekä LSC

hi; CD166

hi ja LSC

hi; CD166

lo -alapopulaatioiksi muodostavat suuria eturauhasen palloja (kuva S3). Aikaisemmat tutkimuksessa todettiin, että

PTEN

poisto edistää laajentamista LSC

hi eturauhasen varsi /esisolujen [18], [19]. Sisällä LSC

hi väestö, havaitsimme valikoiva laajentuminen LSC

hi; CD166

hi soluja.

PTEN

mutanttihiirien on yli 3-kertainen nousu prosenttiosuuden LSC

hi; CD166

hi subpopulaatio verrattuna WT littermates (kuvio 3C).

( A) FACS blotit osoittavat lisääntynyt Lin

-CD166

hi väestö jälkeen kastraatio

PTEN

mutanttihiirien verrattuna ennallaan

PTEN

mutanttihiirien. (B) neljä alapopulaatiot (LSC

hiCD166

hi, LSC

hiCD166

lo, LSC

loCD166

hi, LSC

loCD166

lo) eristettiin

PTEN

mutantti eturauhasen joko 6 viikkoa tai 11 viikkoa vanhoja hiiriä. Kaavio näyttää prosentteina palloja muodostavan soluja. Useista kokeista yhdistettiin. Data näytetään keskimääräisenä +/- STD (*, p 0,05, n = 3). (C) Vasen: pylväsdiagrammi esittää kertainen muutos

PTEN

mutantti LSC

hiCD166

hi sisältöä verrattuna WT; oikea, FACS blotit osoittavat laajennus LSC

hi CD166

hi solujen LSC väestön

PTEN

mutantti verrattuna WT. (D) RNA eristettiin ei-LSC, LSC

hiCD166

hi, ja LSC

hiCD166

lo jakeet kahtena kokeita. RNA syntetisoitiin cDNA, ja altistettiin qRT-PCR: llä. Kuvaaja osoittaa taitettava rikastamiseen yli ei-LSC solusta jokaista geeniä. GADPH käytettiin viite-geeni (*, p 0,05; **, p 0,01, ns, ei merkitsevä).

lisätutkimuksia LSC

hi; CD166

hi alapopulaatio, RNA: ta eristettiin LSC

hi; CD166

hi, LSC

hi; CD166

lo osapopulaatioiden ja solun osa köyhdytetty LSC soluja (ei-LSC

hi) ja verrattiin niiden geeniekspressioiden RT-PCR-analyysillä. LSC

hi; CD166

hi subpopulaatio ilmaisee samalla tasolla tyvisolusyöpä merkkiaineiden

Ck5

ja

p63

kuin LSC

hi; CD166

lo alaryhmässä (kuva 3D, vasen paneeli). Kuitenkin LSC

hi; CD166

hi subpopulaatio ilmaisee paljon korkeampi luminal merkki

Ck8

ja

Trop2

, uuden epiteelin pintamerkkiaine äskettäin tunnistettu rikastamiseksi kantasolujen toimintaa sekä hiiren ja ihmisen prostates [13], [29] (kuva 3D, oikea paneeli). Lisätutkimuksia useiden muiden epiteelisolujen kantasoluihin merkkiaineita [10], [30], [31], [32], [33] osoitti, että LSC

hi; CD166

hi-soluissa on merkittävästi suurempi

CD44

ja

Nkx3.1

ilmaisu verrattuna LSC

hi; CD166

lo soluja. Vaikka verrattuna ei-LSC väestö, LSC

hi; CD166

hi ilmentävät vähemmän

Nkx3.1

. Merkittävää eroa ei havaittu

CD117

, ja

CD133

ilmaisuja näiden kahden populaation (kuva 3D, oikea paneeli).

CD166 Expression ylössäädellään Human kastraatio kestävä Eturauhasen syöpä

Todettuaan, että CD166 voidaan rikastaa ihmisen LTC solujen ja hiiren kasvain itiating soluissa, me tutki suhdetta CD166 ilmaisun ja ihmisen eturauhassyövän etenemistä. Kliinisesti selityksin tiedot 218 eturauhasen kasvaimia [34], CD166-geenin ilmentyminen merkitsevästi korreloi lisääntyneeseen eturauhassyövän aggressiivisuus, kuten osoitetaan Gleason pisteet, joissa korkein ilmaisua etäpesäkkeitä näytteissä (kuvio 4A). Olemme edelleen tutkituista CD166 ilme ihmisen eturauhassyövän kudossiruina, jotka koostuvat 14 kastraation resistenttien (CRPC) etäpesäke näytteet ja 98 hormonin naiivi ensisijainen syöpänäytteissä saaneilla potilailla joko neoadjuvant hormonihoito (NHT) eri aikoja tai ei saanut hoitoa. CD166 on merkittävästi parannettu CRPC näytteissä (kuvio 4B edustavat kuvat). Verrattuna hallitseva kalvo lokalisoinnin CD166 hormonin naiivi ensisijainen syöpänäytteissä, havaitsimme voimakas sytoplasman lokalisaation CD166 vuonna CRPC luumetastaasipotilailla näytteistä (kuvio 4B, korkea suurennus). CD166 ekspressiotasot pisteytettiin ja p-arvot lasketaan Mann-Whitneyn testi. CD166 ekspressiotaso on huomattavasti korkeampi CRPC näytteissä verrattuna primaarisyöpien kanssa (p 0,0001) tai ilman (p 0,02) NHT (kuvio 4C). Nämä tiedot viittaavat siihen, että CD166 on kastraation rikastettu merkkiaine sekä hiiren ja ihmisen eturauhasen syöpä.

(A) CD166-geeni-ilmentymisen 147 ihmisen eturauhasen kasvaimet analysoitiin vertaamalla eri Gleason ryhmien normaali /hyvänlaatuinen (NL /BN) eturauhasen. (B) edustaja IHC värjäystä CD166 ilmentyminen ihmisen eturauhasen TMA. Top: hormoni naiivi ensisijainen eturauhassyöpä; Low: kastraatio kestävä eturauhassyöpä osoittaa hyvin intensiivistä immunovärjäyksen. Mitta-asteikko: 100 um (vasemmalla); 10 um (oikealla). (C) Tiedot 112 näytettä laskettiin ja tilastollinen analyysi CD166 ilmentyminen ihmisen TMA suoritettu. NHT: neoadjuvant hormonihoito; CRPC: castrate kestävä eturauhassyöpä. Sarake, keskimääräinen CD166 värjäytymistä NHT ja CR kudoksiin. Näytteet arvostellaan 0-3 edustavat välillä ei värjäytymistä raskaaseen värjäystä visuaalisella pisteytys. Virhepalkin: keskivirhe. Immunoreaktiivisuus CD166 on merkittävästi suurempi CRPC ryhmässä verrattuna käsittelemättömän ryhmän (p 0,021) tai NHT eri hoitoajat (p 0,0001).

Menetys CD166 ei häiritse WT Eturauhasen kehittäminen ja eturauhasen Sphere Formation

Vaikka ilmaistu monenlaisia ​​kudoksia, CD166 rajoittuu yleensä osajoukkoja osallistuvien solujen dynaamisen kasvun ja /tai muuttoliike, mukaan lukien hermoston kehittymistä, haarautuvan urut kehittäminen, hematopoieesin ja immuunivastetta [27] . Sen testaamiseksi, CD166 näyttelee luontaista säätelijänä eturauhasen varsi /esisolujen, analysoimme

CD166

hiirten (

CD166

– /-

). Geneettinen deleetio

CD166

-geeni saatiin aikaan korvaamalla ensimmäisen eksonin kanssa koodaavan cDNA EGFP [35].

CD166

null hiiret ovat fenotyypiltään normaalien ja hedelmällinen [35]. Tutkimme eturauhasen 8 ja 20 viikon iässä ja todettu eroa brutto anatomia ja histologia keskuudessa WT (tuloksia ei ole esitetty),

CD166

+/-

ja

CD166

– /-

hiiri prostates (kuvio 5A).

(A) Top: brutto- anatomia eturauhasen

WT

ja

CD166 – /-

hiiriä 8 viikon iästä, asteikko bar: 2 mm. Pohja: HE värjäystä DLP -osio WT ja

CD166

– /- hiirillä 8 viikon ikäiset, asteikko bar: 200 pm. (B) vertailu pallo muodostumisen yhteensä lajittelematonta eturauhasen solujen (5000 per 12-kuoppa) välillä

CD166

+/-

ja

CD166

– /-

prostates. Data esitetty keskiarvona +/- STD (p 0,05, n = 3). (C) vertailu LSC

hi sisällön välillä

CD166

+/-

ja

CD166

– /-

prostates at 8-12 viikkoa iässä (p 0,05 , n = 5).

edelleen tutkia menetyksiä CD166 on mitään vaikutusta eturauhasen varsi /esisolujen vertasimme pallo muodostumista toimintaan

CD166

+/-

ja

CD166

– /-

eturauhasen epiteelin ja löysivät ole merkittävää eroa (kuvio 5B). Lisäksi, pallojen syntyy

CD166

– /-

eturauhasen on samanlainen kokojakauma eroavat niistä peräisin

CD166

+/-

eturauhasen epiteelin (tuloksia ei ole esitetty). Vastaavasti FACS-analyysi osoitti, että menetys CD166 ei vaikuta LSC

hi pitoisuus prostates eristettyjen

CD166

– /-

hiirissä (kuvio 5C), mikä viittaa siihen, että CD166 ei keskeisessä rooli normaalissa eturauhasessa kehittämistä tai eturauhasen varsi /kantaisä lukumäärä ja tehtävät.

Genetic poistaminen

CD166

ei estä eturauhassyöpä Progression

on oletettu, että CD166 toiminnot solupinnan anturi solutiheys ja ohjaa siirtymistä paikallisten solujen lisääntymisen ja kudosinvaasio aikana melanooman etenemisen [36]. Sen tutkimiseksi, onko CD166 on keskeinen rooli eturauhassyövän kehitykseen, erityisesti kasvaimen aloittamista soluja, ylitimme

CD166

– /-

hiirten

PTEN

ehdollinen hiirien [17 ]. Histopatologinen analyysi osoitti, että menetys CD166 ei merkittävästi muuta kinetiikka eturauhassyövän kehitykseen

PTEN

null malli ja kaikki

Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

– /-

hiirille kehittyi adenokarsinooma noin 9 viikon iässä (kuvio 6A ja tietoja ei ole esitetty). Havaitsimme samantasoista Ki67

+ solujen välillä

Pb-Cre

+, PTEN

L /L, CD166

+ /+ ja Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

– /-

eturauhanen (kuvio 6A). SMA värjäys osoitti myös, että menetys CD166 ei estä syöpäsolujen paikallisista invaasiota (kuvio 6A, oikea paneeli).

(A) arviointi

CD166

poisto eturauhassyövän etenemiseen (HE värjäys, asteikko bar: 200 pm), solujen lisääntymistä (Ki67 värjäys, asteikko bar: 100 pm), ja eturauhasen tuumori-invaasio (SMA värjäys, asteikko bar: 100 um) vertaamalla iältään vastaaviin

Pb-Cre

+ , PTEN

L /L, CD166

+ /+

ja

Pb-Cre

+, PTEN

L /L, CD166

– /- eturauhasen kudos 20 viikon iässä. (B) vertailu pallo muodostumisen yhteensä lajittelematonta eturauhasen solujen (5000 per 12-kuoppa) välillä

Pb-Cre

+, PTEN

L /L, CD166

+/-

ja

Pb-Cre

+, PTEN

L /L, CD166

– /-

eturauhasen (9 viikon iässä). (C) Edustava FACS blot osoittaa LSC sisällön välillä

Pb-Cre +, PTEN

L /L, CD166

+/-

ja

Pb-Cre

+, PTEN

L /L, CD166

– /-

. (D) tutkiminen proteiinin tasot CD166, P-AKT ja GFP eri eturauhasessa kanssa osoitetun genotyypin Western-blottauksella. GADPH sisältyy tasavertaisena latauskontrollina.

vertasi pallo muodostuminen

Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

+/-

ja

Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

– /-

prostates ja totesi, että menetys CD166 ei häiritse jossa palloja muodostavan aktiivisuuden

PTEN

null epiteelin (kuvio 6B). Lisäksi

CD166

– /-

prostates on samanlainen LSC

hi sisältöä verrattuna

CD166

+/- PTEN

null prostates (kuvio 6C). Koska PI3K /AKT-reitin aktivaatio on liikkeellepaneva voima solujen lisääntymisen ja eturauhassyövän etenemistä

Pb-Cre

+; PTEN

L /L

eturauhassyövän [17], [20], me sitten tutkittiin, onko muuttamiseen AKT aktivoinnin jälkeen geneettisen poistamisen

CD166

. Western blot-analyysi osoitti, että

Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

– /-

eturauhasen ei ole CD166 ilme, mutta on samanlainen P-AKT tasot verrattuna

Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

+ /+

ja

Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

+/-

eturauhasen (kuvio 6D). Olemme lisäksi vahvistaneet, että ei ole olemassa negatiivista valintaa vastaan ​​

PTEN

– /-; CD166

– /-

solujen koska yhdenvertainen intensiteetti knock-GFP-proteiinia voidaan havaita kaikissa kohorteissa paitsi

CD166

+ /+

hiirillä.

Koska näemme merkittävää yliekspressio CD166 ihmisen CRPC näytteissä, tutkimme seuraavaksi CD166 vaikuttaisi kehittymistä CRPC

PTEN

null eturauhassyöpä malli.

Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

+/-

ja

Pb-Cre

+; PTEN

L /L; CD166

– /-

urokset olivat kastroitu 12 viikon ja prostates eristettiin 8 viikkoa myöhemmin. Kuten kuviossa 7 on esitetty, poistaminen CD166 ei merkittävästi vaikuta muodostumista CRPC, mistä on osoituksena niiden kaltaiset pathohistology (kuvio 7A), CK5 /CK8 merkki jakelu, BrdU pulssi merkintöjä ja SMA-värjäys sekä ryhminä (kuvio 7B). Yhdessä meidän geneettiset tutkimukset osoittavat, että CD166 on rajallinen itsenäisiä toimintoja eturauhasessa, vaikka kasvain aloittamista soluihin.

Pb-Cre

+, PTEN

L /L, CD166

+/-

ja

Pb-Cre

+, PTEN

L /L, CD166

– /- hiiret kuohittu iässä 12 viikon tavallisilla tekniikat. Tällä 8 viikkoa kastraation jälkeen, hiiriin vatsaonteloon injektoitiin yhdellä annoksella 100 ui (1 mg) ja BrdU-liuosta ja uhrattiin 4 tuntia myöhemmin analysoitavaksi. Arviointi vaikutuksista

CD166

poiston (A) kastrointi kestävä eturauhassyövän etenemiseen (HE), ja (B) solulinjaan koostumus (CK5 /CK8), solujen lisääntymistä (BrdU) ja eturauhasen tuumori-invaasio (SMA ) suoritettiin. Mitta-asteikko: 50 um.

Keskustelu

Harvat pintamerkkiaineita hetkellä saatavilla rikastamiseksi sekä hiiren ja ihmisen eturauhasessa kantasolujen /progenitorisolujen ja tunnistaa eturauhassyövän aloittamista soluja. Etsimällä niille solun pinnan molekyylien yläreguloituja kastroitu hiiren eturauhas- ja kastraatio kestävä eturauhasen syöpiä (CRPC) hiiren ja ihmisen alkuperästä, tunnistimme CD166 kuin pintamerkkiaine rikastamiseksi sekä hiiren ja ihmisen eturauhasessa kantasolujen /esisolujen perustuu

in vitro

alalla muotoilu ja

in vivo

kudosten uudistumista analyysejä. Tärkeää on, upregulated CD166 ilmentyminen ja laajentaminen CD166

hi-solut korreloivat

PTEN

null CRPC etenemistä sekä ihmisen CRPC kehitys, vaikka geneettinen poisto

CD166

ei häiritse normaalia hiiren eturauhasen kehitys tai

PTEN

null eturauhassyövän etenemistä. Yhdessä tutkimuksemme ehdottaa CD166 voidaan käyttää mahdollisena pintamarkkerin tunnistamiseen kastraatio resistenttien kasvainsolujen kohdennettuja lääkeaineen.

CD166 ilmentyminen on ehdotettu prognostinen markkeri useita syöpiä, mukaan lukien rinta-, [37] eturauhasen [38], munasarjasyöpä [39], haiman [40], paksusuolen [41], suusyöpä [42], melanooma [36] ja syöpien [43]. Tärkeää on, meidän microarray ja TMA tutkimukset osoittavat yhdistyksen lisääntyneen CD166 ilmentymisen ihmisen eturauhassyövän etäpesäkkeiden ja CRPC kehitystä. Lisäksi sisällä sekä hiiren ja ihmisen prostates, osoitamme, että CD166-korkea ilmentävien potilaiden alaryhmässä käsittää eturauhasen varsi /kantaisä ja syövän aloittamista solujen.

tutkimiseksi ihmisen eturauhasessa varsi /kantasolujen ominaisuuksia, arvioimme aikuisen ihmisen eturauhasen epiteelin irrottaa hyvänlaatuinen eturauhasen sijaan solulinjat ja ksenograftit. Etuna tässä lähestymistapa on säilyttää alkuperäisen heterogeenisyys ihmisen eturauhasessa välttämällä vaikutuksesta pitkän aikavälin

in vitro

valinnassa. Ei kuitenkaan näytä olevan suurempi vaihtelevuuden potilaan näytteitä kudosten uudistumista määrityksissä. Tämä saattaa johtua siitä, että ero näytteessä vaihtelua (ts iskemia aika ennen kudosten käsittelyä ja solun haku), yksilöllisiä eroja CD166 ilmaisun, ja teknisiä haasteita, jotka liittyvät kudosten uusiutumisen määrityksissä käytetään ihmisen eturauhasen soluja. Siksi analyysi riittävä potilaan näytteitä on välttämätön, jotta voidaan vetää pätevä johtopäätös. Nykyisessä tutkimuksessa, 6 ihmisen näytteitä käytetään

in vitro

alalla muotoilu ja toinen 6 näytteitä käytettiin

in vivo

uudistumista määrityksiä. Käyttämällä tätä järjestelmää, olemme aikaisemmin määritelty TROP2

hi; CD49f

hi syövän aloittamista solu (solu alkuperän) ihmisen eturauhassyövän [13]. Mitta-asteikko: 50 um.