Krooninen sairaus

tiivistelmä

Viimeaikaiset tutkimukset osoittavat, että epänormaali microenvironment kasvaimia voi olla ratkaiseva rooli Karsinogeneesin lukien keuhkosyöpä. Me kattavasti arvioitu määrä stroomasolujen, erityisesti immuunijärjestelmän /tulehdussolujen keuhkosyövässä ja arvioitiin niiden tunkeutuminen syövät eri vaiheissa, tyyppejä ja metastaattisen ominaisuuksien mahdollisia. Immunohistokemiallinen analyysi keuhkosyöpään kudosmatriisien sisältävä normaali ja keuhkosyöpä kohdat tehtiin. Tämä analyysi yhdistettiin syto- /histomorphological arviointi ja kvantifiointi solujen luokitella /subclassify kasvaimet tarkasti ja suorittaa korkean suorituskyvyn analyysi stroomasolujen koostumuksen eri keuhkosyöpään. Ihmisen keuhkosyöpä kappaleissa havaittiin merkittävä nousu /tunkeutumisen koko-T-lymfosyyttien (CD3

+), sytotoksiset-T-solujen (CD8

+), auttaja-T-solujen (CD4

+), B solut (CD20

+), makrofageissa (CD68

+), syöttösolujen (CD117

+), mononukleaariset solut (CD11 c

+), plasma-solut, aktivoitu-T-solut (MUM1

+), B-solut, ydinsoluissa (PD1

+) ja neutrofiilisten granulosyyttien (myeloperoksidaasi

+) kuin terveillä luovuttajan näytteet. Havaitsimme kaikkia näitä immuunijärjestelmän solujen markkereita eri keuhkosyövässä, mukaan lukien okasolusyöpä, adenokarsinooma, adenosquamous karsinooma, pienisoluinen karsinooma, papillaarinen adenokarsinooma, metastaattinen adenokarsinooma, ja bronchioloalveolar karsinooma. Numerot kaikki kasvaimeen liittyviä immuunijärjestelmän soluihin (lukuun ottamatta MUM1

+ solut) vaiheen III syövän yksilöitä oli merkittävästi suurempi kuin vaiheen I näytteistä. Havaitsimme merkittävän vaiheessa riippuvaisen immuunisolujen infiltraatio ihmisen keuhkokasvaimia viittaa siihen, että kasvaimen microenvironment on kriittinen rooli aikana keuhkojen syövän synnyn. Strategiat terapeuttinen häiriöitä keuhkosyöpä microenvironment tulisi harkita monimutkaisuus sen immuunisolujen koostumus.

Citation: Banat G-A, Tretyn A Pullamsetti SS, Wilhelm J, Weigert A, Olesch C, et al. (2015) Immuunijärjestelmän ja tulehdussolujen kokoonpano Human Lung Cancer Stroma. PLoS ONE 10 (9): e0139073. doi: 10,1371 /journal.pone.0139073

Editor: Gernot Zissel, Universitätsklinikum Freiburg, SAKSA

vastaanotettu: 03 helmikuu 2015; Hyväksytty: 09 syyskuu 2015; Julkaistu: 28 syyskuu 2015

Copyright: © 2015 Banat et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: Kirjoittajat enimmäkseen käytetyt kaupallisesti saatavilla keuhkosyöpä kudosta array. LUC1501 sisältää 150 ytimien normaalista /hyvänlaatuinen (3 tapausta) ja syöpä (70 tapausta, joiden luokittelu ja TNM lavastus data), monistaa ytimet tapausta kohti ostettiin Pantomics, Inc. (Cat no. LUC 1501; Richmond, CA, USA). Kuusi lisänäytteitä luovuttajan keuhkokudoksen otettiin keuhkot, joita ei istutetut. Tutkimuksessa protokolla kudoksen luovuttamista hyväksyi eettinen komitea ( ”Ethik Kommissionin am Fachbereich Humanmedizin der Justus Liebig Universität Giessen”). Kudospankin komitea virkamies on professori Werner Seeger email: [email protected]. Ylimääräiset 6 kudosnäytteitä ovat saatavilla pyynnöstä johtuen eettisistä rajoituksista.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat Verein zur Förderung der Krebsforschung Gießen eV, ja LOEWE yliopistojen Giessen ja Marburg Lung Center (UGMLC).

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on erittäin aggressiivinen ja haastava sairaus ja on johtava syy syövän kuolleisuus kaikkialla maailmassa . Huolimatta meneillään terapeuttinen ponnisteluista, keuhkosyöpä potilailla on huono ennuste, jonka keskimääräinen 5 vuoden eloonjäämisaste vain 15% [1] [2]. Noin 80-85% kaikista keuhkosyöpää potilaita hoidetaan yksi tai useampia vaihtoehtoja sisällä standardi hoito, johon leikkaus, sädehoito ja kemoterapia sairauden vaiheessa määrittämiseksi terapeuttisia vaihtoehtoja. Vaikka nämä hoidot ovat tuottaneet lupaavia tuloksia kuin neo-adjuvanttia ja adjuvanttia strategioita alkuvaiheen potilaiden ja hoitoon paikallisesti levinneen ja kehittynyt sairaus, hoitotuloksia keuhkosyöpää pidetään edelleen pettymys. Tämä johtuu suurelta osin Diagnoosin viivästymisen ja riittämätön tietämys kasvaimen etenemistä ja siihen liittyvien molekyylitason muutokset [3]. Merkittävää edistystä viime aikoina tehty tunnistamisessa molekyyli- determinantit Karsinogeneesin kuten geneettiset muutokset monissa onkogeenien (

Kras

,

cMyc

,

EGFR

,

ALK

jne) ja kasvaimen synnyssä (

p53

,

RASSF1

,

RB

,

FHIT

) [4, 5] .

tämän lisäksi geneettisen monimutkaisuuden, solun monimutkaisuus kasvain microenvironment tunnustetaan yhä vaikuttavat suoraan syöpään aloittamista, etenemistä ja etäpesäkkeiden [6, 7]. Kasvaimen mikroympäris-, riippuen kasvaimen sijainnista, koostuu stroomasolujen, mukaan lukien fibroblastit, immuuni- ja inflammatoristen solujen, adiposyytit, gliasolut, sileitä lihassoluja ja asuvat ja palvelukseen verisuonten solujen mukana soluväliaineen, kasvutekijät /sytokiinien ja muiden proteiinien jotka ovat paikallisesti ja /tai systeemisesti tuotettu. Vaikka mikään näistä stroomasolujen ovat tuumorigeenisia, ne voivat joko stimuloida tai estää syöpäsolujen lisääntymistä /pahanlaatuisen riippuen kasvaimen mikroympäristön ja erilaiset vuorovaikutukset voivat olla kanssa syöpäsolujen [8, 9].

Vaikka immuuni solut pitäisi periaatteessa havaitsemaan ja poistamaan transformoituja soluja, niiden vuorovaikutus kasvainsolujen saattaa johtaa muutoksiin fenotyyppiään jotka voivat itse asiassa johtaa sellaisen kasvaimen tukevan ympäristön eri syövän hoito, mukaan lukien keuhkosyöpä [10-12]. Niinpä kattava analyysi väestön /koostumusta stroomasolujen ja ymmärtää paremmin niiden vaikutus prosessiin syövän voi lopulta johtaa parempiin syöpähoitoihin [13, 14]. Tämän mukaisesti on nyt yhä enemmän todisteita, että tietyt immuunisolujen tunkeutuu kasvaimia ihmisen näytteitä keuhkosyöpään [12, 15-19]. Kuitenkin parhaan tietomme, tunnistaminen ja kvantifiointi useita immuunijärjestelmän solupopulaatioiden ja niiden vastaavuus keuhkosyöpään tyyppi, näyttämö ja imusolmukestatuksesta ei ole raportoitu. Tässä tutkimuksessa työllistää kudosmatriisien ja immunohistokemia, me merkittävästi laajennettu kyseisen kartoituksen koskemaan useita immuunijärjestelmän solujen populaatiot sekä eri keuhkosyöpä tyyppejä, syöpä vaiheissa, ja kasvaimen kokoa sekä erot imusolmukestatuksesta. Nämä tekniikat yhdistettiin syto- /histomorphological arviointia ja mittaamista solujen luokitella /subclassify kasvaimet tarkasti ja korkean kapasiteetin analyysi stroomasolulinja koostumuksen erityyppisissä keuhkosyöpään.

Materiaalit ja menetelmät

Lung näytteet

Keuhkosyöpä kudoksen array, LUC1501 sisältää 150 ytimien normaalista /hyvänlaatuinen (3 tapausta) ja syöpä (70 tapausta, joiden luokittelu ja TNM lavastus data), monistaa ytimet tapausta kohti ostettiin Pantomics, Inc . (Cat no. LUC 1501; Richmond, CA, USA). Kaikki kudokset kiinnitettiin 10% neutraaliin puskuroituun formaliiniin 24 tunnin ajan ja käsitellään käyttäen identtisiä SOP. Osiot poimittiin päälle Superfrost Plus tai Startfrost liimalla dioja. Saattaa olla 5% ydin tappio per slide mutta ydin pysyvyytensä oltava 90%. Tuumorinäytteet esiteltiin kopiot sisäisestä valvonnasta ja arvioida kasvaimen heterogeenisuus. Lisäksi patologi validoitu kasvaimia ydintä. Kasvaimet kattaa välillä 50 ja 100%: n ydintä. Kuusi lisänäytteitä luovuttajan keuhkokudoksen otettiin keuhkot, joita ei ole istutetut [20]. Tämä luovuttajan keuhkojen kudosta kuin istutetut keuhkojen kudosta elintenluovuttajat. Tutkimuksessa protokolla kudoksen luovuttamista hyväksyi eettinen komitea ( ”Ethik Kommissionin am Fachbereich Humanmedizin der Justus Liebig Universität Giessen”) yliopistollisen sairaalan Giessen (Giessen, Saksa) kansallisen lainsäädännön ja ”Good Clinical Practice /International Conference yhdenmukaistamiskonferenssin ”suuntaviivoja. Kirjallinen suostumus saatiin kunkin potilaan tai potilaan lähiomainen (AZ 31/93) [20, 21]. Kaikki näytteet analysoitiin alla Hamamatsu NDP dia skanneri (Hamamatsu Nanozoomer 2.0HT) ja sen näköalatasanne (NDP.Viewer).

hematoksyliinillä ja eosiinivärjäykset

Keuhkosyöpä kudos array oli parafiini ksyleeniin minkä jälkeen nesteytys 100%, 90%, ja 70% etanolia ja tislattua vettä. Levyjä inkuboidaan sitten tuoreen hematoksyliinillä (Merck, Darmstadt, Saksa) 20 min ja pestiin tislatulla vedellä, jonka jälkeen inkuboitiin Happamoituneista eosiini-liuosta (Sigma, Deisenhofen, Saksa) 1 min ja pesu. Lopuksi objektilasit poistettiin vesi 90% ja 100% etanolilla, kuivattiin ilmassa, ja asennettu [20].

immunohistokemia

immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin käyttäen Autostaineriin Plus (Dako, Hampuri, Saksa ) ja hiiren monoklonaalisia vasta-aineita Dako, Medac (Hampuri, Saksa), ja Thermo Fisher (Dreieich, Saksa) laimennoksilla esitetty taulukossa 1. polyklonaalista vasta-ainetta käytettiin vain myeloperoksidaasi (MPO) värjäys. Seurasimme erityistä standardoitua protokollaa valmistajan toimittamia. Jättämällä pois primaarinen vasta-aine toimi negatiivisena kontrollina. Lyhyesti, levyt esikäsiteltiin Trilogy puskurilla (Medac, 1: 100, 16 minuutin ajan 95 ° C: ssa), sitraatti alhainen puskuri (Thermo Fisher, 1: 100, 26 minuutin ajan 98 ° C: ssa), tai pronaasi E (Merck; 0,1% , 10 min huoneenlämpötilassa), minkä jälkeen seuraa käsittely 3% H

2O

2 8 min. Kaikki vasta-aineet levitetään 200 ui ja inkuboitiin 30 min. Pesun jälkeen (Medac pesupuskuri, 1:20 tislattua vettä), sekundaarista vasta-ainetta (Medac) levitettiin 200 ui, ja niitä inkuboitiin 20 min. Pesun jälkeen kutakin näytettä inkuboitiin polymeeri (200 ui) 30 min (huomaa, että sekundaarinen vasta-aine ja polymeeri ovat komponentteja värikoodattu BrightVision HRP Kitin Medac). Objektilasit pestiin kahdesti ja inkuboitiin Kirkas DAB (Medac) 10 min. Objektilasit pestiin tislattua, vastavärjätään hematoksyliinillä 8 minuutin ajan, ja pestään ennen peittämistä peitinlasilla [20, 22].

Data Analysis ja tilastot

kokonaismäärä solujen ja positiivisesti värjäytyneitä solut laskettiin kudosleikkeiden. Yhdessä immunohistokemiallinen tahra, myös vetosi syto- /histomorphological arviointi solujen patologi. H terveitä, okasolusyöpä, adenokarsinooma, adenosquamous karsinooma, pienisoluinen karsinooma, papillaarinen adenokarsinooma, metastaattinen adenokarsinooma, ja bronchioloalveolar karsinooma. Kaikki näytteet altistettiin ylimääräisiä histopatologista analyysiä.

Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla perustuu niiden patologian. (A) terveestä luovuttajasta, (B) okasolusyöpä, (C) adenokarsinooma, (D) adenosquamous karsinooma, (E) pienisoluinen karsinooma, (F) papillaarinen adenokarsinooma, (G) metastaattinen adenokarsinooma, ja (H) bronchioloalveolar karsinooma. Asteikko bar = 250 um.

Analyysi Kasvain microenvironment in Human Lung Cancer kudokset

T-lymfosyytit.

Soluttautuminen T-lymfosyyttien ihmisen keuhkojen kudosta arvioitiin immunohistokemiallisella analyysi käyttäen CD3-vasta-ainetta. Havaitsimme lisääntynyt määrä CD3

+ T-solujen keuhkosyöpään [tarkoita, 118 solua /1000 solua; 95% CI, 105-133; täällä kun mainitaan 118 (105 … 133)], verrattuna terveisiin luovuttajan keuhkot [28 (14 … 57); Kuvio 2A]. Tunkeutuminen CD3

+ T-lymfosyyttien oli riippumaton syövän tyypin (kuvio 2B ja 2F), mutta määrä tunkeutuvien solujen oli korkeampi myöhemmissä vaiheissa keuhkosyöpään [173 (151 … 199) vaiheen III vs. 61 (33 … 114) vaiheen I keuhkosyöpä, kuvio 2C]. CD3

+ T-solujen kasvaimen näytteissä oli riippumaton kasvaimen koon [T2: 119 (104 … 136] vs. T3: 88 (52 … 149)] ja imusolmukestatuksesta [N0: 123 (106 … 143) vs. N1 + 2: 101 (79 … 130), kuvio 2D ja 2E] perustuvat TNM pysähdyspaikan.

Ihmisen keuhkosyöpä kudosta array värjättiin CD3-vasta-aineen havaitsemiseksi T-lymfosyyttejä. (A) kvantifiointi CD3

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan näytteet. (B-E) kvantifiointi CD3

+ soluiksi (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) kasvaimen kokoa, ja (E ) imusolmukestatuksesta. Cell numerot on annettu CD3-positiivisia soluja 1000 solua. (F) kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjättiin CD3-vasta-aineen, joka perustuu niiden patologian. Mittakaava = 25 pm.

arvioitava edelleen jakelun T-lymfosyyttien alapopulaatioiden, osat analysoitiin immunovärjäys esiintyvyys auttaja-T (CD4

+) ja sytotoksiset (CD8

+) T-soluja. Kuten on esitetty kuviossa 3A, CD4

+ soluja oli merkittävästi korkeampi kasvainkudoksessa verrattuna terveisiin luovuttajakudostä [62 (52 … 72) vs. 12 (4 … 32)]. Yleisyys T-auttajasolujen oli riippumaton syövän tyypin (kuvio 3B ja 3F), mutta määrä tunkeutuvien solujen oli korkeampi vaiheen III syöpä verrattuna vaiheen I [113 (102 … 125) vs. 22 (12 … 42), Kuva 3C]. CD4

+ T-lymfosyyttien Tuumorinäytteissä oli riippumaton kasvaimen koon [T2: 62 (52 … 75] vs. T3: 60 (32 … 114)] ja imusolmukestatuksesta [N0: 63 (51 … 77) vs. N1 + 2: 60 (43 … 83), kuvio 3D ja 3E]. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin soluttautuminen sytotoksisia T-lymfosyyttejä, jossa on suurempi määrä CD8

+ solujen kasvain kudoksissa verrattuna terveisiin verrokkeihin [80 ( 69 … 93) vs. 17 (7 … 41)] ja suurempi CD8

+ solutunkeutumisen vaiheen III vs. vaiheen I keuhkosyöpä [132 (114 … 154) vs. 51 (27 … 98), kuvio 4A ja 4C]. ei ollut korrelaation sytotoksisten T-solujen ja syövän tyypin, kasvaimen koon tai imusolmukestatuksesta (kuvio 4B, 4D ja 4E).

Ihmisen keuhkosyöpä kudosta array värjättiin CD4-vasta havaitsemaan Thsoluista. (A) kvantifiointi CD4

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan näytteet. (B-E) kvantifiointi CD4

+ soluiksi (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaihe (D) tuumorin koon, ja (E) imusolmukestatuksesta. Cell numerot on annettu CD4-positiivisia soluja per 1000-soluja. (F) kuvat ovat ihmisen keuhkojen kohdissa värjättiin CD4-vasta-ainetta, joka perustuu niiden patologiaa. Asteikko bar = 25 pm.

Ihmisen keuhkosyöpä kudosta array värjättiin CD8-vasta havaitsemaan sytotoksisten T-lymfosyyttien. (A) kvantifiointi CD8

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan yksilöitä. (B-E) kvantifiointi CD8

+ soluja, joka perustuu (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) tuumorin koon, ja (E) imusolmukestatuksesta. Solujen määrä on annettu CD8-positiivisten solujen 1000-soluja. (F) Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjätty CD8-vasta-aineen, joka perustuu niiden patologian. Asteikko bar = 25 pm.

makrofagien ja syöttösoluista.

kasvaimeen liittyvät makrofagit arvioitiin perustuen ilmaisun CD68. Havaitsimme lisääntynyt määrä CD68

+ solujen keuhkosyövän [39 (30 … 49)], verrattuna terveisiin luovuttajan keuhkot [5 (1 … 34); Kuva 5A]. Määrä kasvaimeen liittyvien makrofagien korreloi myös syövän vaiheessa [vaihe III: 75 (62 … 92) vs. vaihe I: 9 (2 … 41), kuvio 5C] ja oli riippumaton syövän tyypistä, kasvaimen koko ja imusolmukestatuksesta (kuvio 5B ja 5D-5F).

Ihmisen keuhkosyöpä kudosta array värjättiin CD68-vasta-aineen havaitsemiseksi makrofageja. (A) kvantifiointi CD68

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan yksilöitä. (B-E) kvantifiointi CD68

+ soluja, joka perustuu (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) tuumorin koon, ja (E) imusolmukestatuksesta. Solujen määrä on annettu CD68-positiivisia soluja 1000 solua. (F) Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjätty CD68-vasta-aineen, joka perustuu niiden patologian. Asteikko bar = 25 pm.

Seuraavaksi arvioitiin syöttösolujen lukumäärä tuumorikudokseen perustuu CD117 (ckit) immunodetektioon. Kuten kuviossa 6A syöttösolujen lukumäärä oli suurempi kasvainkudoksessa verrattuna terveisiin luovuttajakudostä [103 (88 … 122) vs. 11 (2 … 48)] ja oleellisesti kohonnut vaiheessa III syöpä verrattuna vaiheen I [183 (157 … 213) ja 61 (30 … 124), kuvio 6C]. Emme havainneet mitään eroja näytteiden mukaan syövän tyypistä, kasvaimen koon tai imusolmukestatuksesta (kuvio 6B ja 6D-6F).

Ihmisen keuhkosyöpä kudosta array värjättiin CD117 (ckit) vasta-aine tunnistaa syöttösoluista . (A) kvantifiointi CD117

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan yksilöitä. (B-E) kvantifiointi CD117

+ soluja, joka perustuu (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) tuumorin koon, ja (E) imusolmukestatuksesta. Solujen määrä on annettu CD117-positiivisia soluja 1000 solua. (F) Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjätty CD117-vasta-aineen, joka perustuu niiden patologian. Asteikko bar = 25 pm.

Granulosyytit.

määrä infiltroituvien neutrofiilien granulosyyttien määritettiin perustuen MPO immunoreaktiivisuus. Samanlainen kuin edellinen tuloksia, löysimme kohonnut neutrofiilien määrää syöpäkudoksessa verrattuna terveisiin luovuttajan keuhkot [74 (62 … 88) vs. 8 (2 … 34), kuvio 7A] ja myöhemmissä vaiheissa syövän [vaiheen III : 125 (107 … 145) vs. vaihe I: 37 (17 … 78), kuvio 7C]. Samoin ei ollut korrelaatiota neutrofiilien määrä ja syövän tyypin, kasvaimen koon tai imusolmukestatuksesta (kuvio 7B ja 7D-7F).

Ihmisen keuhkosyöpä kudosta array värjättiin MPO-vasta havaitsemiseksi neutrofiilien granulosyyttien. (A) kvantifiointi MPO

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan yksilöitä. (B-E) kvantifiointi MPO

+ soluja, joka perustuu (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) tuumorin koon, ja (E) imusolmukestatuksesta. Solujen määrä on annettu MPO-positiivisia soluja 1000 solua. (F) Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjätty MPO-vasta perustuu niiden patologian. Asteikko bar = 25 pm.

B-solut ja dendriittisolut.

Seuraava, joka perustuu ilmentymisen CD20 ja CD11 c, arvioimme määrä kasvaimeen infiltroivien B-solujen ja dendriittisolut (yhdessä monosyyttien, makrofagien ja neutrofiilien) vastaavasti. Löysimme lisääntyminen CD20

+ B-solujen sisällä kasvainkudoksen verrattuna terveiden yksilöiden [39 (30 … 49) vs. 5 (1 … 34), kuvio 8A]. Määrä CD20

+ solut myös koholla vaiheessa III vs. vaiheen I syöpänäytteissä [75 (62 … 92) vs. 9 (2 … 41), kuvio 8C]. Lukumäärät CD20

+ B-solujen syöpäkudoksessa oli riippumaton syöpätyypin ja kasvaimen kokoa (kuvio 8B, 8D ja 8F). Huomattavasti suurempi määrä infiltroivien B-solujen havaittiin N0 tuumorinäytteissä verrattuna N1 + 2 näytettä [45 (34 … 59) vs. 29 (18 … 49] (kuvio 8E). Samoin määrä dendriittisolujen oli oleellisesti kohonnut sisällä kasvainkudoksessa arvioituna CD11 c immunovärjäyksellä [28 (24 … 32) vs. 6 (3 … 16), kuviossa 9A]. Lisäksi, useita CD11 c

+ solut kasvainkudoksessa oli riippumaton syövän tyyppi ( kuvio 9B ja 9F), vaikka määrä tunkeutuvien solujen kohonnut myöhemmissä vaiheissa keuhkosyöpään [47 (40 … 56) vaiheen III vs. 11 (4 … 28) I vaiheessa keuhkosyöpä, kuvio 9C]. lukumäärä CD11 c

+ dendriittisolujen tuumorinäytteissä oli riippumaton kasvaimen koon ja imusolmukestatuksesta (kuvio 9D ja 9E).

Ihmisen keuhkosyöpää kudosta array värjättiin CD20-vasta-aineen havaitsemiseksi B-solut. (A) kvantifiointi CD20

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan näytteet. (B-E) kvantifiointi CD20

+ soluiksi (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) kasvaimen kokoa, ja ( E) imusolmukestatuksesta. Cell numerot annetaan CD20-positiivisia soluja 1000 solua. (F) Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjätty CD20-vasta-aineen, joka perustuu niiden patologian. Asteikko bar = 25 pm.

Ihmisen keuhkosyöpä kudosta array värjättiin CD11 c-vasta havaitsemiseksi dendriittisoluja. (A) kvantifiointi CD11 c

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan yksilöitä. (B-E) kvantifiointi CD11 c

+ soluja, joka perustuu (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) tuumorin koon, ja (E) imusolmukestatuksesta. Solujen määrä on annettu CD11 c-positiivisten solujen 1000 solua. (F) Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjätty CD11 c-vasta perustuu niiden patologian. Asteikko bar = 25 pm.

MUM1- ja PD1-positiivisia soluja.

arvioitiin ekspressiotasot kaksi immuunijärjestelmän markkereita. MUM1 tarrat plasma-solujen ja aktivoitujen T-solujen, kun taas PD1 tarroja aktivoidut T-solut, B-solut, myeloidisoluissa ja osajoukko tymosyyttien. Sekä MUM1-positiivisten solujen ja PD1-positiiviset solut koholla syöpäkudoksessa verrattuna ohjaus keuhkot [MUM1

+ solut: 65 (52 … 81) vs. 6 (1 … 50), PD1

+ solut: 26 (21 … 32) vs. 9 (3 … 24), kuviot 10A ja 11A]. Esiintyvyys MUM1-positiivisten solujen oli riippumaton syövän tyypin, vaiheessa, kasvaimen koko ja imusolmukestatuksesta (kuvio 10B-10F). Määrä PD1

+ solujen korreloi syöpä vaiheessa [vaihe III: 49 (41 … 58) vs. vaihe I: 5 (1 … 22), kuvio 11C], mutta ei ollut korrelaatiota suhteen syöpätyypin , kasvaimen koon tai imusolmukestatuksesta (kuvio 11B ja 11D-11F).

Ihmisen keuhkosyöpä kudosta array värjättiin MUM1 vasta havaita plasman solujen ja aktivoidut T-solut. (A) kvantifiointi MUM1

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan yksilöitä. (B-E) kvantifiointi MUM1

+ soluja, joka perustuu (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) tuumorin koon, ja (E) imusolmukestatuksesta. Solujen määrä on annettu MUM1-positiivisia soluja per 1000 solua. (F) Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjätty MUM1 vasta-perustuu niiden patologian. Asteikko bar = 25 pm.

Ihmisen keuhkosyöpää kudosta array värjättiin PD1-vasta-aineen havaitsemiseksi aktivoitujen T-solujen, B-solujen, myeloidisoluissa ja osajoukko tymosyyttien. (A) kvantifiointi PD1

+ solujen keuhkosyöpään vs. terveitä luovuttajan yksilöitä. (B-E) kvantifiointi PD1

+ soluja, joka perustuu (B) niiden patologiaa, (C) syöpä vaiheessa (D) tuumorin koon, ja (E) imusolmukestatuksesta. Solujen määrä on annettu PD1-positiivisia soluja 1000 solua. (F) Kuvat ovat ihmisen keuhkoleikkeissä värjätty PD1-vasta perustuu niiden patologian. Asteikko bar = 25 pm.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa työllistää kudosmatriisien ja immunohistokemia, me kattavasti analysoitu stroomasolulinja koostumus eri ihmisen keuhkosyöpä tyyppejä, laatu ja vaihe. Yhdessä immunohistokemiallinen analyysi, me käytti myös syto- /histomorphological arviointi soluja. Tämä yhdistelmä antoi meille mahdollisuuden luokitella /subclassify kasvaimet tarkasti ja suorittaa suurikapasiteettisten analyysi stroomasolulinja koostumuksen kasvaintyypeissä yksilöiden välisen vaihtelevuuden. Mikä tärkeintä, havaitsimme laaja immuunijärjestelmän ja tulehdussolujen tunkeutuminen ihmisen keuhkosyövän näytteitä. Me kattavasti tunnettu ja määrällisesti T-lymfosyytit (CD3 +), sytotoksiset-T-solujen (CD8 +), auttaja-T-solujen (CD4 +), B-solut (CD20 +), makrofagit (CD68 +), mast-solut (CD117 +), mononukleaariset solut (CD11 c +), plasman soluja ja aktivoitua-T-solujen (MUM1 +), aktivoitua-T-solut, B-solut, ja ydinsoluissa (PD1 +), ja neutrofiilisten granulosyyttien (myeloperoksidaasin +) eri keuhkosyövän tyyppejä, syöpä vaiheissa, ja imusolmukestatuksesta.

suostumuksella tutkimuksissa Ruffini

et al

. [16], löysimme määrä kasvaa CD3

+ lymfosyyttien keuhkosyöpä kudosta kuin terveillä luovuttajan keuhkot. Kuitenkin analyysi siitä, miten T-solujen vaikuttaa kliininen tulos on usein saatu ristiriitaisia ​​tuloksia. Kilic

et al

. [18] kertoi, että korkeampi kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä suurissa keuhkokasvaimia korreloi vähentynyt riski taudin uusiutumisen, kun taas Kawai

et al

. raportoitiin ole korrelaatiota määrä kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä ja potilaan eloonjäämisen [17]. Tutkimuksessamme lisäksi yleisen analyysin kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä, analyysi erityisten T-solualaryhmien osoitti merkittävää kasvaimen infiltroituneen auttaja-T-solujen (CD4

+) sekä sytotoksisten T-solujen (CD8

+) kuin terveillä luovuttajan keuhkot. Kasvain-tunkeutuvia lymfosyyttejä ajatellaan olevan tärkeä rooli syövän vastaisen immuunitutkimusohjelmasta [17]. CD8

+ T-solut tunnistavat ja tuhoavat syöpäsoluja ja CD4

+ solut tukea CD8

+ T-solujen kasvainta. Siksi niiden määrä ja sijainti kasvainkudoksessa saattavat vaikuttaa kasvainten muodostumiseen [26]. Vaikka korkea määrä, CD8

+ T-soluja, jotka tunkeutua keuhkojen kasvaimet voivat olla huonosti johtuen kasvaimen microenvironmental tekijöitä, jotka saattavat myöhemmin vähentävän määrän efektori CD8

+ T-solujen [27]. Nämä muuttunut CD8

+ T-solut voivat jopa vapauttaa yhdisteitä, jotka edistävät syövän etenemiseen. Siten syvempää ymmärrystä ja leikkelyn osuus eri CD4

+ ja CD8

+ T solualapopulaatioiden (esim Th1, Th2, Th17, TC9, Tc17) on tarpeen.

Among fagosyyttien ja granulosyytit, havaitsimme, että suurempi määrä soluttautua makrofagien, syöttösolujen ja neutrofiilien korreloi positiivisesti kasvain vaihe ihmisen keuhkosyöpäpotilaita. Tiheys makrofagien sisällä kasvaimen luodot ja suhde makrofagien sijaitsevat näissä saarekkeiden että strooman makrofagit ovat myönteisiä ennustavat tekijät elossaololuku [17, 28]. Sen sijaan muut tutkimukset ovat osoittaneet, että sekä M1 ja M2 makrofagien suosivat syövän synnyn [29] ja niiden numeroita syöpä voi olla kielteisiä ennustetekijöiden [30]. Havaitsimme, että makrofagien tunkeutuminen korreloi positiivisesti kasvaimen vaiheen ja imusolmukestatuksesta /etäpesäke ihmisen keuhkosyöpäpotilaita viittaa tärkeän panoksen näiden kasvaimeen liittyvien makrofagien keuhkosyövän etenemisen ja etäpesäkkeiden. Vahvista tärkeyden makrofagien tulevissa tutkimuksissa olisi käsiteltävä alatyyppejä makrofagien läsnä microenvironment keuhkojen kasvain koska viimeaikaiset tutkimukset viittaavat siihen, että aikana Karsinogeneesin makrofagit voivat polarisoitumaan M1 (antituumorigeenistä) ja M2 (edistää syövän synnyn) alatyyppeihin ja näin voidaan käyttää ero vaikutuksia [31]. Lisäksi meidän täytyy ymmärtää kuinka kaksisuuntainen rajat puhua välillä makrofagien ja syöpäsolut vaikuttaa näiden solujen samoin kuin dissecting taustalla molekyylitason mekanismeja [32]. Olemme äskettäin esittänyt todisteita siitä makrofagien ja syöpäsolujen rajat puhua kautta CCR2 ja CX3CR1, peruskeinoja ajo keuhkosyövän [12]. Nämä havainnot viittaavat siihen, että terapeuttinen strategia estää CCR2 ja CX3CR1 voi osoittautua hyödylliseksi pysäyttämistä keuhkosyöpään etenemisen.

Mitä syöttösoluja, Walesin ja työtovereiden [28] osoitti, että lisääntynyt saareke /stroomasolujen mastsolun suhde on edullinen itsenäinen ennustetekijä, kun taas Kawai

et al

. [17] havaittu mitään korrelaatiota kliinisten tutkimusten tulosten kanssa. Täällä, osoitimme, että maston solujen määrä oli suurempi kasvainkudoksessa verrattuna terveiden luovuttajien ja oleellisesti kohonnut vaiheessa III syöpä verrattuna vaiheen I

Neutrofiilien granulosyyttien ovat saaneet entistä enemmän huomiota kuin uudentyyppinen kasvain- tunkeutumisatmosfääri immuunijärjestelmän solu, joka on rooli kasvaimen kasvua. Kuitenkin vähän tiedetään niiden roolista keuhkosyöpään. On ehdotettu, että lisääntynyt määrä neutrofiilien on havaittu bronkoalveolaarinen huuhtelu nesteen potilailla, joilla on bronchioloalveolar syöpä, ja se toimii itsenäisenä kliinisen lopputuloksen ennustajana [33]. Tässä näytämme kohonnut Neutrofiilien lukumäärä keuhkosyövän yksilöiden verrattuna terveisiin keuhko- ja vahva yhdessä kehittynyt keuhkosyöpä vaiheissa.

Dendriittisolut ovat voimakkaita, heterogeeninen antigeenejä esitteleviä soluja, jotka ovat tärkeitä ensisijaisesti immuunivasteet syöpä. Löysimme merkittävän kasvun CD11 c-positiivisten solujen kasvain massa myöhäisvaiheen syöpänäytteissä verrattuna terveiden luovuttajien. Spekuloida, että suurin osa näiden solujen vastaavat dendriittisolut, mutta emme voi sulkea pois sitä mahdollisuutta, että osa voi olla monosyytit, makrofagit tai neutrofiilien, jotka myös ilmentävät CD11 c [34]. Vaikka emme arvioida maturiteetti dendriittisolujen, edellinen työ [35] vihjasi, että ainakin osa kasvaimen infiltroituneen dendriittisolujen näyttää kehittymätön fenotyyppi ei-pienisoluinen keuhkosyöpä ja että tämä saattaa johtua useista kasvain- johdettu tekijät.

muista antigeenejä esitteleviä soluja, löysimme lisääntynyt määrä CD20-positiivisten B-solujen keuhkosyöpä näytteissä kuin terveillä luovuttajan kudosta. Koska rooli B-solujen syövän etenemisessä on melko kyseenalainen [16, 19, 36], olemme lisäksi arvioitu määrä MUM1-positiivisten plasmasolujen kasvaimen ja terveen ihmisen keuhkokudoksen. Plasma solut ovat peräisin B-soluista heidän kohtaaminen ulkomaisen antigeenin ja ovat ainoat tuottajat vasta [37]. Löysimme lisääntynyt määrä plasman solujen syöpäkudoksessa verrattuna luovuttajan keuhkot, että tulos oli riippumaton syövän vaiheessa sekä muita mitattavia parametreja. Rooli plasman soluja kiinteissä kasvaimissa ei tutkittu intensiivisesti, ja siten vain muutamia raportteja niiden roolin keuhkosyöpään olemassa. Lohr ja kollegat osoittivat, että tunkeutumisen kypsien plasman solujen kasvainkudosta liittyy pidensi elinaikaa [38].