Krooninen sairaus

tiivistelmä

Eturauhassyöpä on yleisin ei-dermatologic syöpään miehillä länsimaissa. Viime aikoina usein kromosomipoikkeavuustestissä fuusioimalla androgeenireseptorin säännelty

TMPRSS2

promoottori ja

ERG

geeni (

TMPRSS2 /ERG

) löydettiin eturauhassyöpää. Useat tutkimukset osoittivat yhteistyötä

TMPRSS2 /ERG

ja muut vialliset reittejä syövän etenemiseen. Kuitenkin paljastus tarkempia reittejä, joissa

TMPRSS2 /ERG

osallistuu, vaatii lisätutkimuksia. Käyttämällä kuolemattomaksi eturauhasen epiteelisolujen pystyimme osoittamaan, että

TMPRSS2 /ERG

yli-ilmentäviä soluja käytävä epiteelikasvaimet kohteeseen mesenkymaalitransitioon (EMT), joka ilmenee hankinta mesenkymaalisten morfologia ja markkereita sekä muuttoliike ja invaasio valmiuksia. Näitä havaintoja tukevat

in vivo

, jossa ohjaus solut johti erillisiä kyhmyjä, kun

TMPRSS2 /ERG

ilmentävillä solut muodostivat pahanlaatuisia kasvaimia, jotka ilmaisivat EMT markkereita. Tutkia tarkemmin yleisen transkriptio järjestelmän aiheuttama

TMPRSS2 /ERG

solut altistettiin mikrosiruanalyysi joka paljasti selvä EMT ilme ohjelma, mukaan lukien säätely ylöspäin EMT ohjaajat,

ZEB1

ja

ZEB2,

ja alas-säätely epiteelin merkki

CDH1

(E-kadheriinin). Kromatiinin immuunisaostustesti paljasti sitoutuvan suoraan

TMPRSS2 /ERG

sen edistäjä

ZEB1

mutta ei

ZEB2

. Kuitenkin

TMPRSS2 /ERG

kykeni sitoutumaan promoottorit

ZEB2

modulaattorit,

IL1R2

ja

SPINT1

. Tämä koesarja edelleen valaisee mekanismia, jolla

TMPRSS2 /ERG

fuusio vaikuttaa eturauhassyövän etenemistä ja voivat auttaa kohdistaminen

TMPRSS2 /ERG

ja sen loppupään tavoitteet tulevaisuudessa lääkekehityksessä ponnisteluja.

Citation: Leshem O, Madar S, Kogan-Sakin I, Kamer I, Goldstein I Brosh R, et al. (2011)

TMPRSS2 /ERG

Edistää epiteelikasvaimet on mesenkymaalitransitioon läpi

ZEB1 Twitter /

ZEB2

Axis Eturauhassyöpätutkimuksessa Model. PLoS ONE 6 (7): e21650. doi: 10,1371 /journal.pone.0021650

Editor: Moray Campbell, Roswell Park Cancer Institute, Yhdysvallat

vastaanotettu 26. tammikuuta 2011; Hyväksytty 4. kesäkuuta 2011; Julkaistu: 01 heinäkuu 2011

Copyright: © 2011 Leshem et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat huippuyksikkö apurahan lentoemäntä Medical Research Institute (FAMRI), EY FP6 Grant LSHC-CT-2004-503576, Yad Abraham Center for Cancer Diagnosis and Therapy ja Ridgefield perustus ”Talpiot” -ohjelma lääketieteelliseen johtamisen klo Sheba Medical Center, ja Israelin Cancer Association. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä on yksi yleisimmistä syövistä miesten. Lähes 30000 potilaiden odotetaan kuolee tautiin Yhdysvalloissa vuosittain. Merkittävä edistysaskel tällä tutkimusalalla on viime löytö että usein yli-ilmentyminen E kaksikymmentäkuusi (ETS) liittyvien esikasvaintekijät saattaa perustua androgeenireseptorin seurauksena yhteisen genomista uudelleenjärjestelyjä. Hallitseva muoto edellä mainittujen fuusioiden taajuudella -85% [1], on fuusio välillä eksonin 1 päässä TMPRSS2 ja eksonit 4-9 päässä

ERG

geeni, joka tapahtuu joko poistetaan 3 mega emäkset alue erottaa nämä geenit [2], tai kautta kromosomien välisen translokaation [3], [4]. Koska tämä fuusio on jo nähtävissä Eturauhasen intraepiteliaalinen neoplasia (PIN) [5], Tutkimme fuusio voi olla avain kohti ymmärtämään mekanismeja alkuvaiheessa eturauhassyöpä.

Koska sen löydön [6]

TMPRSS2 /ERG

fuusio on tutkittu laajalti monessa suhteessa, mukaan lukien varhainen diagnosointi, prognoosi, panos syövän etenemiseen ja jopa tavoitteeksi syöpäterapialle [7]. Mukaan pitkän aikavälin kliinisissä tutkimuksissa on suuri kohortin potilaista, näyttää siltä, ​​että

TMPRSS2 /ERG

ilmentyminen liittyy enemmän aggressiivinen muoto eturauhassyövän [8], [9]. Lisätutkimukset ovat osoittaneet rooli

TMPRSS2 /ERG

fuusio kasvainten synnyssä leviämisen kannalta, invaasion ja syövän taudin alkamisen ja etenemisen [10], [11], [12], [13]. Yleisesti näyttää siltä, ​​että solujen lisääntymistä ei välttämättä edistetään kautta

TMPRSS2 /ERG

ilmaisua. Kuten kasvaimien synnyn, tiedot on epäselvä. Vaikka nakutuksen alas endogeenisen

TMPRSS2 /ERG

vuonna VCAP eturauhasen johdettuja syöpäsolujen vähensi sekä kasvaimen oton ja tilavuuden [13], [14], siirtogeenisiä hiiriä kätkeminen

TMPRSS2 /ERG

niiden genomiin joko kehittyneissä PIN [10], [15] tai paljasta mitään histologiset PIN tai kohdunkaulan syöpä [11], [16]; riippuen mallista tutkimuksessa käytetyt ja tietojen tulkintaa. Huolimatta erimielisyyttä roolista

TMPRSS2 /ERG

syövän aloittamista soluinvaasiota ehdotettiin olevan seurausta

TMPRSS2 /ERG

fuusio sekä

in vitro

ja

in vivo

[10], [13], [15]. Mielenkiintoista, joka on

in silico

Tutkimus osoitti, että

TMPRSS2 /ERG

koekspressoitiin histonideasetylaasi 1 (HDAC1) on kytketty alaspäin säätely sen tavoitearvojen [17]. Tämä havainto viittaa siihen, että

TMPRSS2 /ERG

liittyy epigenetic uudelleenohjelmointi. Sen mukaisesti seurantatutkimuksessa suoritetaan samaan ryhmään, HDACi, ja HDAC erityisiä estäjät, vaarantunut TMPRSS2

/ERG

ilmentymisen tai aktiivisuuden ERG-positiivisissa soluissa,

in vitro

[17] , [18]. Lisäksi viimeaikaiset havainnot osoittivat yhteistyötä TMPRSS2 /ERG fuusio ja vapautuneilla aktiivisuus syöpään liittyvien reittien, kuten PTEN [19], PI3-Kinase [16], ja AKT tai AR [20]. Viime aikoina TMPRSS2 /ERG osoitettiin välittävän epiteelisolujen ja mesenkymaalitransitioon (EMT) indusoimalla WNT signalointikomponentteja [21]. Yhdessä voitaisiin arvella, että muut

TMPRSS2 /ERG

-välitteisen polkuja, voidaan lähentynyt samaan päätepisteen, nimittäin EMT ja invaasio; ja siksi löytää uusia polkuja joka

TMPRSS2 /ERG

kohdistaa tämä vaikutus on suuri merkitys. Tärkein motivaatio Tämän tutkimuksen on siis purkaa tällaisia ​​

TMPRSS2 /ERG

liittyviä reittejä yhteydessä eturauhassyöpää. Aikaisemmassa työssä loimme ikuisti ja tuumorigeenisia ihmisen eturauhasen epiteelisolujen (PrECs) riviä määrätyn geneettisen perustuslain [22]. Samoin esitetyssä tutkimuksessa olemme tuotti muuntogeenisten PrECs palvelemaan tausta, johon vaikutukset

TMPRSS2 /ERG

fuusio voisi olla aidosti tutkia. Huomasimme, että TMPRSS2 /ERG suorittaa erillisen EMT ilmaus ohjelma joka on pääasiassa säätelee suoran aktivoinnin

ZEB1

ja epäsuora induktio

ZEB2

kautta

SPINT1

ja

IL1R2

modulaatio, mikä EMT fenotyyppi

in vitro

ja

in vivo

.

tulokset

perustaminen ikuistettu PrECs kulttuurien

tutkiakseen vaikutuksen

TMPRSS2 /ERG

on muuntogeenisen ympäristön pyrimme luomaan kuolemattomaksi PrECs kulttuuriin. Normaalin eturauhasen epiteelisolut valmistettiin ihmisen eturauhasen näytteestä ja myöhemmin viljelmässä. Aiheuttavan kuolemattomaksi, solut otettiin käyttöön kanssa telomeraasin katalyyttinen alayksikkö hTERT, ja sekä p53 ja pRB reitit olivat huolestuneita p53 Knockdown ja yli-ilmentyminen CyclinD /CDK4-kimeeran, vastaavasti, mikä aiheuttaa kuolematon solulinja nimetty EP (kuva 1A ja B). Seuraavaksi kuolemattomaksi solut infektoitiin retrovirusten koodaa joko

TMPRSS2 /ERG

tai tyhjä-vektorisäätö (kuvio 1 C). ERG proteiini taso oli verrattavissa sen aiemmin raportoitu ilmentymistaso solulinjoissa ja syöpänäytteissä [23], [24]. Erityisesti

TMPRSS2 /ERG

yksin tai yhdessä hTERT ja /tai p53 pudotus ei ollut riittävä aiheuttamaan kuolemattomaksi (tuloksia ei ole esitetty). Lopuksi jälkeen edellisen raportin, että yhdistelmä androgeenireseptorin (AR) ja korkea ERG kehitystä edistävä enemmän huonosti eriytetty, invasiivisia adenokarsinooma kuin joko geeni yksinään [20]; AR vietiin

TMPRSS2 /ERG

ilmentävillä solujen sekä niiden tyhjin vektori valvonta (kuvio 1 C).

indusoimiseksi kuolemattomaksi, solut otettiin käyttöön kanssa telomeraasin katalyyttinen alayksikkö hTERT ja sekä p53 ja pRB reitit olivat levoton käyttäen p53 pudotus ja yli-ilmentyminen cyclinD /CDK4, vastaavasti. (B) Ensisijainen PrECs sekä hTERT /shp53 /CyclinD-CDK4 – yli-ilmentävät solut (EP-solut), lisättiin peräkkäin siirrostettiin ja laskettiin. Populaation kaksinkertaistumista (Sivunkuvaus) laskettiin kaavalla: Sivunkuvaus = log (solu tuotos /cellinput) /log2. (C) EP solut otettiin käyttöön AR ja joko

TMPRSS2 /ERG

(EP-AR TMPRSS2 /ERG) tai tyhjän vektorin (EP-AR). AR ja ERG proteiinin tasot mitattiin Western blot. Aktiini käytettiin latauskontrollina.

Rooli varten

TMPRSS2 /ERG

epiteeli- ja mesenkymaalitransitioon

in vitro

Vertaamalla morfologia EP-AR ja EP-AR

TMPRSS2 /ERG

solulinjoilla valomikroskoopilla, havaitsimme, että EP-AR

TMPRSS2 /ERG

solut hankittiin fibroblastisia kaltaisia ​​ominaisuuksia, koska ne osoittivat enemmän pitkänomainen morfologia ja hajallaan tiheys verrattuna niiden isogeenisiin valvonnan, jolla oli suurempi sitoutuminen naapurisolujen välillä (kuvio 2A). Havaitut muutokset, jotka ovat tyypillisiä piirteitä EMT [25], [26], yhdistettynä aikaisempien raporttien liittämällä

TMPRSS2 /ERG

kanssa EMT ja hyökkäys [10], [21], sai meidät tutkimaan, onko vuonna lisäksi morfologisia muutoksia, solut myös myönnetty motiliteettia ja hyökkäys valmiuksia. Tätä tarkoitusta varten soluja siirrostettiin siirtoaltaat seerumittomalla tiedotusvälineet ja niiden siirtymistä seerumin täydennetty median arvioitiin. Kuten kuvassa 2B,

TMPRSS2 /ERG

ilmentävillä solut osoittivat parannettu vaeltavia kapasiteettia. Sama koe toistettiin käyttäen Matrigel-päällystettyihin kuoppiin, jotta voidaan tutkia solujen kyky tunkeutua ja hyökätä tiheä pinta. Jälleen kerran, hyökkäys kyky oli huomattavasti havaittavissa

TMPRSS2 /ERG

ilmentävien solujen (kuvio 2C). Menetys

CDH1

(E-kadheriini) pidetään tärkein tapahtuma EMT [27]. Siksi mitataan tasot

CDH1

mRNA ja proteiini käyttäen QRT-PCR ja Immunofluoresenssivärjäystä vastaavasti. Todellakin, EP-AR

TMPRSS2 /ERG

solut osoittivat merkittävän vähenemisen tasot

CDH1

mRNA (kuvio 2D) ja proteiini (kuvio 2E). Lisäksi

VIM

(vimentiinista), joka on tunnettu mesenkymaaliset markkeri havaittiin olevan koholla

TMPRSS2 /ERG

ilmentävillä soluissa (kuvio 2E). Yhteenvetona, meidän tiedot osoittavat, että

TMPRSS2 /ERG

yliekspressio provosoi epiteelin ja mesenkymaalitransitioon

in vitro

.

(A) morfologiset vertailut, solut valokuvattiin käyttäen valomikroskoopilla. (B) Soluja ympättiin siirtoaltaat ja niiden muuttavien kapasiteettia kohti FCS mitattiin laskemalla vaeltavien solujen. (C) Sama setup kuin (B) käytettiin Matrigel kuorrutettu siirtoaltaat jotta vertailla soluun invasiivisuus. (D) Solut analysoitiin CDH1 (E-Cadhein) ilmentyminen käyttäen QRT-PCR. Tulokset esitetään keskiarvona ± SD kolminkertaisessa edustavasta kokeesta. * Merkitsee merkittävää ero geenin ekspression kontrolliin verrattuna. (E) Solut maljattiin dioja ja värjättiin CDH1 ja vimentiinista. DAPI käytettiin visualisoimaan ytimiä. (F) Solut istutettiin hiiren eturauhasen rauhaset. Rauhaset poistettiin 68 päivää istutuksen jälkeen, leikattiin ja joko värjättiin Hematoxilin ja eosiinilla (H me joko pistetään geneettisesti muunnettuja solulinjoja ihon alle tai istutettavaksi ne ortotooppisesti eturauhasen nude-hiirten. Kuusikymmentä kahdeksan päivän kuluessa kiinnittymisestä, kasvaimet poistettiin, leikattiin ja värjättiin EMT markkereita. Verrataan ortotooppinen implantaatio erillisistä solulinjojen paljasti, että hTERT /shp53 /CDK4 kuolemattomiksi PrECs (EP-solut) eivät muodostaneet kasvaimia (tietoja ei esitetä), kun taas EP-AR muodostettu erillisistä kyhmyt välissä koko hiiren eturauhasen (kuvio 2F, merkitty sinisillä nuolilla). Varsinkin EP-AR

TMPRSS2 /ERG

solut muodostivat suuria pahanlaatuisia kasvaimia, jotka ympäröivät normaalin hiiren eturauhasen kyhmyt (kuvio 2F, mustat nuolenpäät). Lisäksi EP-AR-johdettu kyhmyt osoitti positiivista värjäytymistä epiteelin merkki CDH1, ja epäonnistunut värjäytyä mesenkymaaliset merkki VIM (kuvio 2F, siniset nuolet). Peilikuva näkyi EP-AR

TMPRSS2 /ERG

-johdannainen kasvaimia, jotka ilmaisivat korkea VIM ja olivat negatiivisia CDH1 edelleen vahvistavia

in vitro

havainto, että

TMPRSS2 /ERG

indusoi EMT. Värjäys MKI67 (Ki-67), joka on tunnettu leviämisen merkki, paljasti laajan ilmaisun EP-AR

TMPRSS2 /ERG

kasvaimia (37% ± 2 positiiviset solut) verrattuna EP-AR-johdettu kyhmyt (8% ± 2). Tämä osoittaa, että EP-AR-johdettu kyhmyt ovat vähemmän proliferatiivisia ja voi selittää niiden piilevän luonteen.

kuvatut tulokset Tähän mennessä mukaan

TMPRSS2 /ERG

helpottaa EMT ja näin ollen muodostuminen aggressiivisempia ja proliferatiiviset kasvaimia. Useat tutkimukset osoittivat, että verrattuna PIN vaurioita,

TMPRSS2 /ERG

uudelleenjärjestelyn taajuus lokalisoitu invasiivisia eturauhasen syöpiä, kaksinkertaistuu [5], [28], [29], [30]. Tämä havainto viittaa siihen, että

TMPRSS2 /ERG

vaatii lisää muutoksia, jotta voidaan valita positiivisesti taudin edetessä. Tämän hypoteesin testaamiseksi, käytimme aiemmin luotu, Ras-transformoidut PrECs kulttuuri [22]. Nämä solut satama ektooppisesti-ilmaisi hTERT, viruksen onkogeenien SV40 pienten ja suurten T antigeenejä, onkogeenisen H-RasV12 ja androgeenireseptorin. Tyhjän vektorin tai

TMPRSS2 /ERG

koodittava vektorit viedään näihin soluihin, muodostamaan kaksi erillistä solulinjoja, LHSR ja LHSR

TMPRSS2 /ERG

, vastaavasti (kuvio 3A). Kanssa saatuja tuloksia EP-AR-solujen, CDH1 oli säädellä vähentävästi LHSR soluissa, jotka ilmentävät

TMPRSS2 /ERG

(kuvio 3B). Seuraavaksi solut ortotooppisesti injektoitiin paljaisiin hiiriin prostates, sekä subkutaanisesti. Kuten odotettua, seuraavat vain 28 päivää molemmissa solulinjoissa aiheuttanut kasvaimia ilman merkittäviä eroja koko (kasvaimen esiintymistiheys on esitetty taulukossa S1). Näin ollen, MKI67 värjäys ei paljastanut mitään eroja solulinjojen suhteen lisääntymisnopeus (tietoja ei esitetty). Mielenkiintoista,

TMPRSS2 /ERG

ilmentävä kasvaimia osoitti merkitty säätely ylöspäin VIM ja huomattava alas-säätely CDH1 kontrolliin verrattuna kasvaimet (kuvio 3C), edelleen validointi helpottaminen EMT että

TMPRSS2 /ERG

ylimääräiseen, ja aggressiivisempi,

in vivo

mallissa. Koska LHSR solulinjat ovat erittäin aggressiivisia, ne eivät sovellu tutkia vaikutusta

TMPRSS2 /ERG

etäpesäkkeiden muodostumiseen, sillä hiiret oli uhrata lyhyen ajan jälkeen injektion. Kuitenkin eräässä tapauksessa

TMPRSS2 /ERG

ilmentävä kasvain metastasized hiiren keuhkoissa. Kuten kuviossa S1, tämä etäpesäke on peräisin LHSR

TMPRSS2 /ERG

primaarikasvaimen, koska se värjättiin positiivisia ihmisen-spesifisen anti-AR-vasta-ainetta. On houkuttelevaa spekuloida, että EMT aiheuttama

TMPRSS2 /ERG

myönnetty soluja muuttavien ja invasiivisia valmiuksia ja lopulta niille mahdollisuuden kotiin ja lisääntyä kaukainen sivuston. Siten annetaan erittäin transformoitu geneettinen tausta,

TMPRSS2 /ERG

indusoimaan EMT saattaisi helpottaa ja metastaasit.

(A) PrECs ektooppisesti ilmentävien hTERT sekä SV40 pienten ja suurten T kohtaan olivat käyttöön H-RasV12 ja AR. Tuloksena linja, LHSR (Control), otettiin käyttöön TMPRSS2 /ERG muodostamiseksi LHSR TMPRSS2 /ERG linja. Western-blot-kuvaa proteiinin tasot ektooppisesti-ilmentyvien geenien. (B) Soluja analysoitiin CDH1 ilmentymisen käyttäen QRT-PCR. Tulokset esitetään keskiarvona ± SD kolminkertaisessa edustavasta kokeesta. (C) Soluja ortotooppisesti istutettiin hiiriin eturauhaset. Rauhaset poistettiin kuukauden kuluttua implantaation leikattiin ja värjättiin H suoritimme genominlaajuisten lähestymistapaa ja suoritti ilmaisua mikro-array-pohjainen vertailu EP-AR ja EP-AR

TMPRSS2 /ERG

soluja. Kaikkiaan 1215 selityksin geenit ilmentyvät differentiaalisesti kahden solulinjoista (813 säädelty ja 402 alas-säännelty), josta me haetaan niitä, jotka molemmat liittyvät

ZEB1

tai

ZEB2

, ja sekaantunut EMT kirjallisuudessa (Katso tarkempia tietoja suodatuksen menetelmä viittaavat legenda kuvio 5B). Aitouden Tästä geenien myös validoitu niiden microarray johdettuja differentiaalikaavojen kuvioita QRT-PCR (tuloksia ei esitetä). Kuten kuvassa 5B, seitsemän geenit sovitettu suodatuksen kriteerit. Kaksi heistä,

IL1R2

ja

SPINT1

(kuvio 5C, validoitu QRT-PCR), ilmoitettiin koodata ylävirtaan efektoreita

ZEB2

ilmaisu; entinen osoitettiin nostaa

ZEB2

ekspressiotasot [35], kun taas jälkimmäinen vaimenee sen ilme [36], mikä viittaa siihen, että ne saattavat olla välittäjiä

TMPRSS2 /ERG

riippuvainen

ZEB2

korkeus. Molemmat

IL1R2

ja

SPINT1

promoottorialueille koostuvat otaksuttu

TMPRSS2 /ERG

sitovat motiivit (kuva S2), ja jopa

TMPRSS2 /ERG

näytteillä merkittävä sitoutuminen niiden promoottorien siru määrityksessä (kuvio 5D). Edelleen vahvistaa SPINT1 ja IL1R2 vaikutus

ZEB2

ilmaus meidän järjestelmässämme, koputimme alas niiden ilmentyminen käyttäen pieniä-häiritsevä RNA (siRNA). Kuten kuviossa 5E,

SPINT1

ja

IL1R2

tasot vähentää tehokkaasti heti siRNA transfektion, johtaen

ZEB2

korkeus ja lasku vastaavasti. Kaiken

TMPRSS2 /ERG

näyttää suoraan sitoa ja trans aktivoida

ZEB1

samalla epäsuorasti asiakkuutta

ZEB2

kautta trans-aktivaation ja trans-tukahduttaminen sen -efektiboksejamme

SPINT1

ja

IL1R2

.

(A) Kromatiini-IP-määritys suoritettiin julkaisussa EP-AR TMPRSS2 /ERG-soluihin käyttäen α-ERG-vasta-aineen ja IgG kontrollina. Tulokset esitetään keskiarvona ± SD kolminkertaisessa edustavasta kokeesta. * Merkitsee P-arvo 3 x 10

-2. (B) luettelo 1215 differentiaalisesti ilmentyvien geenien oli leikkaavat luettelon liittyvien geenien

ZEB1

tai

ZEB2

, joka saatiin ”Genomatix” ohjelmistojen [47], jolloin 37 jaetut geenit. 37-geenien luettelo on suodatettu liittyviä geenejä EMT kirjallisuuden mukaisesti (n = Tuntematon otoskoko), jättäen 7 geenejä, on lueteltu alla. (C) Soluja analysoitiin

SPINT1

ja

IL1R2

ilmaisu käyttäen QRT-PCR. Tulokset esitetään keskiarvona ± SD kolminkertaisessa edustavasta kokeesta. * Merkitsee P-arvo alle 5 x 10

-4. (D) Sama set-up (A) käytettiin

IL1R2

ja

SPINT1

promoottorit (E) Vasen paneelit: EP-AR-solut transfektoitiin siRNA kohdistaminen

SPINT1

ja mRNA: n ilmentymisen nimettyjen geenien mitattiin QRT-PCR. Tulokset esitetään keskiarvona ± SD kahdesta kokeita käyttämällä kahta erilaista siRNA oligonukleotideja. * Merkitsee P-arvo = 7 × 10

-4, ** tarkoittaa P-arvo = 1 x 10

-3. Oikea paneelit: sama koejärjestelyistä käytettiin siRNA kohdistaminen

IL1R2

EP-AR TMPRSS2 /ERG. * Merkitsee P-arvo = 2 x 10

-4, ** tarkoittaa P-arvo = 1 x 10

-2.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa tarjoamme merkittävää näyttöä tukevat käsitystä, että

TMPRSS2 /ERG

oletetaan aktiivisesti epiteelin ja mesenkymaalitransitioon kautta aktivoinnin ZEB /

CDH1

koulutusjakson, sekä

in vitro

ja

in vivo

. Nämä havainnot valottavat mekanismi, jonka

TMPRSS2 /ERG

fuusio kykenee sen onkogeenista vaikutus.

EMT ja hyökkäys valmiuksia raportoitiin olevan seurausta

TMPRSS2 /ERG

ilmentymistä useissa tutkimuksissa [10], [13], [15], [21]. Siten näyttää siltä, ​​että EMT ja hyökkäys ovat yleisiä prosesseja, jotka toteuttavat ne

TMPRSS2 /ERG

eturauhassyövässä, ja joka saavutetaan erilaisia ​​mekanismeja. Johdonmukaisesti, WNT signalointi komponentteja kuten WNT7A, näkyivät mallimme samoin. EMT indusoi useiden signalointireittien, kaikki funneled alas-säätely

CDH1

. Nämä reitit ohjaavat noin 10 suuret transkriptiotekijöitä, jotka tukahduttavat

CDH1

ilmentymistä joko suoraan tai epäsuoraan tavalla [27]. Yksi tällainen polku on SNAI1 /2, jotka säätelevät

ZEB1 Twitter /2 ilmaisun ja ovat sekaantuneet eturauhassyövän [37], [38], [39]. Ei ero ilmaus SNAI1 tai SNAI2 näkyi meidän järjestelmässä. Kuitenkin, kuten aiemmin on raportoitu [40],

ZEB

geenit voivat edistää EMT riippumatta Snail1 /2: n ilmentymisen, joka viittaa vaihtoehtoisesti ylävirtaan aktivaattori tässä reitin. Meidän järjestelmässä,

TMPRSS2 /ERG

näyttää täyttää vaaditut tähän alkupään aktivaattorin.

AR on keskeinen rooli eturauhassyövässä etenemiseen ja tiedetään säännellä

TMPRSS2

promoottori, joka muodostaa sääntelyn osa

TMPRSS2 /ERG

fuusio. Lisäksi AR äskettäin osoitettu synergisesti

TMPRSS2 /ERG

edistää invasiivisia adenokarsinooma kehitystä [20]. Siten vahva yhteistyötä kahden näkyi meidän järjestelmässä, koska kukin geeni ei aktivoinut ja jopa hieman alennetaan

ZEB1 /2

ilmaisu, kun taas koekspressoimalla tuotti merkitty transkription induktio näistä geeneistä (Data ei esitetty). Samoin vaikka EP solut ei kasvanut

in vivo

seuraavissa potilaalle tehdä istutuksen ja EP-AR solut muodostivat erillisiä kyhmyjä, EP-AR

TMPRSS2 /ERG

solut johti suuriin pahanlaatuisia kasvaimia, korostetaan synergistinen yhteistyön luonteesta. Viimeaikaiset tutkimukset ovat yhdistäneet AR EMT eturauhassyövässä malleissa kautta aktivointi Snai akselin [41], [42]. Meidän olevassa tutkimuksessa, AR yksinään ei riittänyt aiheuttamaan EMT, ehkäpä johtuen Snail-köyhdytettyä tausta. Niinpä jälleen, se voidaan arveltu, että AR yhteistyötä

TMPRSS2 /ERG

vedota vaihtoehtoisen EMT reitin puuttuessa Snail. Se, että ilmaisua sekä AR ja

TMPRSS2 /ERG

järjestelmässämme säännellään keinotekoista promoottorit, tekevät sen sopimattomaksi tutkia AR aiheuttama

TMPRSS2 /ERG

ilme. Kuitenkin tämä järjestelmä voisi edustaa hormoniresistentti vaiheessa edenneen eturauhassyövän jossa AR on yli-aktivoitu. Tuloksemme viittaa siihen, että yhteistyö AR ja

TMPRSS2 /ERG

ei yksinomaan välittyvät AR-riippuvainen transkription säätelyyn ERG. Vaihtoehtoisesti muita mekanismeja, kuten välittäjinä komponentteja tai fyysisiä vuorovaikutuksia, voivat vaikuttaa yhteistyötään eturauhassyövän etenemiseen. Jatkotutkimukset tulisi keskittyä valaisemaan tarkkaa mekanismia, jolla AR tarkastukset

TMPRSS2 /ERG

ilmentymistä ja toimintaa.

Sekä SPINT1 ja Il1R2 aiemmin osallisina syövän. Il1r2 oli kuitenkin merkittävästi koholla plasmassa Hodgkinin lymfooman ”potilaita terveisiin kontrolleihin verrattuna [43]. Lisäksi pakko ilmaus

IL1R2

joka uroepithelial solulinjassa johti morfologinen muutos, aktiini uudelleenjärjestely ja acquirement jonkin muuttavan kapasiteetin ja

IL1R2

yliekspressio liittyi parannettu ilmaus

ZEB2

ja vähentää ilmentymistä

CDH1

[35]. Työmme edelleen tukevat

IL1R2

pro-kasvaimia synnyttävän aktiivisuuden mikä välittyy

TMPRSS2 /ERG

suoraan trans-aktivoitumisen. Äskettäin tutkimuksen, jossa verrattiin kudoksissa ja solulinjoissa, jotka edustavat eri vaiheissa Eturauhassyöpä, Spint1 oli erittäin ilmentyy normaaleissa kudoksissa verrattuna eturauhasen hyvänlaatuinen liikakasvu (BPH) ja heikompilaatuisen syöpä, jolla on etenevä menetys kasvaimen lisääntyvän yksilöt [44 ]. Näin ollen,

SPINT1

vaimennus eturauhassyövän solulinjoissa, johti aggressiivisemman fenotyypin, joka sisälsi parannetun liikkuvuuden ja invasiivisuus [45]. Lopuksi SPINT1 Knockdown että haimasyövän solulinja SUIT-2, indusoi EMT ja invaasio, joka oli liitetty

ZEB2

korkeus ja

CDH1

vähentämisessä [36]. Yhteisesti nämä tiedot viittaavat siihen, että SPINT1 toimii tuumorisuppressori Eturauhassyöpä. Pystyimme osoittamaan, että SPINT1 osittain vaikuttaa siten pitoisuuksien vähentämistä

ZEB2

ja siksi se on tukahdutettu mukaan

TMPRSS2 /ERG

.

Äskettäin raportit joka keskittyy tekemästä yhteistyöstä

TMPRSS2 /ERG

eri kumppaneiden syöpä prosessin syntymässä [16], [19], [20]. (https://www.affymetrix.com/support/downloads/manuals/wt_sensetarget_label_manual.pdf).

Mircro-array