Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Serum eturauhasen antigeenin (PSA ) on yleisimmin käytetty merkkiaine diagnosoimiseksi eturauhassyövän (PCA). Se ei spesifisesti ja ennustearvo, jolloin virheellisiä diagnooseja ja ylihoito taudin. Tutkimuksen tavoitteena oli arvioida hyödyllisyyttä plasman telomeraasin käänteistranskriptaasin (hTERT) mRNA diagnostisena ja ennustetyövälineenä PCA ja sen yhteys kliinis parametrien kasvaimia.

Keskeiset havainnot

plasman hTERT mRNA-tasot määritettiin qRT-PCR 105 peräkkäisen potilailla, joilla on kohonnut PSA tasoilla ja 68 tervettä vapaaehtoista. Diagnostinen tarkkuus, teho kuin ennustetekijä biokemiallisia toistuminen ja yhdessä kasvain kliinis parametrit plasma hTERT mRNA ja seerumin PSA testit määritettiin käyttäen yhden ja usean analyysejä. Tulokset osoittavat, että plasman hTERT mRNA on ei-invasiivinen biomarkkeri PCa diagnoosin, joka osoittaa suuremman herkkyyden (85% vs. 83%), spesifisyys (90% vs. 47%), positiivinen ennustearvo (83% vs. 56%) , ja negatiivinen ennustearvo (92% vs. 77%) kuin seerumin PSA. Plasma hTERT mRNA merkitsevästi yhteydessä huonoon ennusteeseen kasvain kliinis parametrit ja on merkittävä itsenäinen ennustaja PCa (p 0,0001). Univariate analyysi tunnistettu plasma hTERT mRNA (mutta ei seerumin PSA) merkittävänä ennustetekijä biokemiallisten toistumisen. Plasma hTERT mRNA Kaplan-Meier -käyrät vahvisti merkittäviä eroja ryhmien välillä ja potilailla, joilla on korkeampi kuin raja-arvo osoitti vähentynyt uusiutumista vapaan elinajan (p = 0,004), kun taas mitään eroja havaittu seerumin PSA (p = 0,38). Monimuuttuja-analyysi osoitti, että plasman hTERT mRNA (mutta ei seerumin PSA) ja vaihe liittyi merkittävästi biokemiallisten uusiutuminen.

Johtopäätökset

Kaiken kaikkiaan nämä tulokset osoittavat, että hTERT mRNA on hyödyllinen ei-invasiivisia kasvain merkkiaine molekyylitason diagnoosin Eturauhassyövän antaen suuremman ja ennustavia tarkkuus kuin PSA määritys ja saattaa olla merkitystä seurannan taudin.

Citation: maaliskuu-Villalba jA, Martínez-Jabaloyas JM , Herrero MJ, Santamaria J, Alino SF, Dasi F (2012) Cell-Free Circulating Plasma hTERT mRNA on hyödyllinen markkeri eturauhassyövän diagnoosi ja liittyy huonoon ennusteeseen kasvainten ominaisuuksiin. PLoS ONE 7 (8): e43470. doi: 10,1371 /journal.pone.0043470

Editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Port Oncology, Portugali

vastaanotettu: 30 huhtikuu 2012; Hyväksytty: 20 heinäkuu 2012; Julkaistu: 20 elokuu 2012

Copyright: © maaliskuu-Villalba et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole rahoitusta tai tukea raportti.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä (PCA) on, lukuun ottamatta ihosyövän, yleisimmin diagnosoitu syöpä miehillä kehittyneissä yhteiskunnissa ja toiseksi kuolinsyy syöpään jälkeen keuhkosyöpään [1]. Diagnoosi Eturauhassyövän on lisääntynyt dramaattisesti viime vuosikymmenen aikana, mikä johtuu lähinnä runsas käyttö seerumin prostataspesifisen antigeenin (PSA) testit [2]. Kun seerumin PSA nousee yli kynnyksen 2,5-4,0 ng /ml, potilas pidetään usein ehdokkaana koepala jotta voidaan sulkea pois syöpäriskiä. Kuitenkin käyttö seerumin PSA seuloa PCA on kiistanalainen eikä yksimielisesti suosittelemia kansainvälinen lääketieteellinen yhteisö. Suuri määrä johtuu siitä, että PSA-testi on rajoitettu spesifisyys ja ennustearvoa, jolloin merkittävä määrä vääriä positiivisia ja näin ollen tarpeeton koepaloja [3].

On useita syitä, miksi se on vaikeaa tulkita PSA-testi ja tehdä tarkka päätös siitä, onko suorittaa koepala. Ensinnäkin, jopa 15% syöpätapauksista (jotkut korkealaatuisesta PCA) ei diagnosoitu miesten PSA-pitoisuudet olivat alle raja-tason [4]. Toiseksi, vaikka korkea seerumin PSA liittyy PCA ne voivat myös ilmoittaa muita vähemmän vakavien sairauksien, kuten akuutti bakteerin aiheuttama prostatiitti, eturauhasen hyvänlaatuinen liikakasvu (BPH), kystiitti, siemensyöksy, välilihavamma tai hiljattain kirurgisten virtsatietulehdusten [2]. Tiedot Euroopan satunnaistettu tutkimus seulonta Eturauhassyöpä (ERSPC) osoitti, että 10-20% miehistä oli epänormaali PSA tasoilla ja siksi täytti nykyisen kriteeri koepala, vaikka vain noin 24% miehistä kyseessä lopulta kehittyi PCa [5].

Lisäksi tulokset satunnaistetun kliiniset kokeet ovat osoittaneet, että PSA tuottaa ristiriitaisia ​​tuloksia ja sillä on vain vähän hyötyä suhteessa PCa kuolleisuutta. ERSPC ja Göteborgin tutkimukset paljastivat kohtalaisen alennettua PCa kuolleisuus [5], [6], kun taas eturauhasen, keuhkojen, peräsuolen ja munasarjasyöpä Screening (PLCO) tutkimus osoitti eivät pienene mainitut nopeuden [7]. Vaikka korkea PSA-pitoisuudet ovat usein liittyy aggressiivisempi etenemistä PCA ne eivät aina vastaa sitä biologista käyttäytymistä taudin, mikä johtaa ylidiagnostiikka ja ylihoito, jossa turhia riskejä virtsa-, seksuaalinen ja ohutsuolen toimintahäiriö, mikä liittyy [ ,,,0],8].

tässä yhteydessä uudet biomarkkerit ovat radikaalisti tarvitaan havaita kliinisesti PCA ja suorittaa varhaisen ja tarkka diagnoosien taudin, mikä vähentää määrää koepaloja taas onnistuneesti havaita niin usein Eturauhassyövän kuin mahdollista.

tätä varten ihmisen telomeraasin on yksi lupaavimmista kasvainmerkkiaineet tutkitaan parhaillaan. Telomeraasiaktiivisuus on todettu olevan koholla 85-100% syöpäpotilaita, kun se on pieni tai havaita normaaleissa somaattisten solujen [9]. Useat tutkijat ovat raportoineet havaitsemiseen telomeraasin käänteistranskriptaasin (hTERT) mRNA plasmassa /seerumissa useita erilaisia ​​syöpiä, mukaan lukien Eturauhassyövän [10] – [17]. Eräässä aikaisemmassa tutkimuksessa pieni määrä potilaita, ryhmämme havaittu hTERT mRNA plasmassa Eturauhassyövän potilaiden ja totesi, että sen kvantifiointiin muodosti herkkä ja spesifinen menetelmä tunnistaa PCa potilaille. Lisäksi kun tarkastellaan yhdessä PSA, se oli tehokas merkkiaine varhaisen PCa diagnoosia [16].

Kuitenkaan mikään näistä tutkimuksista ovat verranneet läsnäolo hTERT mRNA plasmassa /seerumissa Eturauhassyövän potilaiden kanssa kliinis ominaisuudet kasvaimia. Siksi käsillä olevan tutkimuksen tarkoituksena oli: i) tutkimus, suuressa potilaspopulaatiossa, kliinistä merkitystä hTERT plasma mRNA markkerina Eturauhassyövän ja, ii) analysoida jakelu kliinis parametrien suhteen hTERT mRNA plasman tasot PCA potilailla.

Materiaalit ja menetelmät

potilaille ja Sample Collection

sata ja viisi potilasta, jotka otettiin peräkkäin sairaalan Clínico Universitario Valencia (HCUV) sisällytettiin tutkimuksessa. Tukikelpoisuusvaatimukset olivat seuraavat: (1) potilaat, joilla on kohonnut seerumin PSA-arvot (PSA rajakohta ≥4.0 ng /ml), (2) ei ole aiemmin diagnosoitu syöpä tahansa; ja (3) ei käsittelyä PCA ennen veren keräämistä.

Kaikki näytteet analysoitiin takautuvasti ilman tietoa koehenkilöiden kliinis tila. Potilaat luokiteltiin histopatologisesti kriteerien ja luokitellaan johonkin kolmesta ryhmästä: PCa (keski-ikä ± SD: 65,8 ± 7,30 vuotta, vaihteluväli: 49-80), prostatiitti (keski-ikä ± SD: 65,9 ± 5,69 vuotta, vaihteluväli: 54- 80), ja BPH (keski-ikä ± SD: 62,4 ± 8,45 vuotta, vaihteluväli: 50-71) (taulukko 1). Potilaat PCA hoidettiin eturauhasen (26/46; 57%), brakyhoidoksi (3/46, 6%), sädehoito (13/46; 28%) ja androgeenien puute hoidon (4/46; 9%). Mediaani seuranta kesto oli 10,0 vuotta (vaihteluväli: 9,5-10,4). Biokemiallinen toistuminen kriteerit ovat samat kuin Euroopan Association of Urology oppaita; kun radikaali retropubic eturauhasen, kahden peräkkäisen PSA-arvot 0,2 ng /ml tai suurempi ja sädehoidon jälkeen, nouseva PSA 2 ng /ml yläpuolella aallonpohjan PSA [18]. Näiden erityisiä perusteita, 7 potilaalla oli biokemiallisten uusiutuminen.

kuusikymmentäkahdeksan samanikäisiin (keski-ikä ± SD: 61,0 ± 6,32 vuotta, vaihteluväli: 50-76) terveillä vapaaehtoisilla, joilla ei oireita alempien virtsateiden tai historiaa eturauhassyövän tai muunlaiset syövän toimivat vertailuryhmänä.

ääreislaskimoiden verinäytteitä saatiin potilailta (ennen transrectal ultraääni-ohjattu eturauhasen biopsia) ja terveillä vapaaehtoisilla 8 ml verta kokoelma sisältävät putket natriumsitraattia geeliä ja tiheys kaltevuus keskipitkän (Vacutainer CPT 362761; Beckton Dickinson). Veren mononukleaarisia soluja ja plasman erotettiin sentrifugoimalla mukaan valmistajan ohjeiden.

Tutkimus hyväksyi tutkimuksen eettinen komitea on HCUV, ja kaikki osallistuvat potilaat antoivat tietoon perustuvan suostumuksen ennen niiden sisällyttämistä tutkimukseen.

RNA: n eristäminen ja plasma hTERT mRNA kvantifiointi

RNA eristettiin 250 ui plasmaa DNaasi I hoidon, kuten aiemmin on kuvattu [11], [16]. cDNA-synteesi ja kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR (qPCR) on raportoitu aiemmin [16]. Lyhyesti sanottuna, puhdistettiin RNA: ta (200 ng) käänteistranskriptio sattumanvaraisia ​​heksameerejä käyttäen TaqMan Reverse Transcription reagenssien Kit (Applied Biosystems) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Viisi ui RT-reaktiota sekoitettiin 45 ui TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems), joka sisälsi 250 nM eteenpäin ja reverse-alukkeita ja 125 nM-TaqMan-koettimella. Alukkeita ja Taqman hTERT: ille ja 18S rRNA ja PCR-olosuhteita on kuvattu muualla [17]. Plasma hTERT mRNA normalisoitui plasmamolekyylejä 18S rRNA mRNA. Standardikäyrä muodostettiin käyttämällä HT-29 koolonkarsinoomasolulinja (ATCC HTB-38). Syklin kynnys (Ct) ja kukin näyte mitattiin käyttäen ABI 7700 Sequence Detection järjestelmän ja muuttuu ng HT-29 hTERT ja HT-29-18S rRNA käyttäen standardikäyriä syntyy samassa kokeessa. Suhde ng hTERT ja ng 18S rRNA edustaa normalisoitu hTERT jokaisesta näytteestä.

Preoperatiivisen seerumin PSA-arvot mitataan standardin tekniikan työskentelee HCUV (Elecsys yhteensä PSA-määritys, Roche Diagnostics) .

kliinis parametrit

Kun tulokset PSA-testi ennakoi PCA potilas koki ultraääni-ohjattu eturauhasen koepala. Tulokset kaikista koepalat tarkastelleet kokenut uro-patologien ja, jos positiivinen, potilas kysymyksessä käsiteltiin standardin noudatettu menettely urologian yksikön HCUV tapauksissa Eturauhassyövän. Kasvain ennustetekijöiden kuten Gleason, prosenttia positiivinen eturauhasen koepaloja (laskettuna useita positiivisia koepaloja jaettuna kokonaismäärä koepaloja suoritettu), hermoa invaasio ja lymphovascular invaasio määritettiin. Kliiniset lavastus suoritettiin eturauhasen (DRE), transrektaaliseen ultraääni (TRUS) ja magneettikuvaus.

tilastolliset menetelmät

Plasma hTERT mRNA-tasoja ja seerumin PSA-arvot verrattiin kliinis-parametreja Mann-Whitney U ja Kruskal-Wallisin ei-parametriset testit, koska Kolmogorov-Smirnov testi paljasti, että kumpikaan hTERT mRNA eikä seerumin PSA normaalisti jakautunut. Tarkkuus seerumin PSA ja plasma hTERT mRNA määrityksissä diagnosoinnissa PCa määritettiin Receiver Operating Characteristic (ROC), vastaava alue käyrän alla (AUC ROC) ja todennäköisyys tunnusluvut (LR). Herkkyys ja spesifisyys hTERT mRNA ja ennen leikkausta seerumin PSA laskettiin käyttäen parasta cut-off-arvo ROC käyrä, joka määräytyy korkein kohta pystyakselilla ja kauimpana vasemmalle vaaka-akselilla. Sekä plasman hTERT mRNA, seerumin PSA ja kliinis parametrit analysoitiin univariate analyysiä. Logistinen regressio suoritettiin määrittämään merkittäviä riippumattomia esikäsittely ennustajia Eturauhassyövän diagnoosia. Teho plasman hTERT mRNA ja seerumin PSA ennustajina biokemiallisten toistumisen arvioitiin yhden ja usean analyysejä. Kertoimet suhteet (syrjäisimpien alueiden) lasketaan logistinen regressio ja 95%: n luottamusväli (95% CI) on raportoitu. Kaikki laskettu p-arvot kaksisuuntaisia, ja todennäköisyys-arvot alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Plasma hTERT mRNA on hyödyllinen Noninvasiiviset biomarkkereiden PCA Diagnosis

Plasma hTERT mRNA tasot mitattiin 105 peräkkäisen potilailla, joilla on kohonnut PSA-arvot (≥4.0 ng /ml) ja 68 tervettä vapaaehtoista. Potilaan ikä, leikkausta edeltävän seerumin PSA ja plasman hTERT mRNA-tasot on esitetty taulukossa 1. Ei eroja iässä havaittu eri ryhmien (ANOVA; p = 0,350).

Eturauhassyövän seulonta käyttäen PSA ainoana indikaattorina eturauhasen biopsia osoitti, että neljäkymmentäkuusi ja 105 potilailla on diagnosoitu PCa (43,8%), 47 oli eturauhastulehdus (44,8%) ja 12 kärsi BPH (11,4%) (kuvio 1). Jakautuminen Plasman hTERT mRNA potilailla PCA, eturauhastulehdus tai BPH ja valvonta on esitetty kuviossa 2A. Plasma hTERT mRNA mediaaniarvot olivat merkittävästi korkeammat (p 0,001) joukossa PCA potilaiden (mediaani; kvartiiliväli: 1,6; 0,7-4,08) kuin kontrolliryhmässä (0,07; 0,02-+0,10), eturauhastulehdus (0,13; 0,03-0,31) ja BPH (0,03; 0,01-0,13) ryhmiä. Preoperatiivinen seerumin PSA oli huomattavasti korkeampi (p 0,001) potilailla kuin kontrollien joukossa, vaikka mitään merkittäviä eroja ei havaittu välillä PCA ryhmän ja eturauhastulehdus tai BPH ryhmiä (kuvio 2B).

Sata ja viisi peräkkäistä potilasta koholla PSA-arvot tehtiin eturauhasen koepala. Neljäkymmentä kuusi 105 potilasta (44%) diagnosoitiin PCa, ja viisikymmentäyhdeksän potilasta (56%) ei havaittu syöpää. PCa: Eturauhassyöpä BPH: eturauhasen hyvänlaatuinen liikakasvu.

Data esitetään mediaani ja kvartiilivälejä. A) kvantifiointi plasman hTERT mRNA erottelee PCa potilaiden ja terveiden yksilöiden (p 0,001). B) Vaikka PSA-tasot olivat merkittävästi korkeammat PCA potilailla kuin verrokeilla (p 0,001), määrällisesti seerumin PSA oli pysty erottamaan toisistaan ​​PCA BPH ja eturauhastulehdus potilaita. BPH = eturauhasen hyvänlaatuinen liikakasvu.

Kaikki potilaat ja kontrollinäytteiden osoittivat 18S rRNA vahvistus osoittaa eheyden eristetyn RNA (tuloksia ei ole esitetty).

Plasma hTERT mRNA Näyttää Korkeampi diagnostinen tarkkuus kuin Seerumin PSA PCA Diagnoosi

ROC käyrät ja paras cut-off-arvon määrittämiseen käytettiin herkkyyttä, spesifisyyttä, positiivinen ennustearvo (PPV) ja negatiivinen ennustearvo (NPV) kunkin testin. Herkkyys ja plasman hTERT mRNA määrityksessä suhteen havaitsemiseksi PCa olivat 91% ja 85%, vastaavasti (paras cut-off-arvo 0,45), (paras cut-off-arvo 0,45, AUC on ROC-käyrä 0,932 ± 0,027) , kun taas PSA-määritys osoitti herkkyys 83% ja spesifisyys 47% (paras cut-off-arvo 7,2 ng /ml, (paras raja-arvo 7,2 ng /ml, AUC ROC on 0,651 ± 0,054 (kuva 3 ). pareittain vertailu hTERT mRNA ja PSA ROC käyrät vahvistaneet merkittäviä eroja (p 0,001) (kuva 3). PPV ja NPV olivat korkeampia hTERT mRNA määrityksessä kuin PSA määrityksessä. Positiiviset ja negatiiviset LR olivat 5,99 ja 0,10, vastaavasti, että hTERT testiä ja 1,57 ja 0,37, vastaavasti, että PSA-määritystä (taulukko 2). edelleen testata diagnostinen tarkkuus molemmat testit PCA diagnoosi, päätimme korkea herkkyys (98%) sekä testejä ja laski spesifisyys ja niihin liittyvät todennäköisyyden suhteen. tässä herkkyys, plasman hTERT testi osoitti suurempi spesifisyys (78% vs. 10%), ja suurempi positiivinen todennäköisyys suhde (4,44 vs. 1,10) kuin PSA-testi.

ROC käyrät osoittavat että plasma hTERT mRNA, mutta ei seerumin PSA, erottelee PCa potilaiden ja terveiden yksilöiden tai potilaalla on eturauhastulehdus tai BPH. Plasma hTERT mRNA osoittaa suuremman herkkyyden (85% vs. 83%), spesifisyys (90% vs. 47%), PPV (83% vs. 56%), NPV (92% vs. 77%) ja AUC ROC (0,932 vs 0,651) kuin PSA suhteen PCa diagnoosin. Parittainen vertailu hTERT mRNA ja PSA ROC käyrät osoittivat merkittäviä eroja (p 0,001).

Yhdistelmä plasman hTERT mRNA ja seerumin PSA: n diagnoosi PCA johti herkkyys 98%, spesifisyys 42%, PPV 57%, joka on NPV 96%, LR + 1,69 ja lR- 0,05 (taulukko 2).

Mielenkiintoista, 5 47 eturauhastulehdus potilaita, jotka on kehitetty PCa viiden vuoden aikana osoitti korkeampi keskimääräinen hTERT mRNA arvot diagnoosi kuin muualla prostatitis ryhmän (1,08 ± 0,80 vs. 0,45 ± 1,00), vaikka erot eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (p = 0,26), mikä todennäköisesti johtuu vähäisestä määrästä tapauksista analysoidaan.

plasma hTERT mRNA liittyy huono prognoosi kasvain kliinis parametrit

univariate analyysi osoitti, että plasman hTERT mRNA tasot olivat merkitsevästi yhteydessä huonoon ennusteeseen kasvain kliinis parametreja kuten Gleason (p = 0,01), prosenttia koepala ydin positiivisuus (p = 0,002), hermoa invaasio (p = 0,002), lymphovascular invaasio (p 0,001) ja kliinisen vaiheen (p = 0,004). Tilastollisesti merkittävää assosioitunut preoperative seerumin PSA-tasoihin ja Gleason (p = 0,10), prosenttia koepala ydin positiivisuus (p = 0,34), hermoa invaasio (p = 0,35) tai verisuonten /lymfaattinen invaasiota (p = 0,15). Kuitenkin merkittävästi korkeampi PSA-arvot havaittiin potilailla edenneet kliiniseen vaiheeseen (p 0,01) (taulukko 3).

Taulukossa 4 esitetään tulokset regressioanalyysimme esikäsittelyn ennustavat PCa: ikä (p = 0,04) ja plasman hTERT mRNA (p 0,0001) olivat merkittäviä riippumattomia ennustajia PCA taas seerumin PSA diagnoosin (p = 0,94), DRE (p = 0,43) ja TRUS (p = 0,85) eivät olleet itsenäisiä ennustajia .

Plasma hTERT mRNA on ennustetekijä of Biochemical uusiutuminen

Plasma hTERT mRNA osoitettiin olevan merkittävä tekijä biokemiallisia toistumisen. Plasman hTERT mRNA cut-off-arvo optimointiin herkkyyttä ja spesifisyyttä ennustamisessa biokemiallisten uusiutuminen oli 3,15. Tällä raja-arvon, herkkyys ja tarkkuus olivat 71,4% ja 91,8%, tässä järjestyksessä ja AUC ROC-käyrän alla oli 0,932 ± 0,02 (kuva 4). Kuvio 5A esittää Kaplan-Meier -käyrät kaksi ryhmää määritelty hTERT cut-off-arvo (3,15). Uusiutuminen-vapaa elinaika oli merkitsevästi korkeampi (p = 0,004; Chi-square test) potilailla, joilla hTERT mRNA 3,15 (keskiarvo ± SD; 10,44 ± 0,26 vuosi; 95% CI: 9,92-10,96) kuin potilailla, joilla arvojen ≥3.15 (keskiarvo ± SD; 8,28 ± 0,60 vuosi; 95% CI: 7,10-9,41). Toisaalta, ennen leikkausta seerumin PSA ei ole ennustaja biokemiallisten toistumisen. Optimaalinen cut-off-arvon ennustamiseksi biokemiallisten uusiutuminen oli 14,5. Herkkyys ja spesifisyys olivat 100% ja 87,7%, tässä järjestyksessä ja AUC ROC-käyrän alla oli 0,658 ± 0,05 (kuva 4). Kaplan-Meier-käyrät kaksi ryhmää määritelty PSA cut-off-arvo on esitetty kuviossa 5B. Mitään eroja uusiutumista elinaika (p = 0,38) havaittiin potilailla, joilla PSA 14,5 (keskiarvo ± SD; 10,00 ± 0,34 vuosi; 95% CI: 9,34-10,68) ja potilailla, joiden PSA-arvot ≥14.5 (keskiarvo ± SD ; 9,09 ± 0,68 vuotta; 95% CI: 7,77-10,42). Parittainen vertailu ROC käyrät osoittivat merkittäviä eroja (p 0,001) (kuvio 4).

ROC käyrät osoittavat, että plasman hTERT mRNA, mutta ei seerumin PSA, on merkittävä ennustaja biokemiallisten toistumisen. Plasma hTERT mRNA arvo on suurempi spesifisyys (91,8% vs. 87,7%) ja AUC ROC-käyrän (0,932 vs 0,658) kuin PSA suhteen biokemiallisten uusiutuminen. PSA määritys osoittaa suurempi herkkyys (71,4% vs. 100%) kuin hTERT mRNA ennustettaessa biokemiallisten uusiutuminen. Parittainen vertailu hTERT mRNA ja PSA ROC käyrät osoittivat merkittäviä eroja (p 0,001).

Kaplan-Meier käyrät osoittavat, että on olemassa huomattavia eroja uusiutumista elinaika korkean ja matalan hTERT ryhmät (A ), mutta ei korkean ja matalan seerumin PSA ryhmät (B).

ennustavat biokemiallisten toistumisen analysoitiin COX regressioanalyysi (taulukko 5). Monimuuttuja-analyysi osoitti, että hTERT mRNA (OR: 1,55; 95% CI: ,99-+2,43; p = 0,04) ja vaihe (OR: 0,13; 95% CI: 0,01-1,30; p = 0,08) liittyvät merkittävästi biokemiallisten toistumisen, kun taas mitkään muut analysoitiin tekijät osoittivat merkittävää yhteyttä biokemiallisten uusiutuminen.

keskustelu

Seerumin PSA on käytetty laajasti viime vuosikymmenen diagnosointiin ja seurantaan PCa. Suurimmat ongelmat tällä menetelmällä on se, ettei syövän spesifisyys ja alhainen ennustearvo PSA, mikä johtaa tarpeettoman määrän eturauhasen koepaloja ja /tai laiminlyönti diagnosoida taudin miesten PSA-pitoisuudet olivat alle raja-arvon. Vaikka korkea PSA-pitoisuudet liittyvät usein aggressiivisempi kasvaimia, PSA ei aina korreloi biologista käyttäytymistä taudin, joka johtaa ylihoito ja sen seurauksia (lisääntynyt kustannus, sivuvaikutuksia ja potilaan ahdistusta). Haasteena Lääkäreille on erottaa nämä erilaiset olosuhteet ja välttää perustaen päätöksensä pelkän PSA mittauksiin. Tämän seurauksena uusia diagnostisia työkaluja ei tarvita havaitsemiseen PCa mahdollisimman aikaisin ja mahdollisimman tarkasti, jotta vähentää koepaloja taas onnistuneesti havaittaisiin mahdollisimman monissa tapauksissa Eturauhassyövän kuin mahdollista.

Tässä tutkimuksessa 105 potilasta PSA-arvot yli 4,0 ng /ml tehtiin eturauhasen biopsia poissulkemiseksi eturauhassyövän. Vain 46 näistä potilaista (44%) oli lopulta diagnosoitiin PCA taas 47 (45%) ja 12 (11%) diagnosoitiin eturauhastulehdus ja BPH, vastaavasti. Nämä tulokset osoittavat, että PCa seulonta perustuu PSA ainoana indikaattorina eturauhasen koepala ei spesifisesti ja johtaa suuri määrä (59/105; 56%) tarpeettomat toimenpiteet. Vaikka erilaisia ​​strategioita on kehitetty yrityksenä lisätä spesifisyyden PSA, mukaan lukien mittaus- PSA nopeuden, tasot vapaa /koko PSA-suhde, ja käyttö raja-arvot ominaisia ​​potilaan ikä ja etninen ryhmä, niiden kliininen luotettavuus ei ole todettu [2], [19]. Ryhmämme on aiemmin osoittanut, pienellä määrällä potilaita, että määrällisesti plasman hTERT mRNA on huomattavasti herkkä ja spesifinen menetelmä tunnistaa PCa ja että kun käytetään yhdessä seerumin PSA, on tehokas tapa Eturauhassyövän diagnoosia [16 ]. Lisäksi tuoreessa raportissa olemme osoittaneet, että plasman hTERT mRNA erottelee kliinisesti paikallinen ja paikallisesti edennyt sairaus ja on ennustaja uusiutumisen PCa potilailla [20]. Olemme nyt arvioinut tarkkuuden plasma hTERT mRNA diagnostisena välineenä PCA suurempi määrä potilaita ja ovat tutkineet sen yhdessä kliinis ominaisuuksia kasvaimia. Olemme myös tutkineet hyödyllisyys plasman hTERT mRNA ennusteen tekijä biokemiallisten toistumisen. Tulokset vahvistavat ja laajentavat niitä edellisen raportin, koska ne osoittavat, että plasman hTERT mRNA on ei-invasiivisia tuumorimarkkeri jota voidaan käyttää PCA diagnoosin, osoittaa suurempi herkkyys (85% vs. 83%), spesifisyys (90% vs . 47%), PPV (83% vs. 56%), NPV (92% vs. 77%) ja LR-suhteet kuin PSA-määrityksessä. mikä osoittaa, että plasman hTERT mRNA määritys on korkea erottelukyky ja siten hyvät mahdollisuudet käyttökelpoisia diagnostinen testi PCA diagnoosi. Jotkut lääketieteelliset järjestöt suosittelevat vähentää PSA rajakohta 4,0 ng /ml 2,5 ng /ml lisäämiseksi sen herkkyyttä ja tunnistaa siten enemmän syöpiä varhaisemmassa vaiheessa. Tutkimaan edelleen diagnostinen tarkkuus PSA määrityksen, valitsimme kaksi PSA-arvot hetkellä kliinisessä käytössä (PSA ≥4.0 ng /ml ja ≥2.5 ng /ml) ja laskea niiden herkkyys, spesifisyys, PPV ja NPV sekä positiiviset ja negatiiviset LR . Olemme huomanneet, kuinka vähentää PSA rajakohta lisää herkkyyttä, mutta vähentää spesifisyys ja PPV. Näissä cut-off pistettä PSA, plasman hTERT määritys osoittaa paljon suurempi spesifisyys (85% vs. 8% ja 5%), PPV (83% vs. 47% ja 46%) ja positiivinen LR (5,99 vs. 1,09 ja 1,05), mutta samanlaisia ​​herkkyys (91% vs. 100%), NPV (92% vs. 100%) ja negatiivinen LR (0,10 vs 0,00) (taulukko 3). Yhdistelmä plasma hTERT mRNA ja PSA ei paranna diagnostista tarkkuutta. Rajallinen herkkyyden lisääntyminen (91% for hTERT vs. 98% hTERT /PSA yhdistelmä) johtaa huomattavan vähentämisen spesifisyys (85% vs. 42%), PPV (83% vs. 57%) ja LR + (5,99 vs. 1,69).

Monimuuttuja-analyysi tunnistaa ikä ja plasma hTERT mRNA diagnoosin merkittävinä riippumattomia ennustajia PCA taas seerumin PSA diagnoosin, DRE ja TRUS eivät ennustajia tässä suhteessa.

yhdessä nämä tulokset osoittavat, että plasman hTERT mRNA määritys on korkea erottelukyky ja on siksi potentiaalisesti käyttökelpoisia diagnosoimiseksi PCa.

Mielenkiintoista, 5 47 eturauhastulehdus potilaita että kehittyi PCa viiden vuoden ajanjakso osoitti korkeampi keskimääräinen hTERT mRNA arvoja kuin muualla ryhmänsä. Tämä havainto antaa lisää tukea ajatukselle, että plasman hTERT mRNA on vaikutuksia seurantaan ja minimaalinen jäljellä taudin havaitsemisen, vaikka potilaiden määrä tutkimuksessamme oli liian pieni tehdä lopullisia johtopäätöksiä. Muut kirjoittajat ovat julkaisseet samanlaisia ​​tuloksia, raportoivat, että telomeraasin RNA voisi olla hyötyä diagnosoinnissa kehittyneitä Eturauhassyövän ja seurataan potilaan havaitsemiseksi minimaalinen jäljellä tauti [15]. On syytä huomauttaa, että hTERT-RNA on arvioitu plasmanäytteistä, mikä transkriptio hTERT muista kuin kasvain lähteistä, kuten aktivoitujen lymfosyyttien, ei voitu sulkea pois. Lisäksi plasman läsnä ollessa hTERT mRNA yläpuolella raja-tason voivat osoittaa kiertävien tuumorisolujen, mikä tukee ajatusta, että kvantitatiivinen analyysi vapaasti kiertävän RNA voisi olla hyötyä diagnosoinnissa ja seurannassa PCa potilaat ja voi olla vaikutuksia minimaalinen jäljellä taudin havaitsemiseen.

mekanismi, jolla solu-vapaan, verenkierrossa kiertävän RNA vapautuu verenkiertoon on tuntematon, sillä on lähde verenkierrossa RNA: ta. Hematopoieettinen alkuperä kiertävän RNA on ehdotettu, vaikka korrelaatio mutaatiot, mikrosatelliitti muutoksia, promoottori metylaation pariksi kasvain ja plasman /seerumin näytteet osoittavat, että kiertävä RNA voi olla peräisin kasvainkudoksen [21]. Korkeampi solutonta kiertävän RNA-tasot on havaittu potilailla, joilla on pahanlaatuisia leesioita kuin potilailla, joilla ei kasvaimia. Kuitenkin korkea verenkierrossa RNA ei ole syöpää erityisiä ja kohonneeseen on havaittu potilailla, joilla on tulehduksellinen prosesseja ja hyvänlaatuisia vaurioita. Viimeaikaiset raportit ovat korreloi tasot useiden kasvainmarkkereiden plasmassa /seerumissa kliiniset ja patologiset ominaisuudet taudin viittaa siihen, että solutonta kiertävä RNA voi säätää biomarkkereita syövän diagnosointiin, seurantaan potilaiden leikkauksen jälkeen ja hoidon seurantaa tehon [22 ].

Yksi tärkeimmistä havainnoista tämän tutkimuksen on yhdistyksen välillä korkea plasman hTERT mRNA arvot ja kliinis parametrien kasvaimia. Kirjoittajien tietämystä, tämä on ensimmäinen raportti osoittaa, että plasman hTERT mRNA merkitsevästi yhteydessä huonoon ennusteeseen PCa kasvainten ominaisuuksiin, kuten Gleason (p = 0,01), kasvain vaiheessa (p = 0,004), ja verisuonten (p 0,001 ) ja hermoa invaasio (p 0,001).

Vaikka potilaiden määrä osoittaa biokemiallisten toistumisen on rajoitettu (vain seitsemän potilasta), tuloksemme osoittavat myös, että plasman hTERT mRNA on merkittävä ennustetekijä toistumisen. Kaplan-Meier eloonjäämiskäyristä vahvisti merkittäviä eroja ryhmien välillä niin, että potilailla, joilla plasman hTERT mRNA-tasoja yli raja-arvo osoitti merkitsevästi vähentynyt uusiutumista elinaika kuin potilailla, joiden pitoisuudet olivat alle raja-arvon. Toisaalta, seerumin PSA ei ole ennustaja biokemiallisten uusiutuminen ja mitään merkittäviä eroja uusiutumista vapaa aika havaittiin potilaiden välillä ylä- ja alapuolella cut-off-arvo. Monimuuttuja-analyysi vahvisti, että plasman hTERT mRNA on (yhdessä vaiheessa) riippumaton ennustaja biokemiallisten toistuminen taas yksikään muista analysoitu tekijöiden (kuten PSA) osoitti merkittävää yhteyttä biokemiallisten uusiutuminen.

Monet kirjoittajat ovat raportoineet samanlaisia ​​havaintoja muiden syöpien, mikä osoittaa, että plasman hTERT mRNA voi olla prognostista vaikutuksia [12] – [13], [23] – [24]. Miura, et ai. mitattuna hTERT mRNA ja epidermaalisen kasvutekijän reseptori (EGFR) mRNA seerumissa keuhkosyöpäpotilaita ja osoitti, että hTERT mRNA itsenäisesti liittyy kasvaimen koko, kasvain määrä, läsnäolo etäpesäkkeitä, toistuminen ja tupakointi. EGFR mRNA korreloi kehittynyt kliininen vaiheet ja molemmat markkerit merkittävästi vähentynyt leikkauksen jälkeen [12]. Samat tutkijat osoittivat, että seerumin hTERT mRNA on käyttökelpoinen diagnoosissa Gynekologiasairauksien syöpiä. Nämä potilaat osoittavat korkeampia seerumin hTERT mRNA kuin potilailla, joilla on hyvänlaatuinen sairauksia ja terveillä henkilöillä. Seerumin hTERT mRNA itsenäisesti korreloi kliiniseen vaiheeseen, CA125 ja histologisia parametreja munasarjasyöpä [22]. Terrin et ai. osoittivat, että plasman hTERT mRNA on käyttökelpoinen merkkiaine havaitsemiseen ja seurantaan kolorektaalikarsinooman [17].

Lisäksi telomeraasiaktiivisuutta, ihmisen syöpäsoluja käyttää myös telomeraasia riippumaton mekanismi kutsutaan vaihtoehtoisia pidentyminen telomeres (ALT). Vaikka ALT mekanismi on melko yleinen sarkoomat ja astrosytoomissa, se ei ole koskaan raportoitu PCA. Heaphy et ai. ovat arvioineet 1,176 PCa kudokset (mukaan lukien sekä adenokarsinoomia ja pienisoluisen karsinoomat) ja ei löytänyt yhden ALT-positiivinen kasvain [25] osoittaa, että ALT ei ole käytetty PCA solut säilyttää telomeres. Näin ollen plasman hTERT mRNA testiin tunnistaa kaikki PCa tapauksissa.

Useita uusia biomarkkereita läsnä biologisissa nesteissä niitä arvioidaan parhaillaan määrittää niiden potentiaalia aiemmin havaita ja ennusteen PCa. Altimari et ai. osoittivat, että kiertävä plasmaa hTERT DNA on suurempi potilailla PCA kuin verrokeilla ja korreloi kasvaimen vaiheessa. Kirjoittajat päättelevät, että plasmaa hTERT DNA on lupaava biomarkkeri varhaisen diagnoosin ja seurannan Eturauhassyövän [26].