Krooninen sairaus

tiivistelmä

Ruokatorven syöpä on edelleen kuudenneksi yleisin syy syövän liittyvän kuoleman ja kahdeksas yleisin syöpä maailmassa. Geneettiset tekijät, kuten yhden emäksen monimuotoisuus (SNP), voivat edistää syövän synnyn ruokatorven syöpään. Täällä teimme sairaaloiden tapauskontrollitutkimuksessa arvioida geneettinen alttius toiminnallisten SNP kehittämiseen ruokatorven syöpään. Kaikkiaan 629 ruokatorven okasolusyöpä (ESCC) tapaukset ja 686 valvonta otettiin tätä tutkimusta varten.

OPG

rs3102735 T C, rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C ja rs2277438 A G määritettiin ligaatiolla detektioreaktiossa menetelmällä. Meidän havainnot ehdotti, että

RANK

rs1805034 T C liittyy alttiuteen ESCC, mikä on selvempää mies- ja vanhin (≥63) potilasta. Tutkimuksemme tarjoaa ensimmäiset todisteet että toiminnallinen polymorfismit

RANK

rs1805034 T C voi olla indikaattori yksilöllinen herkkyytensä ESCC. Kuitenkin vielä suurempi tutkimuksia eri etnisten väestöryhmien perusteltua tarkistaa johtopäätöksemme.

Citation: Yin J, Wang L, Tang W, Wang X, Lv L, Shao A, et al. (2014)

RANK

rs1805034 T C polymorfismi liittyy herkkyys ruokatorven syöpä kiinalaisessa väestöstä. PLoS ONE 9 (7): e101705. doi: 10,1371 /journal.pone.0101705

Editor: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, Kiina

vastaanotettu: 15 tammikuu 2014; Hyväksytty: 11 Kesäkuu 2014; Julkaistu: 14 heinäkuu 2014

Copyright: © 2014 Yin et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tuettiin osittain National Natural Science Foundation of China (81370001, 81101889, 81000028, 81300037), Jiangsu Natural Science Foundation (BK2010333, BK2011481), The ”333” Elitist koulutusohjelma Jiangsun (BRA2013135). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

huolimatta viimeaikaisista huomattavasti lääketieteen kehittymisen, ruokatorven syöpä on edelleen tulenkestävä taudin korkea sairastuvuus ja kuolleisuus. Pohjimmiltaan ruokatorven syöpä on 6

th johtava syy syövän liittyvän kuolleisuuden ja 8

th yleisin syöpä maailmassa [1]. On yli 450000 potilaiden diagnosoitu ruokatorven syöpä maailmassa ja esiintyvyys kasvaa edelleen nopeasti. Samaan aikaan sen hätkähdyttävä yleistä 5 vuoden pysyvyys vaihtelee 15~25% [2]. Kiinassa enemmän silmiinpistävän, ruokatorven syöpä riveissä 5

th yleisin diagnosoitu syöpä ja 4

th suurin syy syöpään liittyvät kuolleisuutta [3]. Ruokatorven okasolusyöpä (ESCC) on vallitseva histologinen tyyppi ruokatorven syöpä [1]. Vaikka monialainen terapeuttinen strategia on suositeltu, ennuste on edelleen huono. Tupakka [4], [5], alkoholin kulutus [4], [6], alhainen sosioekonominen asema, huono suuhygienia ja ravitsemuksellisia puutteita [2], [7] – [9] on todettu riskitekijöitä ruokatorven syöpä . Silti vain osa yksilöiden alttiina näiden riskitekijöiden lopulta kehittää ruokatorven syöpä, osoittaa keskeinen rooli geneettisten tekijöiden, kuten yhden emäksen monimuotoisuus (SNP), että ruokatorven syövän synnyn.

Äskettäin osteoprotegerin ( OPG), sen sitova proteiini-reseptori aktivaattori NF-KB (RANK) ja RANK-ligandin (RANKL) ovat sekaantuneet kanssa patogeneesin rintasyövän [10]. OPG tunnistettiin alun perin sikiön rotan suolen cDNA-kirjastosta [11], joka on ainutlaatuinen, että se on olemassa vain niin erittyy molekyylin toisin kuin muiden kalvoon sitoutuneiden solun pinnan jäsenten tuumorinekroositekijän reseptorin (TNF-R) perheeseen. RANKL on tä sitova proteiini (myös nimeltään OPG ligandi, OPGLn) [12], [13], kun taas RANK muodostaa solun pinnan reseptoria, joka vastauksia OPGLn. Lukuisissa jyrsijöiden kasvain, RANKL signaali lisättävä erilaisia ​​mekanismeja [14]. OPG neutraloi RANKL, joka johtaa alentuneeseen RANKL-RANK vuorovaikutus [12]. RANKL ilmentyminen varmistettiin eri kasvaintyypeissä ja tulehdussolujen, jotka liittyvät kasvaimen [15] – [17]. Korkeus strooman RANKL on havaittu paikallisella sivustoja luun etäpesäke tai multippelimyeloomaa [18], [19], mikä parantaa osteoklastivaikutusta ja luun tuhoutumisen. Kokeellisissa malleissa, RANKL-inhibiittorit vähensi kasvainten aiheuttamaa osteolyysiä eri syöpätyyppien [14], vähentää luun tuhoutumista, luuston kasvaimen etenemistä, samoin kuin tuumorimassa [17], [20], [21]. Lisäksi RANKL-RANK reitti voi edistää ensisijaisen kasvaimen kehittymisen ja etäpesäkkeiden riippumatta sen vaikutukset tuumorin liittyviä osteolyysiä. Säätelevät tekijät, kuten prolaktiini ja progesteronin, RANKL voisi ajaa ensisijainen mitogeenisesta vaste maitorauhasen epiteelin ja laajentamiseen maitorauhasen kantasolujen kautta RANK aktivaation [22] – [24], mikä voi siksi aiheuttaa rintarauhasen syöpää tarjoamalla entistä transformaatio-altis kohde allas. RANKL voi säädellä spontaaneja nisän kasvaimen muodostumisen ja etäpesäkkeiden vetämänä voimakas onkogeeni

Neu

(

erbB2

). RANKL saarto tehokkaasti vaimennettu muodostumista nisäkasvainten ja keuhkojen etäpesäkkeiden MMTV-Neu siirtogeenisen hiiren mallia [25], [26]. Mielenkiintoista, OPG voi toimia positiivisena säätelijänä pienten suonten muodostumisen ja saattavat edistää uudissuonittuminen [27], joka on tärkeä syövän etenemiseen. OPG yliekspressio rintasyöpä solujen parantaa potilaalle tehdä ja luun kasvaimen kasvua [28]. Vuonna otetaan huomioon kaikki nämä havainnot, RANKL /RANK /OPG signalointireitille on noussut lupaavaksi terapeuttinen tavoite syöpään. Denosumabia, monoklonaalinen vasta-aine vastaan ​​RANKL, on hyväksytty postmenopausaalisen osteoporoosin ja luumetastaasipotilailla rintasyövässä [29].

Genetic vaihtelut geeneissä, jotka koodaavat RANK, RANKL ja OPG havaittiin vaikuttavan nivelreuma [30], Pagetin tauti [31], lonkan osteoporoottisten murtumien [32]. Vielä tärkeämpää on, että Kaukasian väestön merkittävän yhdistys SNP rs3102735 (

OPG

) kanssa alttius kehittää rintasyöpä on raportoitu [10]. Toiminnallinen merkitys RANK /RANKL /OPG-signalointireitin ja pilottitutkimuksessa rintasyöpään ovat johtaneet meidät tutkimaan assosiaatio ruokatorven syöpä ja SNP geenien

RANK

,

RANKL

ja

OPG

. Sairaalassa perustuva tapauskontrollitutkimuksessa teimme genotyypitys analysoi viiden miRNA SNP 629 ESCC tapauksissa ja 686 kontrollit Kiinan väestön.

Methods

Ethics Statement

Tämä sairaala-pohjainen tapauskontrollitutkimuksessa hyväksyi Review Board of Jiangsu University (Zhenjiang, Kiina). Kaikki koehenkilöt edellyttäen kirjallinen lupa olla mukana tutkimuksessa. Olemme noudattaneet Maailman lääkäriliiton Helsingin julistuksen eettisten tutkimuksen suorittamisessa ihmiseen kohdistuvan ja /tai eläimiä.

Tutkimus väestön

Yhteensä 1315 osallistujaa koostuu 629 ruokatorven syöpäpotilaille ja 686 ei-syöpä valvonta taajuus-sovitettu tapauksiin iän suhteen (± 5 vuotta) ja sukupuoli otettiin tässä tutkimuksessa (taulukko 1). Kaikki potilaat ja verrokit peräkkäin rekrytoitiin Affiliated Kansan sairaalan Jiangsu yliopiston ja Affiliated sairaala Jiangsu University (Zhenjiang, Kiina) välillä lokakuussa 2008 ja joulukuussa 2010. Kaikki tapaukset ruokatorven syöpään diagnosoitiin ESCC histologisesti. Potilaat, joilla oli syöpä historia /metastasized syöpää tai olivat saaneet kemoterapiaa /sädehoitoa ei otettu nykyisen tutkimuksen.

Kullekin koehenkilölle henkilökohtaisesti kyseenalaiseksi kokeneiden haastattelijat kyselylomakkeen avulla saada tietoa väestötietoja (esim ikä, sukupuoli) ja siihen liittyvät riskitekijät (kuten tupakoinnin ja alkoholin kulutus). Haastattelun jälkeen, 2 ml näytettä laskimoverta kerättiin kustakin aiheesta. ”Tupakointi” alaryhmä mukana henkilöitä, jotka savustettu yhden savukkeen päivässä 1 vuoden ajan. Koehenkilöt, jotka kulutetaan ≥3 alkoholijuomia viikossa 6 kuukautta jaettiin edelleen ”alkoholi juovat” -luokkaan.

Genomisen DNA: n eristämiseksi, SNP valinta ja genotyypin

Perimän DNA eristettiin ääreisverenkierron käyttäen QIAamp DNA Veri Mini Kit (Qiagen, Berliini, Saksa) kuten on raportoitu aiemmin [33]. Näyte-DNA monistettiin PCR: llä mukaan valmistajan protokollaa. Näytteet genotyyppi käyttäen ligaa- detektioreaktiossa (LDR) menetelmää [34] (teknistä tukea Biowing Applied Biotechnology ™, Shanghai, Kiina). Analyysit toistettiin 160 otantanäytteet (12,17%) korkea DNA laadun laadunvalvontaan.

TILASTOANALYYSI

Variations demografisten ominaisuuksien, valittujen muuttujien ja genotyypit

OPG

rs3102735 T C, rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C ja rs2277438 A G varianttien välillä tapausten ja kontrollien arvioitiin käyttämällä

χ

2 testiä. Liitot välinen viiden SNP ja riski ESCC arvioitiin laskemalla syrjäisimpien alueiden ja niiden 95% CI logistisen regressiomallin analyysit raakaöljyn syrjäisimmille alueille ja oikaistun syrjäisimpien säädettäessä iän, sukupuolen, tupakoinnin ja alkoholin juomisen tila. Hardyn-Weinberg tasapaino (HWE) testattiin hyvyyttä-of-fit

χ

2 testiä verrata havaittuun genotyyppi taajuudet odotettu niitä joukossa verrokkien. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC).

Tulokset

Ominaisuudet tutkimuspopulaation

Ominaisuudet tapausten ja kontrollien sisältyvät tutkimuksen on koottu taulukkoon 1. tapaukset ja valvonta on asianmukaisesti sovitettu iän ja sukupuolen kuin arvioinut

χ

2 testiä. Erityisesti merkittävä ero olemassa sekä tupakoinnin ja alkoholin juominen tilan välillä ESCC potilaiden ja säätimet (

p

0,001).

Ensisijainen tieto viisi genotyyppi SNP on esitetty taulukossa 2. kaikissa 1315 näytteissä, onnistumisprosentti genotyypityksen oli 95,13%, 96,35%, 96,43%, 96,43% ja 96,81% osalta

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C ja

RANKL

rs2277438 A G, vastaavasti. Konkordanssi luokallejääminen analyysien saavutti 100%. Mitä Minor alleelifrekvensseiltään (MMM), ei ollut merkitsevää eroa meidän valvontaa ja tietokanta kiinalaisilla kaikkien viiden SNP. Havaittu genotyyppi taajuudet

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T G polymorfismit tarkastukset olivat HWE (

p

= 0,191, 0,371, 0,531, 0,488 ja 0,700, vastaavasti) (taulukko 2).

assosiaatioiden

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C,

RANKL

rs2277438 A G polymorfismit ja riski ESCC

taulukossa 3 on yhteenveto genotyyppijakauman kaikkien viiden SNP polymorfismit tapauksissa ja valvontaa. Vuonna yhden lokuksen analyysien genotyyppi taajuudet

RANK

rs1805034 T C oli 45,9% (TT), 42,9% (TC) ja 11,2% (CC) jos potilaalla ja 50,5% (TT), 41,8% (TC) ja 7,7% (CC) on verrokeilla. Vuonna väistyvä mallissa, kun

RANK

rs1805034 TT /TC genotyypit käytettiin vertailuryhmään, CC homotsygoottinen genotyyppi liittyi merkitsevästi lisääntynyt riski ESCC (CC vs. TT /TC: säätää OR = 1,52, 95% CI = 1,03-2,24,

p

= 0,036). Kun

RANK

rs1805034 TT homozygoottisia genotyyppi käytettiin vertailuryhmään, TC genotyyppi ei liittynyt vaaraa ESCC (TC vs. TT: säätää OR = 1,16, 95% CI = 1,03-2,24,

p

= 0,231), mutta CC-genotyyppi liittyy riski ECSS (CC vs. TT: säätää OR = 1,62, 95% CI = 1,08-2,44,

p

= 0,019 ). Vuonna hallitseva mallissa

RANK

rs1805034 CC variantti liittyi riski ESCC verrattuna TT genotyyppi (oikaistu OR = 1,62, 95% CI = 1,08-2,44,

p

= 0,019).

No association havaittu joukossa

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANKL

rs9533156 T C,

RANKL

rs2277438 A G polymorfismien ja riski ECSS (taulukko 3).

ositus analyysit

RANK

rs1805034 T C genotyypin ja riski ESCC

vaikutusten arvioimiseksi

RANK

rs1805034 T C genotyypin ESCC riskin mukaan eri ikä, sukupuoli, tupakointi ja alkoholin kulutus; suoritimme ositus analyysit (taulukko 4). Merkitsevästi lisääntynyt riski ESCC liittyvä

RANK

rs1805034 T C polymorfismin näkyi keskuudessa miehillä (CC vs. TT: säätää OR = 1,89, 95% CI = 1,16-3,08,

p

= 0,011) (TC /CC vs. TT, säätää tai = 1,38, 95% CI = 1,05-1,81,

p

= 0,022) (CC vs. TT /TC, säätää tai = 1,68, 95 % CI = 1,05-2,69,

p

= 0,031). Samoin vanhin potilaat (≥63-vuotiaat),

RANK

rs1805034 T C polymorfismi oli myös liittyi merkitsevästi suurentunut ESCC (CC vs. TT, säätää tai = 1,84, 95% CI = 1,02 -3,31,

p

= 0,041) (taulukko 4).

keskustelu

tässä sairaalan johdolla tapauskontrollitutkimuksessa of ESCC, tutkimme yhdistys on

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C ja

RANKL

rs2277438 A G polymorfismien kanssa riski ESCC kiinalaisessa väestöstä. Meidän monen muuttujan logistista analyysit osoittivat, että

RANK

rs1805034 T C genotyyppi on suurentunut ESCC. Merkittävää yhteyttä suurentunut ESCC havaittiin keskuudessa miespotilaita ja vanhimman potilaat (≥63-vuotiaat). Tietääksemme tämä on ensimmäinen tutkimus osoittaa, Merkitsevä yhteys

RANK

rs1805034 T C genotyypin kanssa alttiutta ESCC.

OPG oli alun perin peräisin expressed sequence tag on rotan sikiön suolen cDNA-kirjastosta, joka koodaa 401 aminohapon polypeptidiä, [11]. Myöhemmin fysiologinen rooli OPG ylläpidossa normaali luumassa oli korostetusti useissa tutkimuksissa [11], [35], [36]. Myöhemmin löydös hiiren myelomonocytic solulinjassa 32D johti tunnistamiseen tä sitova proteiini tai OPGLn, joka on identtinen sekvenssi kuin RANKL ja edelleen sekaantunut kanssa osteoklastien kehitys [12]. Suora sekvensointi ihmisen luuytimestä peräisin myeloidinen dendriittisolujen cDNA-kirjastosta tunnistettiin RANK uutena TNFR-homologin [13]. Sen jälkeen, RANKL tunnistettiin hiiren tymoomasolulinja EL40.5 [13] sekä T-solujen [37]. RANKL olemassa homotrimeerinä ja indusoi reseptorin klustereiden sovitettaessa RANK solun pinnalla, voi siten aiheuttaa reseptorin klusterointi. Aktivointi tapahtumia solussa aloitetaan kautta TNFR-liittyvä tekijät seuraavat riittävä RANK klusterointi. Geneettiset variantit OPG lokuksessa on aikaisemmin liitetty kanssa osteoporotic murtuma [38], luun aineenvaihdunta [39], luuntiheys [40], osteonekroosi [41], diabeettisen neuroarthropathy [42] sekä selkärankareuman [43]. Muutokset on

RANK

lokuksen ja /tai toiminnallisesti liittyvien geenien, kuten

RANKL

, on myös raportoitu liittyvän nivelreumaan [30], aortan kalkkeutumista [44] Luun mineraalitiheys tiheys [39] ja Pagetin tauti [31]. Viime aikoina kehittyvien todisteet on ilmoittanut yhdistyksen välillä

OPG Twitter /

RANK Twitter /

RANKL

geenipolymorfismien kanssa syövän synnyn. Useat tutkimukset osoittivat lisälokuksia liittyvän rintasyöpään myös geenivirhe 8q24 varten

OPG

geeni [45], [46]. SNP rs3102735 on

OPG

geeni on raportoitu liittyvän alttiuteen rintasyövän valkoihoinen väestö [10]. Vastaavasti, geneettinen variantti lähellä 5′-pään

RANK

(rs7226991) liittyi rintasyövän riskiä [47]. Mekanismi taustalla yhdistys epäselviä toistaiseksi. Silti valtaosa yhdistyksen kromosomissa 8q24 sijaitsee noin 128 Mb ja liittyy erilaisia ​​kasvaimen yksiköiden lisäksi rintasyöpä, mukaan lukien eturauhassyöpä [48] ja paksusuolen syöpä [49].

Joukossa eri etnisten ikäryhmät taajuudet geneettisten polymorfismien vaihdella rajusti. Tutkimuksemme osoitti, että tiheys

RANK

rs1805034 C oli 0,286 joukosta 686 verrokeilla Kiinan väestöstä, joka on alhaisempi kuin eurooppalaisten (0,438) ja Afrikkalainen Amerikan (0,478), mutta samanlaisia ​​japanilaisten kanssa väestöstä ( 0,311). Kuitenkin mielenkiintoisesti, toinen tutkimus kertoo taajuus

RANK

rs1805034 C oli 0,476 Han väestön Pohjois-Kiinassa, joka eroaa meidän löydös kohortissa peräisin Itä-Kiinassa, mikä viittaa etnisen vaikutus voitaisiin myös puuttua alueellisiin ympäristötekijöiden (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi? rs = 1805034). Käyttämällä Power and Sample Size laskeminen (PS, versio 3.0.43, 2009 https://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize), kun otetaan huomioon

RANK

rs1805034 T C mutanttialleelit, voima meidän analyysi (α = 0,05) oli 0,946 vuonna 629 ESCC tapauksissa ja 686 verrokeilla kanssa säädetty OR 1,52. Vuonna mies alaryhmä, voima meidän analyysi oli 0,995 joukossa 434 tapausta ja 438 verrokeilla, jossa tarkistetaan OR 1,89. In vanhin kohortti (≥63), teho analyysi (α = 0,05) oli 0,962 joukossa 314 tapausta ja 312 säätimet säätää OR 1.84. Nykyinen tutkimus on paljastanut yhdessä suurentunut ESCC keskuudessa miespotilaita ja vanhimman potilaat (≥63 vuotta), joka oli yhdenmukainen aiempien raportin. Retrospektiivisessä tutkimuksessa, johon osallistui 74854 ESCC potilaita Pohjois-Kiinassa, esiintyvyys miehillä oli korkeampi kuin naisten keskuudessa, samanlainen kuin meidän havaintoja. Lisäksi tämä tutkimus osoitti, että vaikka esiintyvyys merkittävästi vähentynyt, mediaani-ikä-of-puhkeamista ESCC siirrettiin [50], tarkistaa meidän käsitystä, että vanhin väestö on suurempi riski.

Yhteenvetona Tutkimuksemme tarjoaa kanssa todisteita siitä, että toiminnallinen polymorfismi

RANK

rs1805034 T C liittyy herkkyys ESCC. Tunnustamme on useita rajoituksia tässä tutkimuksessa, joka on puututtava. Ensinnäkin tutkimuksessa koehenkilöille kaikki rekrytoitiin useita paikallisia terveyskeskukset sisällä samalla alueella, joka ei voi täysin edustaa yleinen Kiinan väestön, varsinkin kun erilaiset alueelliset ympäristötekijät ovat olemassa. Toiseksi yksityiskohtaiset tiedot syövän etäpesäkkeiden ja selviytyminen ei toimitettu kuin seurantatutkimuksessa on vielä kesken, mikä entisestään viivyttää analyysit vaikutuksista näiden SNP polymorfismien on ESCC etenemisen ja ennusteen. Lopuksi, kuten epidemiologinen monimutkaisia ​​ruokatorven syöpä ovat valtavia, tekee seulonta ja ehkäisy rajoitettu parhaimmillaan. Yhdistyksen välinen ravinnon tekijöiden altistuminen sieni- myrkkyjä tai N-nitroso-yhdiste elintarvikkeissa ja riski ESCC ei ole tutkittu. Lisätutkimukset eri alueiden tai etnisten populaatiot monipuolista ravintoa olosuhteissa, ja täydennetty toiminta-analyysejä ovat perusteltuja tarkistaa havaintomme.

Kiitokset

Haluamme kiittää tohtori Yiqun Chen (Shanghai Biowing Applied Biotechnology Company, https://www.biowing.com.cn) teknistä tukea.