Krooninen sairaus

tiivistelmä

mukaan syövän kantasolut (CSCS) teoria, pahanlaatuiset kasvaimet voivat olla heterogeenisiä jossa pieni väestö CSCS ajaa etenemistä syöpä. Koska niiden luontainen kykyjä, CSCS voi selvitä erilaisia ​​hoitoja ja sitten johtaa hoidon kestävyys ja syövän uusiutumiseen. Haiman CSCS on raportoitu olevan vastuussa pahanlaatuinen käyttäytymistä haimasyövän, kuten immuunitoimintojen suojan. Siten kehittäminen immuuni strategioiden hävittämiseksi haiman CSCS voi olla suurta hyötyä hoitoon haimasyöpä. Tässä tutkimuksessa olemme rikastettu haiman CSCS viljelemällä Pancin-1 soluilla palloja muodostavan olosuhteissa. Panc-1 CSCS ilmaistuna alhainen HLA-ABC ja CD86, mitattuna virtaussytometrialla analysointia. Olemme lisäksi havainneet, että Panc-1 CSCS moduloida koskemattomuuden estämällä lymfosyyttien proliferaatiota, joka edistää fytohemagglutiniinia (PHA) ja anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita. Monosyytti dendriittisolut (DC) panostettiin yhteensä lysaatit syntyvät Pancin-1 CSCS saatu kasvain pallo viljelemällä. Sen jälkeen co-viljely lymfosyyttien kanssa eri tunnuslukujen Panc-1 CSCS lysaatit muokattu DC tehokkaasti edistää imusoluproliferaation. Aktivoiva tehokkuus saavutti 72,4% ja 74,7% klo 1:10 ja 01:20 lymfosyyteillä. Aktivoitu lymfosyytit eritetään suuria määriä INF-γ: n ja IL-2, jotka ovat vahvoja kasvaimenvastaista sytokiineja. Lisäksi Panc-1 CSCS lysaatit muokattu DC indusoi merkittäviä sytotoksisia vaikutuksia lymfosyyttien Pancin-1 CSCS ja vanhempien Pancin-1-soluissa, vastaavasti, kuten on esitetty (LDH) määritys. Tutkimuksemme osoittaa, että kehitys CSCS-pohjainen rokote on lupaava strategia hoitoon haimasyövän.

Citation: Yin T, Shi P, Gou S, Shen Q, Wang C (2014) dendriittisoluja Täynnä Haiman syöpä kantasolut (CSCS) lysaatit Pakotettava Kasvaintenvastainen Immuunijärjestelmän tappava vaikutus in vitro. PLoS ONE 9 (12): e114581. doi: 10,1371 /journal.pone.0114581

Editor: Jingwu Xie, Indiana University School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 31 heinäkuu 2014; Hyväksytty: 11 marraskuu 2014; Julkaistu: 18 joulukuu 2014

Copyright: © 2014 Yin et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustuksia National Natural Science Foundation of China (nro 30801100).

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, että ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Haimasyöpä on yksi tappavan syöpäsairauksia ruoansulatuskanavan, jotka hyväksytään suurin syy syöpään liittyvät kuolemat teollisuusmaissa. Viime vuosina ilmaantuvuus haimasyövän ja siihen liittyvä kuolema kasvaa tasaisesti kehitysmaissa, kun taas ennustetta useimpien haimasyövän potilaille ei parantunut viimeisten kolmenkymmenen vuoden aikana. Suurin haimasyövän potilaat menettivät mahdollisuuden kirurginen resektio, koska pitkälle edenneen taudin diagnoosin, ja luontainen tai hankittu resistenssi kemoterapiaa tai sädehoitoa, joka on tyypillinen piirre haimasyövän [1]. Näin ollen on kiireellisesti tutkia uusia kohdennettuja interventiostrategioita hoitoon haimasyövän.

syövän kantasolut (CSCS) ovat alapopulaation syöpäsolujen vahvat itseuudistumiseen ja erilaistumista kykyjä ajaa syövän synnyn ja etenemisen syöpä. Äskettäin CD44 + CD24 + ESA + haiman CSCS on vahvistettu olevan lisääntynyt Tuumorigeenisuustutkimuksissa, ja vastaavat pahanlaatuinen käyttäytymisen haimasyövän [2]. Täydellinen hävittämiseksi Näiden CSCS voi antaa toivoa uutena terapeuttinen strategia hoitoon haimasyöpä. Kuitenkin antiapoptooppinen kyky on yksi merkittävimmistä ominaisuuksia CSCS useiden kasvaintyypit, jolloin tehoton tappaminen tavanomaisen kemoterapian ja sädehoidon [3] – [4]. Jäännöksen CSCS voi näin tulla alkuperästä uusiutumisen ja lähde hoidon epäonnistumisen.

Syöpä immunoterapian aktivoi potilaan tuumorin vastainen immuunivaste hylätä pahanlaatuisten syöpäsolujen. CSCS ilmaista tiettyjen biomarkkereita, jotka ovat eri antigeenisyys, joka voi aiheuttaa immuunivasteita [5] – [6]. CSCS on osoitettu tunnistaa ja eliminoida CD8 + T -solujen [7]. Lisäksi on osoitettu, että luontaisen immuniteetin CSCS voi sanella syövän etenemisen tietenkin [6]. Näin ollen se on houkutteleva strategia indusoi immuunivasteita vastaan ​​haiman CSCS hoitoon haimasyöpä. DC: t ovat tehokkaita antigeeniä esitteleviä soluja ja niillä on keskeinen rooli aiheuttaa primaarisen immuunivasteita kasvaimeen liittyviä antigeenejä. Useita strategioita on kehitetty muuttaa DC: iden kasvaimen antigeenejä tuottaa kasvaimen vastaisen immuunivasteen. Heikko kasvaimen antigeeni-muunnettu DC rokote voi saada aikaan voimakas anti-kasvain immuunivasteita in vitro ja in vivo [8]. Tässä tutkimuksessa olemme muunnettu DC: iden haiman CSCS antigeenin, ja tutki tappaminen vaikutus immuunivasteet CSC-DC haiman CSCS in vitro.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

käyttö koehenkilöillä oli nimenomaan hyväksynyt Clinical Research toimikunta unionin sairaala, Tongji Medical College, HUST. Verinäytteet saatiin terveiltä luovuttajilta. Kaikki vapaaehtoiset olivat tiedossa ja sopivat, että veri aikoi käyttää tieteelliseen tutkimukseen. Kaikki osallistujat allekirjoittaneet kirjallisen tietoisen suostumuksen muotoon ennen lahjoittamalla verta.

Soluviljely

Pancin-1 haimasyöpä solulinjaa viljeltiin Dulbecco Modified Eagle Medium täydennettynä 10% naudan sikiön seerumia ( Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), penisilliiniä (100 U /ml) ja streptomysiiniä (100 U /ml) 37 ° C: ssa inkubaattorissa 5% CO

2. Viljelyolosuhteet haimasyövän soluja muodostaa kasvaimen aloilla, suspensio kuvattu aiemmin [9]. Lyhyesti, entsymaattisesti dissosioitunut yhden solut laimennettiin tiheyteen 10

3 solua /ml palloja muodostavan väliaineen (SFM). Solut siirrostettiin joka 10 14 vuorokauteen ja maljattiin uudelleen SFM. Pallomainen klustereita soluja kasvatettiin tässä tilassa nimetty Panc-1 CSCS. SFM käytetään oli DMEM-F12, johon oli lisätty 10 ng /ml fibroblastikasvutekijä-basic (Peprotech), 20 ng /ml epidermaalinen kasvutekijä (Peprotech), 5 ug /ml insuliinia, 2,75 ug /ml transferriiniä, 2,5 ng /ml natriumseleniittiä (Sigma), ja 0,4% naudan seerumin albumiinia (Amresco).

valmistaminen kasvainsolun lysaattia

Haiman syöpäsolujen (Panc-1 piiriin, Panc-1) inkuboitiin 0,01% EDTA: -ratkaisu 5 min. Pesun jälkeen kahdesti PBS: llä, solut suspensoitiin uudelleen seerumittomassa elatusaineessa. Solususpensiot pakastettiin -80 ° C: ssa ja sulatettiin neljä jäädytys-sulatus-sykliä. Poistamisen jälkeen raakatuote roskia, lysaatit sentrifugoitiin 10 min 300 g: painovoiman. Supernatantit kerättiin ja proteiinin pitoisuudet lysaatit määritettiin Bio-Rad-määrityksellä (Bio-Rad, Munchen, Saksa).

valmistaminen haimasyöpäsoluissa lysaatit muunnettu DC

Perifeerisen veren mononukleaarisia solut (PBMC) kahdelta terveistä luovuttajista eristettiin Ficoll tiheys-gradienttisentrifugaatiolla. PBMC: t viljeltiin RPMI 1640 mukana 10% seerumia viljelmän levyjä kiinnittyminen 37 ° C: ssa, 5% CO

2: ssa kaksi tuntia. Kiinnittymättömät solut poistettiin ja niitä viljeltiin elatusaineessa, joka sisälsi 10 U /ml IL-2 edelleen sukupolven lymfosyyttipopulaatiossa. Tarttuneet solut kerättiin ja viljeltiin GM-CSF (Genzyme, 100 ng /ml) ja IL-4 (Genzyme, 100 ng /ml) ja 6 päivää 37 ° C: ssa, 5% CO2: ta. Sitten soluja inkuboitiin lysaatit haimasyöpä solun (Panc1 alalla ja Panc-1) pitoisuutena 100 ug jokaista 2 x 10

5 DC 24 tuntia. Sen jälkeen, DC-solut aktivoitiin TNF-α (20 ng /ml) 24 tunnin ajan.

Immunologiset fenotyyppianalyysillä

Virtaussytometria-analyysi suoritettiin havaita immuunijärjestelmän fenotyyppien kasvainsolujen ja dendriittisolujen. Vasta-aineita ovat anti-HLA-DR-FITC, anti-HLA-ABC-FITC, anti-HLA-DQ-PE, anti-CD80-FITC, anti-CD54-FITC, anti-CD1a-FITC ja anti-CD86-PE (eBioscience). FITC-IgG ja PE-IgG käytettiin sisäisen valvonnan. Värjäystä varten 5 x 10

5-soluja maljattiin 96-kuoppaisia ​​U-levyn (Corning, USA) ja inkuboitiin 5 ui kutakin vasta-ainetta 4 ° C: ssa 30 minuutin ajan. PBS-pesun jälkeen solut kerättiin 1000 g painovoiman 5 minuuttia. Sitten solut suspendoitiin uudelleen 300 ul: aan PBS: ää ja altistettiin virtaussytometria-analyysi.

inhibitio haimasyövän solujen lymfosyyttien proliferaation

Panc-1 CSCS kerättiin stimulaattorisoluina. Sen jälkeen, kun on esikäsitelty mitomysiini C: llä (25 ug /ml), stimulaattorin soluja viljellään kanssa 1 x 10

6 /ml tarttumattomat lymfosyyttien (reaktorit) suhteessa 01:10, kun läsnä on PHA (sigma) tai anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita (OKT3, eBioscience). Sitten 20 ui 5 ug /ul 3- (4, 5-dim etyylitiatsol-2-yyli) -2, 5- difenyyli- 2H – liumbromidi (MTT) (Sigma) lisättiin kuhunkin kuoppaan. Kun oli inkuboitu 4 h, supernatantti korvattiin 150 ul: aan dimetyylisulfoksidia (Sigma). Imeytymistä (A) luettiin 570 nm: ssä käyttäen spektrofotometriä. Suhteellinen määrä soluproliferaatiota laskettiin seuraavasti: (A-B) /(C + D) x 100%. (A) koeryhmä: Pancin-1 CSCS + lymfosyyttien + PHA /OKT3; (B) positiivinen kontrolli: lymfosyyttien + PHA /OKT3; (C) sokeakoekuoppaa: Pancin-1 CSCS + PHA /OKT3. Kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena.

aktivointi vaikutus Pancin-1 CSCS muokattu DC imusoluproliferaatiota

tutkimiseksi kapasiteetin Pancin-1 CSCS modifioitu DC aktivoida leviämisen lymfosyyttien, eri ryhmät DC (Panc-1 CSC-DC, DC) kerättiin stimulaattorisoluina. Esikäsittelyn jälkeen mitomysiini C: llä (25 ug /ml, Roche), stimulaattorin soluja viljeltiin yhdessä 1 x 10

6 /ml allogeenisen tarttumattomat lymfosyyttien (reaktorit) 96-kuoppalevyille suhteet vaihtelevat 1: 10 1:20 ja oli kulttuuri 37 ° C: ssa, 5% CO

2 96 tuntia. Lymfosyytit viljeltiin yksin ilman stimuloivaa asetettiin valvontaa. Sitten 20 ui 5 ug /ul 3- (4, 5-dim etyylitiatsol-2-yyli) -2, 5- difenyyli- 2H – liumbromidi (MTT) (Sigma) lisättiin kuhunkin kuoppaan. Kun oli inkuboitu 4 tuntia, supernatantit korvattiin 150 ul: aan dimetyylisulfoksidia (Sigma). Imeytymistä (A) luettiin 570 nm: ssä käyttäen spektrofotometriä. Suhteellinen määrä lymfosyyttien aktivoinnin jälkeen laskettiin A koe /A ohjaus x 100%. Nopeus soluproliferaatiota laskettiin: (A koe-A ohjaus) /A ohjaus x 100%. Kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena.

Cytokine havaitsemista ELISA-määrityksellä

määrittämiseksi stimuloiva kyky dendriittisolujen lymfosyyttien aktivointi, supernatantit ja lymfosyytti- kerättiin 72 tuntia sen jälkeen, kun on stimuloitu DC ja pitoisuudet IFN-γ, IL-2, IL-10 mitattiin ELISA-kitillä R 0,05 pidettiin merkittävänä.

Tulokset

Haiman CSCS kulttuuri ja palloja muodostavan

palloja muodostavan kyvyt syöpäsolujen seerumittomassa väliaineessa on pitkään käytetty rikastuttaa varsi kaltaisia ​​soluja. Suhde pallosta muodostavien kyvyt seerumittomassa väliaineessa ja kantasolujen omaisuutta Pancin-1 haimasyöpäsoluissa on testattu meidän aiemmin tutkimuksissa [9], [10]. Alustavien tutkimuksissa havaittiin, että Panc-1 solut voivat levitä muodostaa palloja kantasolujen ominaisuuksia. Lisäksi nämä kantasolujen kaltaisia ​​soluja osoittivat lisääntynyttä resistenssiä kemoterapiaa ja lisääntynyt maahanmuutto kyky. Tässä tutkimuksessa, keräsimme Pancin-1 CSCS viljeltiin seerumivapaassa väliaineessa jatkotutkimuksiin immunologisen tappaminen strategia (Fig. 1).

immunologista fenotyyppi Pancin-1 pallo solujen

Olemme havainneet ilmentymistä immunologisen molekyylien Pancin-1 pallo FACS menetelmillä. Kuten on esitetty kuviossa. 2, Panc-1 pallo ilmaisi alhainen HLA-ABC: n ja CD80 verrattuna Pancin-1-soluissa. Emme löytäneet mitään eroja Pancin-1 ja Panc-1 pallojen suhteen muiden immuunijärjestelmän molekyylimarkkereina myös HLA-DR, HLA-DQ, CD86, ja CD1a. Alhainen ilmentyminen immuuni molekyylimarkkereiden on Pancin-1 pallo osoittaa, että alhainen stimuloiva kyky CSCS immuunijärjestelmän.

Havaintoesimerkki FCM analyysi osoitti, että MHC I ja CD80 oli nöyrä ilmaistu Pancin-1 CSCS verrattuna jossa Pancin-1-soluissa. Mitään merkittäviä eroja ei löytynyt muiden immuunijärjestelmän molekyylien kuten CD86, HLA-DR, HLA-DQ, CD86, ja CD1a. CD80: n ja HLA-ABC Panc-1 CSCS on esitetty yhtenäisellä viivalla. CD80: n ja HLA-ABC Panc-1-soluissa on esitetty katkoviivalla

vaikutus haimasyövän solujen leviämisen lymfosyyttien

CSCS on raportoitu moduloivan immuuni ja aiheuttaa immunosuppression läpi useita mekanismeja. Sen määrittämiseksi, onko haiman CSCS moduloida lymfosyyttien aktivaatio, vaikutukset Panc-1 CSCS lymfosyyttien proliferaatiota edistää PHA tai anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita analysoitiin MTT-määrityksellä. Pancin-1 pallot olivat viljeltiin yhdessä lymfosyyttien. PHA tai anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita käyttää aktivoimaan lymfosyyttien proliferaation. Tulokset osoittivat, että leviämisen lymfosyyttien aktivoitiin PHA tai anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita estyi, kun läsnä haiman CSCS verrattuna kontrolleihin (Fig. 3).

Lymfosyytit stimuloida lisääntymään PHA: lla tai anti- CD3 monoklonaalisia vasta-aineita. Panc-1 CSCS olivat viljeltiin yhdessä lymfosyyttien kanssa suhteessa 1:10, kun läsnä on PHA tai anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita. Lymfosyytit stimuloitiin PHA: lla tai anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita pelkästään asetettiin kontrollina. MTT-analyysi osoitti, että lymfosyyttien proliferaatiota edistää PHA tai anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita estyi, kun läsnä oli Panc-1 CSCS.

Stimuloiva kyky CSCS lysaatit muunnettu DC lymfosyyttien proliferaatiota

vaikutuksen määrittämiseksi CSCS lysaatit muutettu-DC lymfosyyttien proliferaation, erisuuruisina DC (Panc-1 CSC DC ja primitiivinen DC) olivat viljeltiin yhdessä lymfosyyttien. Aktivoiva vaikutus eri DC lymfosyyttien proliferaatio oli osoitettu MTT-menetelmällä. Lymfosyyttien proliferaation osoitettiin noudattamista klo OD570 nm. Kuten on esitetty kuviossa. 4, DC täynnä Haiman CSCS lysaatit herättänyt voimakasta leviämisen lymfosyyttien, (Fig. 4A). Aktivoiva vaikutus eri DC lymfosyyteissä voi heijastua lymfosyyttien leviämisen nopeus, ja aktivoiva vaikutus Pancin-1 pallo lysaatit ladattiin DC lymfosyytteihin saavutti 72,4% ja 74,7% on 1:10 ja 01:20, kun taas lymfosyyttiproliferaation aktivoidaan DC nousi vain 17,5% ja 14,6% (Fig. 4B).

eri DC: iden (Panc-1 CSC DC, DC) viljeltiin yhdessä imusolun (reaktorit) 96-kuoppalevyille eri suhteissa (1:10, 1:20). Lymfosyytit viljeltiin yksin asetettiin valvontaa. Sen jälkeen 96 h, suhteellinen solujen määrä laskettiin absorbanssista MTT menetelmillä. Kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena. A. suhteellinen määrä lymfosyyttien stimulaation jälkeen voi heijastua absorbanssi. Pancin-1 CSCS modifioitu DC stimuloi vahvempi leviämisen lymfosyyttien verrattuna DC ryhmiä. B. aktivoiva vaikutus DC lymfosyyttien voi heijastua imusoluproliferaation hintaan. Pancin-1 CSCS lysaatit muokattu DC saavuttanut merkittävän korkea imusoluproliferaatiota nopeudella verrattuna DC ryhmiin.

Haiman CSCS lysaatit muutettu DC provosoi IFN-y IL-2 ja IL-10 lymfosyytteihin

määrittämiseksi aktivointi lymfosyyttien Haiman CSCS muunnettu DC, olemme havainneet sytokiinejä, joita T-solut mukaan materiaaleja ja menetelmiä. Dendriittisolut haimasyöpä solulysaateista indusoimaa Th1 sytokiinin IFN-γ, IL-2 ja Th2 sytokiini IL-10. Tuloksemme osoittivat, että säätelyn IFN-γ oli erityisen merkittävä, että Panc-1 pallo modifioitu DC, ja IFN-γ kasvoi 5,03-kertaiseksi verrattuna primitiivinen DC ryhmään. Eritystä IL-2 lisääntyi 2,28-kertaiseksi verrattuna primitiivisiä DC ryhmään (Fig. 5). Samaan aikaan Th2 liittyvä sytokiini IL-10 lisääntyi myös Pancin-1 CSCS antigeenin ladattu DC. Määrä IL-10 supernatantissa lisätä aina 7,3-kertaisesti Pancin-1 pallo lysaatit muunnettu DC suhteessa primitiivinen DC, mutta huomattavasti pienempi kuin Th1 liittyvän sytokiini (Fig. 5).

eri DC olivat viljeltiin yhdessä 1 x 10

6 /ml lymfosyyttien 96-kuoppaisilla levyillä. Supernatanteista lymfosyytin kerättiin 72 tuntia sen jälkeen, kun on stimuloitu DC, ja pitoisuudet IFN-γ, IL-2, IL-10 mitattiin ELISA-määrityksellä. Haiman CSCS lysaatit muunnettu DC herättänyt merkittävää IFN-γ, IL-2 ja IL-10-lymfosyyttien.

haiman CSCS muunnettu DC indusoi voimakkaan tappava vaikutus haiman CSCS

verrataan edelleen erityinen tappava vaikutus lymfosyyttien aktivoida haiman CSCS muutettu DC. Autologinen lymfosyyttien stimuloidaan CSC-DC kerättiin ja viljeltiin yhdessä Pancin-1 CSCS eri suhteessa. Erityinen tappava vaikutus havaittiin LDH menetelmillä. Lymfosyytit aktivoida DC täynnä Pancin-1 CSCS roskia osoitti merkittäviä tappava vaikutus Pancin-1 CSCS verrattuna DC ohjaa eri suhteessa (Fig. 6). Lisäksi olemme havainneet, että primitiivinen Pancin-1 solulysaateista ladattu DC nostatti heikompi tappava vaikutus Pancin-1 CSCS verrattuna Pancin-1 CSCS lysaatit muokattu DC (Fig. 7A). Kuitenkin Panc-1 CSCS modifioitu DC provosoi verrattavissa tappaminen vaikutuksia sekä Pancin-1 CSCS ja Panc-1-soluissa. Vaikka tappaminen vaikutukset olivat heikompi Pancin-1 solun verrattuna Pancin-1 DC, ei ollut merkittävää eroa Pancin-1 DC ja Panc-1 CSC- DC (Fig. 7B). Tämä tappava vaikutus oli erityisen merkitsevä pienempi osuus 1:10 ja 1:20 lymfosyyteillä.

Eri DC olivat viljeltiin yh- suhteessa 1:10 lymfosyyttien 5 päivän ajan. Tarttumattomat solut kerättiin ja laskettiin efektoreina soluja. Efektorit (1 x 10

6 solua) viljellään kanssa haimasyöpäsoluissa eri suhde 20 tunnin ajan 37 ° C: ssa, 5% CO

2-inkubaattorissa. Soluton supernatantti kerättiin ja analysoitiin LDH-määrityksellä. Pancin-1 CSCS lysaatit muokattu DC osoitti voimakkaampaa tappava vaikutus Pancin-1 CSCS verrattuna kontrolleihin.

Eri DC (Panc-1DC, Panc-1CSC DC) olivat yhdessä viljeltiin suhteessa 1:10 lymfosyyttien 5 päivän ajan. Tarttumattomat solut kerättiin ja laskettiin efektoreina soluja. Efektorit (1 x 10

6 solua) viljellään kanssa haimasyöpäsoluissa (Panc-1, Panc-1 CSCS) eri suhteessa 20 h 37 ° C: ssa 5% CO 2-inkubaattorissa. Soluton supernatantti kerättiin ja analysoitiin LDH-määrityksellä. A. Pancin-1 CSCS lysaatit muokattu DC osoitti voimakkaampaa tappavat vaikutukset Pancin-1 CSCS verrattuna Pancin-1 lysaatit muokattu DC. B. Pancin-1 CSCS lysaatit muokattu DC oli verrattavissa tappaminen vaikutuksia Pancin-1-soluissa verrattuna Pancin-1 DC-rokotteen.

Keskustelu

CSCS ollut tunnettu sen kestävyys terapia, ja se voi olla syy uusiutumisen pahanlaatuisia kasvaimia, kuten aiemmin on raportoitu [10] – [11]. Kehittäminen antitumor immuniteetti voi siis olla tehokas vaihtoehtoinen lähestymistapa hävittämiseksi haiman CSCS. Valitettavasti CSCS voi rikkoa elimistön immuunijärjestelmän valvonnan läpi useita mekanismeja. CSCS on raportoitu olevan heikko immunogeeninen. Ohlfest ym raportoitu, että ihmisen CD133 + gliooma solut ilmentävät pieniä määriä MHC I tai luonnollisen tappaja (NK) solun aktivoimiseksi ligandeja. Alhainen ilmentyminen näiden immuuni stimuloiva molekyylit voivat auttaa gliooma CSCS kiertää mukautuva ja synnynnäisen immuniteetin hyökkäyksistä [12]. Johdonmukaisesti tutkimuksessamme, virtaussytometria-analyysi paljasti, että haiman CSCS ilmaista alhainen HLA-ABC ja CD80. Alhainen MHC molekyylit voivat heikentää tunnistamista CSCS antigeenin ihmisen kehon immuunijärjestelmään. Alhainen ilmentyminen CD80 voi johtaa immuunijärjestelmän anergy [13]. Havaitut immuuni ominaisuudet viittasi pieneen immuunijärjestelmää stimuloiva kyvyt haiman CSCS immuunijärjestelmälle. CSCS raportoitiin myös moduloida immuunivastetta. Heimberger ym raportoitu että CSCS edistää immuunijärjestelmän veropetokset asiakkuutta säätelijä-T-solujen ja erittävät tiettyjä immunosuppressiivisia molekyylejä [14], [15]. On myös raportoitu, että pahanlaatuinen melanooma aloittamista solut voivat moduloida antituumorivaikutuksen immuunivastetta estämällä T-solujen aktivaation ja indusoimalla Treg-soluja [14]. Meidän tutkimuksessa todettiin, että aktivointi lymfosyyttien stimuloitiin PHA tai anti-CD3 monoklonaalisia vasta-aineita estyi, kun läsnä oli Panc-1 alalla. Tämä osoitti, että haiman CSCS voi olla immunosuppressoivilla ominaisuuksia. Murtaminen siedätyshoitoa haiman CSCS ja induktio immuunivasteiden CSCS voi olla tehokas ja lupaava strategioita poistamiseksi CSCS.

DC: t ovat ammatillinen antigeenejä esitteleviä soluja, jotka ovat avainasemassa indusoimisessa ja ajamiseen ensisijainen immuunivasteiden tehden ne olennaisena tavoite tuottaa terapeuttisen immuniteetin syöpiä [16]. Muuttaminen DC: iden kasvaimen antigeeni voi aiheuttaa T-solujen aktivaation ja antitumor immuunivastetta. DC-pohjainen rokotus edustaa niin lupaava ja tehokas strategia aikaansaamiseen antituumorivaikutuksen immuniteetti syövän hoitoon. Sukupolven DC ladattu CSCS liittyviä antigeenejä voi esittää uusi ja arvokas menetelmä saamaan aikaan immuunivasteen hävittämiseksi CSCS. Se oli raportoitu, että sytotoksisten T-lymfosyyttien vastaan ​​CSCS voidaan indusoida fuusio CSCS DC tai transfektoimalla CSCS mRNA dendriittisoluiksi [17] – [18]. Tässä tutkimuksessa olemme ladattu DC haiman CSCS roskia. Sen jälkeen rinnakkaisviljelemällä lymfosyyttien, tämä modifioitu DC aktivoi ja stimuloi lymfosyyttien proliferaatiota ja eritystä INF-γand IL-2. Ylös-säätely IFN-γ, joka on vahva antitumor sytokiini, oli erityisen merkittävä. Samalla olemme havainneet, että Th2 liittyvä sytokiini IL-10 lisääntyi jälkeen DC stimulaation. IL-10 on tehokas immunosuppressiivinen sytokiini, joka inhiboi T-solujen aktivaatiota. Vaikka ylössäätöä IL-10 oli paljon pienempi verrattuna Th1 liittyvän sytokiini, esto IL-10 voi tehostaa immuunivastetta CSCS.

lisätutkimuksia paljasti, että lymfosyyttien aktivoidaan Pancin-1 CSCS lysaatit muunnettu DC osoitti merkittäviä tappamista vaikutuksia sekä Pancin-1 ja Panc-1 CSCS. Lisäksi tappava vaikutus Pancin-1 CSCS provosoi Pancin-1 CSC-DC oli vahvempi verrattuna Panc-1 DC. Ottaen huomioon, että haiman syöpä on vastustuskykyinen lähes kaikki tällä hetkellä käytettävissä olevat hoidot, ja terapeuttinen vastus voi johtua CSCS. Kehittäminen immunoterapia haiman CSCS tulee lupaava lähestymistapa hoitoon haimasyövän lähitulevaisuudessa.

Toistaiseksi eristäminen haiman CSCS on saavutettu pääasiassa erityisillä pintamerkkiaine riippuvaista solun valinta. Raportoitu solun pinnan markkereita ovat CD44, CD24, CD133, ESA, Muut haiman CSCS [2], [19]. Kuitenkin haiman CSCS valitaan ne solunpintamarkkereiden voi olla heterogeeninen, koska mikään näistä merkit näkyvät valikoivasti luonnehtia puhdas populaatio CSCS [20] – [21]. Toisaalta, viljely CSCS pallojen kantasolujen ilmastoitu kulttuuri järjestelmä voi olla toinen tapa rikastuttaa haiman CSCS. Nykyisissä tutkimuksessa olemme rikastettu haiman CSCS käyttämällä tarttumaton alalla kulttuurin järjestelmä. Roskat solun pallon käytettiin veloittaa DC ja kerätä CSCS muutettu DC. Immuunireaktion aiheuttama tällainen lähestymistapa voi suoraan kohdistaa enemmistön haiman CSCS väestöstä.

Yhteenvetona tuloksemme osoittivat, että DC-pohjainen immunoterapia voi olla ihanteellinen strategia poistaa haiman CSCS. Tämä lupaava immuuni käsittely arvoinen jatkokehitys huomioon luontainen vastus haiman CSCS nykyisiin hoitomuotoihin.

Kirjoittajat julistaa, ettei eturistiriitaa koskevat valkoisen kirjan ilmestymisen.