Krooninen sairaus

tiivistelmä

mykoplasmainfektio ihmisen ja sen saastumisen soluviljelmissä ovat maailmanlaajuisesti ongelmia. Lääkkeitä tällä hetkellä saatavilla ehkäisyyn tai hoitoon mykoplasmatulehduksen kärsivät alhainen herkkyys, voimakasta vastustusta ja korkea myrkyllisyys. Meidän edellinen työ osoitti, että

Mycoplasma hyorhinis

(

M

.

hyorhinis

) infektion välittämä vuorovaikutus p37 on

M

.

hyorhinis

ja anneksiini A2 (ANXA2) isäntäsolujen kuitenkin translationaalinen arvo tämän mekanismin oli tuntematon. Tässä me syntetisoitiin N-terminaalin ANXA2 polypeptidin (A2PP), ja havaitsivat, että A2PP voisi alentaa infektion

M

.

hyorhinis

mahalaukun syöpäsoluja ja lohko

M

.

hyorhinis

infektio aiheuttama solumigraation. Lisäksi olemme havainneet, että A2PP voisivat vähentää

M

.

hyorhinis

saastumisen passage soluja. Lisäksi verrattiin kaupalliseen antibiootteja käytetään yleisesti soluviljelmissä estää

M

.

hyorhinis

infektio, A2PP osoitti enemmän tehoa, mutta alhainen myrkyllisyys solun kasvuun. Näin ollen meidän tutkimus ensimmäistä kertaa paljasti A2PP mahdollisuudet hoitoon ja ehkäisyyn

M

.

hyorhinis

infektio.

Citation: Yuan S, Qu L, Shou C (2016) N-terminaalista polypeptidiä anneksiini A2 Vähentää Infektio

Mycoplasma hyorhinis

syöpään Cells . PLoS ONE 11 (1): e0147776. doi: 10,1371 /journal.pone.0147776

Editor: Gernot Zissel, Universitätsklinikum Freiburg, SAKSA

vastaanotettu 16. lokakuuta 2015 Hyväksytty: 07 tammikuu 2016; Julkaistu 26. tammikuuta 2016

Copyright: © 2016 Yuan et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin. Microarray data on talletettu NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (liittymistä no.GSE73777).

Rahoittajat: Rahoittajat National Natural Science Foundation of China (81572532). https://www.nsfc.gov.cn/publish/portal1/. SCC sai rahoitusta. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Patogeenisia mykoplasmoja, kuten Mycoplasma pneumoniae (

M

.

pneumoniae

), mycoplasma hyorhinis (

M

.

hyorhinis

), suun mycoplasma (

M

.

orale

) ja Mycoplasma genitalium (

M

.

genitalium

), kuuluvat luokkaan mollicutes, mikä on pienin mikro-organismi elävä luonnossa ja voi kopioida itsenäisesti [1-2]. Useat tutkimukset osoittivat, että infektio nämä mykoplasmoihin liittyi kasvainten kehittymiseen [3-8].

M

.

orale

aiheuttaa kromosomi poikkeavuus ihmisen diploidisoluissa ja indusoi solutransformaatiota [6]. Infektio

M

.

hyorhinis

tai

M

.

genitalium

voisi lisätä maahanmuuttoa ja invasiivisuus eturauhasen epiteelisolujen [3].

M

.

hyorhinis

infektio on yhdistetty niveltulehdukseen, serosiitti, hedelmättömyys ja syövän ihmisen [9-12].

Lisäksi mykoplasmakontaminaation soluviljelmässä on vakava ongelma ja nopeus kulkua solujen tartunnan mycoplasma on korkea. Soluviljely käytetään laajalti biotieteiden, kuten perustutkimuksen, kliinisen tutkimuksen tutkimus, kehityksen ja tuotannon biologisten tuotteiden sekä alan biofarmaseuttisen ja rokotteen tuotannossa. Estäminen solujen mikrobikontaminaation on olennaista varmistaa tutkimuksen laatua. Mycoplasma saastuminen on yleisin ongelma soluviljelmässä esiintyvyys 30% -60% [1]. Kävi ilmi, että neljä lajia mykoplasmoihin osuus on yli 95% infektion soluviljelmässä, mukaan lukien

M

.

orale

, arginiini mycoplasma (

M

.

arginini

),

M

.

hyorhinis

ja Levinin ei Acholeplasma (

.

laidlawii

) [13,14,15,16]. Koska pieni koko, mycoplasma tuskin löytyy valomikroskoopilla ja helposti huomiotta tutkijat. Viime vuosina lukuisia antibiootteja käytetään mycoplasma hoitoon toistuvasti johti syntymistä mykoplasma vastarintaa. Näistä syistä on välttämätöntä kehittää uusia aineita estäminen tai vähentäminen mykoplasmatulehduksen.

edellinen työ osoitti, että

M

.

hyorhinis

infektio riippuu vuorovaikutuksesta P37 (suurten kalvo proteiini

M

.

hyorhinis

) ja isäntä ANXA2 kautta N-pääaluetta. Olemme myös löytäneet polyklonaalinen vasta-aine p37 voisi estää tartunnan

M

.

hyorhinis

ja lasku

M

.

hyorhinis

-promoted migraatio mahasyövän solujen [17]. Näiden pohjalta löytöjä, nostimme hypoteesi, että peptidi, syntetisoitiin aminohapposekvenssin ANXA2 N-pään alueen (1

st 30

th aa, tässä nimesimme tämän peptidiä A2PP), voisi estää

M

.

hyorhinis

infektio kautta kilpailussaan ANXA2 ja mahdollisesti käyttää lääkkeenä estää

M

.

hyorhinis

infektio soluviljelmässä. Tässä tutkimuksessa testasimme tämä hypoteesi sekä verrattiin A2PP muiden lääkkeiden kanssa estämään

M

.

hyorhinis

infektio.

Materiaalit ja menetelmät

Cell Culture

AGS mahasyövän solulinja oli American Type Culture Collection (ATCC). BGC823 mahasyövän solulinja perustettiin Pekingin yliopiston Kansan sairaalassa ja ostettiin Cell Culture Center of Chinese Academy of Medical Sciences (Peking, Kiina). AGS ja BGC823 soluja viljeltiin RPMI-1640-väliaineessa, jota täydensi 10% naudan sikiön seerumia, saatu Invitrogen (Carlssbab, CA, USA). Mycoplasma koe toteutettiin ennen jokaista uutta koetta PCR-monistamalla

M

.

hyorhinis p37

.

Mycoplasma Leviäminen ja yhteistyö kulttuurin

Mycoplasma leviämistä ja yhdessä viljelemisen toteutettiin aiemmin raportoitu [17,18,19].

Vasta-aineet ja reagenssit

Anti-p37 monoklonaalinen vasta-aine PD4 syntyi ja tunnettu aikaisemmin [5,20,21]. Polyklonaalisia anti-p37-vasta-ainetta saatiin immunisoimalla kani GST-p37-fuusioproteiini seuraavan standardin protokollaa. Anti-EGFR ja anti-fosfo-EGFR ostettiin Cell Signaling Technology (CST, USA). Anti-ANXA2 oli peräisin Novus Biotechnology (Novus Biotechnology, USA). Anti-fosfo-ANXA2 oli Santa Cruz (Santa Cruz, CA, USA). A2PP (1

st 30

th aa) ja eri katkaistu A2PP peptidejä, mukaan lukien A2PP-ND4 (5

th 30

th aa), A2PP-ND8 (9

nnestä 30

th aa), A2PP-Nd12 (13

rd 30

th aa), A2PP-Nd16 (17

th 30

th aa), A2PP-CD4 (1

st 26

th aa), A2PP-CD8 (1

st 22

nd aa), A2PP-Cd12 (1

st 18

th aa), A2PP- CD16 (1

st 14

th aa) sekä satunnainen kontrollipeptidejä (ConP) syntetisoitiin Sbsbio (Peking, Kiina). Mikrobilääkkeet mycoplasma I (Myco I) ja mykoplasman II (Myco II) hankittiin M

DDIT3

, eteenpäin, 5 ’ -GCGCATGAAGGAGAAAGAAC-3 ’, kääntää, 5′-ACCATTCGGTCAATCAGAGC-3’;

CEBPB: lle

, eteenpäin, 5′-AGCGACGAGTACAAGATCCG-3 ’, kääntää, 5′-AGCTGCTCCACCTTCTTCTG-3’) syntetisoitiin Sangon.

tilastollinen analyysi

Tulokset esitettiin keskiarvona ± SD. Erot analysoitiin ANOVA SPSS 11.0 ohjelmisto ja P 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Microarray hakunumerolla

Microarray data on talletettu NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (tulonumero. GSE73777).

Tulokset

A2PP ei vaikuta elinkelpoisuutta ja Migration mahalaukun Syöpäsolut

jotta voitaisiin arvioida roolia ANXA2 n n-pään domeenin

M

.

hyorhinis

infektio, me ensin syntetisoitiin A2PP vastaava peptidi N-pään ANXA2 (kuvio 1A). Biotiinileimattua A2PP osoitettiin spesifisesti vuorovaikutuksessa GST-p37 kiinteän faasin sitoutumismääritystä (kuvio 1 B) ja avattavan määrityksessä (kuvio 1C). Olemme huomanneet, että A2PP ei vaikuttanut morfologian AGS ja BGC823-soluissa (kuvio 1 D). Lisäksi, jos pitoisuus on alle 20 uM, A2PP ei estänyt soluproliferaatiota (kuvio 1 E), viittaa siihen, että A2PP on minimaalinen myrkyllisyys soluja. EGFR on liitetty säätelyssä ANXA2 fosforylaatioon [17,25,26], kun taas A2PP ollut vaikutuksia fosforylaatiot tai proteiinin tasot EGFR ja ANXA2 [Kuva 2A]. Lisäksi A2PP ei vaikuttanut migraatio AGS ja BGC823 soluja (kuvio 2B ja 2C). Cellular lokalisointi ANXA2 säätelee sen fosforylaatio, joka on kriittinen sen toiminta [17,27,28]. Olemme löytäneet A2PP ei muuttanut solunosasijaintia endogeenisen ANXA2 (kuvio 2D). Nämä tulokset osoittavat, että A2PP yksin ei ole vaikutusta pahanlaatuisten fenotyyppejä tai EGFR-ANXA2 signalointi mahalaukun syöpäsoluja.

(A) Kaaviokuva aminohapposekvenssin N-pään ANXA2 polypeptidin (A2PP). (B) Kiinteän faasin sitoutumismääritys. OD490 15 nM biotiini-A2PP GST asetettiin 1 ja suhteellinen siteet olivat caculated. Keskiarvo ± SD kolmesta riippumattomasta määrityksiä kolminkertaisia ​​näytteitä. ***, P 0,001. (C) Streptavidin avattavasta analyyseilla tunnistettiin Biotin-A2PP GST-p37 sitojapolypeptidi. (D) Cell morfologian AGS ja BGC823 seuraavassa mainittu pitoisuudet A2PP hoitoa 24 tuntia ja 48 tuntia. (E) leviämisen mahasyövän solulinjojen (AGS ja BGC823) käsiteltiin lisäämällä pitoisuutta A2PP 72 tuntia. Keskiarvo ± SD kolmesta kokeesta kolminkertaisia ​​näytteitä.

(A) Western blotting fosfo-EGFR, fosfo-ANXA2, EGFR, ja ANXA2 AGS ja BGC823 soluja käsiteltiin A2PP 24 tunnin ajan. GAPDH käytettiin latauskontrollina. (B) edustavat kuvat migraation AGS ja BGC823 soluja käsiteltiin A2PP 24 tunnin ajan. Mittaviivat 200 um. (C) tilastollinen yhteenveto migraatiokokeessa. Keskiarvo ± SD kolmesta kokeesta kolminkertaisia ​​näytteitä. ns, ei ole merkitystä. (D) Immunofluoresenssi ja ANXA2 lokalisointi (punainen) on AGS ja BGC823 soluja käsiteltiin A2PP 24 tunnin ajan. Mittaviivat 5 pm.

A2PP Vähennykset

M

.

hyorhinis

Infektio

edellinen työ on osoittanut, että N-terminaali ANXA2 sovittelee

M

.

hyorhinis

infektio [17]. Kuten on esitetty tulos solun ELISA-määrityksessä havaittiin, että

M

.

hyorhinis

infektio estettiin A2PP annoksesta riippuvaisella tavalla in BGC823 ja AGS soluja, mutta ConP saaneilla solut edelleen erittäin tartunnan

M

.

hyorhinis

(kuvio 3A). Nämä tulokset tukivat qPCR määritykset (kuvio 3B). Johdonmukaisesti, A2PP vähensi myös proteiinin tasoja p37-proteiinin Western blotting -analyysi (kuvio 3C ja 3D). Samaan aikaan tasot phophos-AXNA2 ja phophos-EGFR tartunnan saaneiden solut alassäädetty käsittelemällä A2PP (kuvio 3C ja 3E), kun koko tasoa AXNA2 ja EGFR olivat suhteellisen vakaana (kuvio 3C). Vuonna immunofluoresenssianalyysillä, A2PP havaittiin estävän

M

.

hyorhinis

infektio aiheuttama p37 keskittymisen ja kolokalisaation välillä p37 ja ANXA2 (kuvio 4A). Vuonna yhteistyössä immuunisaostustesti proteiini teissa

M

.

hyorhinis

infektoituja soluja, A2PP vähentynyt vuorovaikutus p37 ja ANXA2 (kuvio 4B). Yhdessä nämä todisteet tukevat ajatusta, että A2PP voisi pienentää

M

.

hyorhinis

infektio ja vahvisti aikaisemmat havaintoon, että N-terminaalin ANXA2 tarvitaan välittämiseen

M

.

hyorhinis

infektio [17].

Solun ELISA analyysi p37 (OD 490 nm) p37-proteiinin AGS ja BGC823 soluja infektoitiin 10

5 CCU (värinvaihtoyksikköä) /ml

M

.

hyorhinis

ja käsitelty A2PP tai ConP 24 tunnin ajan.

M

.

hy

,

M

.

hyorhinis

. Keskiarvo ± SD 3 kokeiluja kolmena kappaleena kullekin näytteelle. (B) Kvantitatiivinen PCR (qPCR) analyysi

p37

vuonna AGS ja BGC823 solujen tartunnan ja käsiteltiin kuten (A). Keskiarvo ± SD 3 kokeiluja kolmena kappaleena kullekin näytteelle. (C) Western blottaus p37, p-EGFR, EGFR, p-ANXA2 ja ANXA2 AGS ja BGC823 solut käsiteltiin kuten (A). (D) kvantifiointi p37-proteiinin pitoisuudet (C). Tasot P37 normalisoitiin kuin GAPDH. Keskiarvo ± keskihajonta 3 riippumattomasta kokeesta. (E) kvantifiointi p-EGFR ja p-ANXA2 tasoilla (C). Tasot p-EGFR tai p-ANXA2 normalisoitiin kuin EGFR tai ANXA2. Keskiarvo ± keskihajonta 3 riippumattomasta kokeesta. **, P 0,01; **, P 0,001; ns, ei ole merkitystä.

(A) lokalisoinneissa ANXA2 (punainen) ja P37 (vihreä) in BGC823 ja AGS soluja infektoitiin 10

5 CCU /ml

M

.

hyorhinis

ja käsitelty A2PP tai ConP 24 tunnin ajan. Rinnakkaispaikantumisen osoitettiin sulautunut signaaleja (keltainen). Mittaviivat 5 pm. (B) Co-immuunisaostustesti validoimiseksi ANXA2-p37 vuorovaikutuksen BGC823 ja AGS infektoimia soluja

M

.

hyorhinis

ja käsitelty A2PP tai ConP 24 tunnin ajan.

A2PP vaimentaa

M

.

hyorhinis

aiheuttama Migration

Aiemmat tutkimukset ehdotti, että

M

.

hyorhinis

infektio voisi edistää migraatio mahasyövän solujen [17, 23]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että

M

.

hyorhinis

-promoted migraation mahalaukun syövän solujen ei vaikuttanut ConP, mutta oli annosriippuvaisesti inhiboi A2PP (kuvio 5A ja 5B). Nämä tulokset viittaavat siihen, että A2PP esti

M

.

hyorhinis

indusoimaan muuttoliikettä, joka liittyi sen kyky vähentää infektio-edistänyt fosforylaatiot EGFR ja ANXA2 (kuvio 3C ja 3E).

(A) Migration 10

5 CCU /ml

M

.

hyorhinis

infektoiduista AGS ja BGC823 soluja käsiteltiin osoitettujen peptidien 24 tunnin ajan. (B) Yhteenveto muuttoliikkeen määritykset (n = 3). Keskiarvo ± keskihajonta 3 riippumattomasta kokeesta kolminkertaisia ​​näytteitä. ***, P 0,001.

A2PP Has Essential motiivi laskevan

M

.

hyorhinis

Infektio

luonnehtivat kriittinen motiivi A2PP, etsimme onko monipuolinen katkaistun peptidejä A2PP (kuvio 6A) voisi vähentää

M

.

hyorhinis

infektio. Vuonna qPCR analyysi, A2PP ja katkaistun peptidit A2PP-ND4, ND8, Nd12,: CD4, CD8 ja Cd12 vähentää

M

.

hyorhinis

infektion mahalaukun syöpäsoluja, mutta A2PP-Nd16 ja A2PP-CD16 jättänyt pienentää

M

.

hyorhinis

infektion (kuvio 6B). Samanlaisen esto saatiin Western blotting-määritys (kuvio 6C). Nämä tulokset viittaavat siihen, että on olemassa erityinen motiivi A2PP on olennainen sen kykyyn vähentää

M

.

hyorhinis

infektio. Edelleen kartoittamiseksi ydinjaksoja tämän potentiaalin motiivin, syntetisoimme kaksi peptidejä, jotka vastaavat 11

th -20

th aa (kutsutaan kuten A2PP-10aa) ja 13

th -18

th aa (kutsutaan kuten A2PP-6AA) (kuvio 7A). Vuonna qPCR määrityksessä, molemmat peptidit voivat pienentää

M

.

hyorhinis

infektion (kuvio 7B), jota tukee Western blotting-määritys (kuvio 7C). Huomattavaa on, että inhiboivia vaikutuksia A2PP-10aa olivat parempia kuin A2PP-6AA, mutta vaikutukset sekä peptidien olivat vähemmän kestävä kuin A2PP (kuvio 7B ja 7C). Thesefore, Keski-sekvenssit (11

th -20

th) on A2PP voisi olla keskeinen motiivi estää

M

.

hyorhinis

infektio.

(A) Kaaviokuva katkaistun peptidien A2PP. (B) qPCR analyysi

p37

vuonna AGS ja BGC823 soluja infektoitiin 10

5 CCU /ml

M

.

hyorhinis

ja käsiteltiin 20 uM osoitettujen peptidien 24 tunnin ajan. Keskiarvo ± SD 3 kokeiluja kolmena kappaleena kullekin näytteelle. (C) Western blottaus p37 AGS ja BGC823 solujen tartunnan ja käsiteltiin kuten (B). Keskiarvo ± keskihajonta 3 riippumattomasta kokeesta.

Kaaviokuva kaksi typistettyjä muotoja A2PP. (B) qPCR analyysi

p37

vuonna AGS ja BGC823 soluja infektoitiin 10

5 CCU /ml

M

.

hyorhinis

ja käsiteltiin 20 uM osoitettujen peptidien 24 tunnin ajan. Keskiarvo ± SD 3 kokeiluja kolmena kappaleena kullekin näytteelle. (C) Western blottaus p37 AGS ja BGC823 solujen tartunnan ja käsiteltiin kuten (B). Keskiarvo ± keskihajonta 3 riippumattomasta kokeesta. *, P 0,05; **, P 0,01; ***, P 0,001.

vertailu A2PP muiden lääkkeiden kanssa ehkäisemisessä

M

.

hyorhinis

Infektio

M

.

hyorhinis

oli yksi tärkeimmistä pilaantumisen lähteitä soluviljelmässä [13,14,15]. Paras tapa poistaa

M

.

hyorhinis

infektio on hävittää soluihin ja nopeasti steriloida kaikki yhteyttä aluksiin, mutta jotkut tartunnan soluja ei voitu korvata useissa tapauksissa. Näin ollen on välttämätöntä käyttää erityisiä mikrobilääkkeiden lähestymistapoja ehkäisemiseksi ja poistamiseksi

M

.

hyorhinis

infektio. On ollut erilaisia ​​mikrobilääkkeiden estää

M

.

hyorhinis

saastuttamasta. Esimerkiksi Siprofloksasiini (CIP) voisi hävittää

M

.

hyorhinis

sopivassa pitoisuus [29]. Kaksi antimikrobinen komponentit nimettiin mykoplasmaa I (Myco I) ja mykoplasman II (Myco II) voisi vähentää

M

.

hyorhinis

infektiota estämällä sen proteiinin ja nukleiinihapon synteesiä. Jotkin huolenaiheita kuten alhainen herkkyys, voimakasta vastustusta ja korkea myrkyllisyys voi rajoittaa niiden sovelluksia soluviljelmässä. Näiden ajatusten pohjalta, uskomme, että on välttämätöntä verrata tehokkuus A2PP, CIP, Myco I ja Myco II estämisessä

M

.

hyorhinis

infektio. Western blottauksella ja qPCR määritykset, huomasimme, että A2PP estävä vaikutus

M

.

hyorhinis

infektio oli samanlainen kuin Myco minä, mutta oli parempi kuin CIP ja Myco II (kuvio 8A ja 8B). Kiinnostavaa kyllä, huomasimme, että A2PP voisi myös tehokkaasti poistaa

M

.

hyorhinis

infektion sairastunut soluissa prosessissa kohtien P

1 P

3 (kuvio 8C ja 8D). Lisäksi, verrattuna Myco I ja Myco II, A2PP oli vähemmän inhiboiva vaikutus solujen proliferaatioon (kuvio 9A). Tutkia mekanismeja A2PP, CIP, Myco I ja Myco II: n vaikutuksia soluihin leviämisen, suoritimme mikrosiruanalyysi ja seulotaan osajoukon ilmentyvät eri geenien A2PP, CIP, Myco I ja Myco II käsiteltyjä soluja. Kvantitatiivinen RT-PCR-analyysi osoitti lisääntynyt ilmentyminen apoptoosin liittyvien geenien (

ATF5

,

DDIT3

,

CEBPB: lle

) mukaan Myco I ja Myco II hoitoa, mutta hieman muutokset olivat havaittu A2PP ja CIP ryhmiä (kuvio 9B). Nämä tulokset osoittavat, että A2PP on vähemmän myrkyllisyys ja parempi ennaltaehkäiseviä potentiaalia estää

M

.

hyorhinis

infektion viljellyissä soluissa.

(A) Western blottaus p37 AGS ja BGC823 soluja infektoitiin 10

5 CCU /ml

M

.

hyorhinis

ja käsiteltiin A2PP (20 uM), CIP (4 ug /ml), Myco I (5 ug /ml), tai Myco II (10 ug /ml) 24 tunnin ajan. Keskiarvo ± keskihajonta 3 riippumattomasta kokeesta. (B) qPCR analyysi

p37

vuonna AGS ja BGC823 soluja käsitellään in (A). Keskiarvo ± SD 3 kokeiluja kolmena kappaleena kullekin näytteelle. (C) Western blottaus p37 AGS infektoiduista soluista 10

5 CCU /ml

M

.

hyorhinis

ja käsitelty A2PP prosessissa solujakojen P

1 P

3. Keskiarvo ± keskihajonta 3 riippumattomasta kokeesta. (D) qPCR analyysi

p37

vuonna AGS soluissa tartunnan ja käsiteltiin kuten (C). Keskiarvo ± SD 3 kokeiluja triplikaattinäytteet. **, P 0,01; ***, P 0,001; ns, ei ole merkitystä.

(A) leviämisen AGS ja BGC823 käsiteltiin A2PP (20 uM), CIP (4 ug /ml), Myco I (5 ug /ml), tai Myco II (10 ug /ml) 72 tuntia. Keskiarvo ± SD 4 itsenäisestä kokeesta kolminkertaisia ​​näytteitä. (B) RT-PCR-analyysi

ATF5

,

DDIT3

,

CEBPB: lle

vuonna AGS ja BGC823 soluja käsiteltiin A2PP (10 uM), CIP (4 ug /ml ), Myco I (5 ug /ml), Myco II (10 ug /ml) 24 tunnin ajan. Keskiarvo ± SD 3 kokeiluja triplikaattinäytteet.

Keskustelu

mykoplasmainfektio ja saastuminen ovat edelleen yleisiä tänään ja tuoda huomattavia riskejä potilaille ja tutkimuksen laatua. Viime vuosina useat tutkimukset ehdotti, että mykoplasmatulehduksen liittyi myös kasvaimien syntyyn [3-8]. Mycoplasma infektio voi aiheuttaa DNA-vaurioita, vaikuttaa geenien ilmentyminen, ja häiritä solusyklin Checkpoint ja apoptoottista vastetta [30].

M

.

hyorhinis

todettiin 56% mahasyövistä, 55,1% paksusuolen syövistä ja 39,7% rintasyövistä kudoksissa [20]. Lisäksi serologinen testaus osoitti, että 36% eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun (BPH) ja 52% eturauhasen syöpä kudoksiin oli

M

.

hyorhinis

positiivinen [4]. Nämä tutkimukset viittaavat siihen, että yhdistyksen välillä

M

.

hyorhinis

infektio ja kasvaimia esiintyi [4,20]. Mitä enemmän, prosessissa soluviljelmässä, yleisimmät saastuminen lähteet ovat mykoplasman, bakteereita ja hometta, mutta saastuminen nopeus Mycoplasma on suhteellisesti suurempi [13]. Tulokset Eri ryhmät ovat osoittaneet, että korko mykoplasmakontaminaation vaihteli 15-80%, jotkut jopa saavuttanut 100% [15,31]. Analyysi DNA-sekvenssejä 1000 genomeista -hanketta ymmärtää, että 7%: n näytteet saastuneet mykoplasman [32]. Kuitenkin estää mykoplasmatulehduksen ja saastuminen on vaikeaa. Ensinnäkin, koska pleomorphic, plastisuus, suodatettavuus ja helppo liukoisuutta, mykoplasmoja voisi kulkea mikrosuodatuskalvo helposti, tekevät niistä olemassa isäntäsolun pintaa tai voidaan endosytoidut soluilla [1,13,33]. Toiseksi mycoplasma puuttuu soluseinä, mikä tekee ne herkkä antibiooteille jotka estävät soluseinän synteesiä, kuten penisilliini. Tehokkaiden mikrobilääkkeiden olemassa, mutta niiden jatkuva sovellukset soluviljelmässä ei suositella, koska myrkyllisyyden soluihin. Lopuksi mycoplasma on epätyypillinen bakteeri, joka aiheuttaa difficulities oikeaan diagnoosiin [34].

Lukuisat anti-mycoplasma lääkkeitä on kehitetty, kuten erytromysiini, leukomysiini, Roxithromycin, Ofloxacin, ja Ciprofloxacin. Kuitenkin haittavaikutuksia, myrkyllisyys, ja vastus silti tuoda ongelmia Saasteiden [10,11,35-38]. Lisäksi jatkuva antaminen antibioottien voinut täysin poistaa mycoplasma yhden tai jopa useamman viikon [39,40]. Siksi on tärkeää löytää uusia tapoja, jotka voivat eliminoida mykoplasmatulehduksen tai saastuminen tehokkaasti ja oikea-aikaisesti. Ratkaisu tähän päämäärään voidaan todennäköisesti löytyy kautta luonnehdinta molekyylitason mekanismeista mykoplasmatulehduksen.

edellinen tutkimus osoitti, että vuorovaikutus P37 proteiinin AXNA2 välittämää

M

.

hyorhinis

infektio [17]. Tässä tutkimuksessa olemme ensinnäkin syntetisoitiin N-pään polypeptidi ANXA2 (A2PP) ja validoitu sen erityisen vuorovaikutusta GST-p37-proteiinin kiinteän faasin sitova ja streptavidiini avattavan määrityksissä. Innoittamana tällaista vuorovaikutusta, mietimme onko A2PP voisi antagonisoida infektio

M

.

hyorhinis

. Huomasimme, että A2PP, sopivassa pitoisuus (20 uM), laski

M

.

hyorhinis

infektio, esti infektio-edistänyt muuttoliikettä, ja vähentää infektio-provosoi fosforylaatiot EGFR ja ANXA2 mahalaukun syöpäsoluja. Nämä vaikutukset liittyivät vähentynyt vuorovaikutus p37 ja ANXA2. On huomattava, että A2PP yksin esillä minimaaliset vaikutukset solujen lisääntymistä ja fosforylaatiot EGFR ja ANXA2, viittaa siihen, että A2PP on todennäköisesti käyttökelpoinen reagenssi vähentämiseksi

M

.

hyorhinis

infektio. Tätä käsitystä tuki vertailuja A2PP n ja kaupallisten antibiootit ”vaikutukset soluproliferaatioon ja

M

.

hyorhinis

infektio, joka osoitti, että A2PP tosiaan oli vähemmän myrkyllisyyttä soluille mutta vahva kyky torjua infektiota.

Tästä huolimatta A2PP, 30 aa polypeptidi voivat heikentää

M

.

hyorhinis

infektio tehokkaasti, tarvitsemme vielä ymmärtää, onko katkaistu muodot A2PP voisi saavuttaa samanlainen anti

M

.

hyorhinis

kyky.