Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

T-solu immunoglobuliini limaa 3 (Tim-3) on tunnistettu negatiivisena säätelijänä anti -tumor koskemattomuus. Viimeaikaiset tutkimukset osoittavat tärkeää roolia Tim-3 CD8

+ T-solu sammumisen, joka tapahtuu sekä ihmisten ja eläinten syövän malleja. Kuitenkin luonteeltaan Tim-3 ilmentyminen kasvainsolun ja mekanismi, jolla se inhiboi kasvaimen vastaisen immuniteetin ovat epäselviä. Tämä nykyinen tutkimuksen tarkoituksena on selvittää Tim-3 ilmentyy kohdunkaulan syövän solujen ja arvioida rooli Tim-3 kohdunkaulan syövän etenemiseen.

Menetelmät

Yhteensä 85 kohdunkaulan kudosnäytteitä lukien 43 ihmisen kohdunkaulan syöpä, 22 CIN-muutos (CIN) ja 20 krooninen kohdunkaulan olivat mukana. Tim-3: n ekspressio tuumorisoluissa havaittiin ja sen havaittiin korreloivan kliinis parametrit. Samalla ilmaus Tim-3 arvioitiin RT-PCR, Western Blot ja konfokaalimikroskopialla kohdunkaulan syövän solulinjoissa, HeLa ja SiHa. Siirtyminen ja hyökkäys potentiaalia Hela-solujen arvioitiin jälkeen estämällä Tim-3 ilmentymisen ADV-antisense Tim-3.

Johtopäätökset

Huomasimme, että Tim-3 ilmentyi korkeammalla tasolla kliininen kohdunkaulan syöpäsolujen verrattuna CIN ja krooninen kohdunkaulan valvontaa. Olemme tukeneet tätä toteamusta vahvistaa läsnäolo Tim-3 mRNA ja proteiini kohdunkaulan solulinjoissa. Tim-3 ilmentyminen kasvainsoluissa korreloi kliinis parametreja. Potilaat, joilla on korkea ilmentymisen Tim-3 oli merkittävä metastaattinen potentiaali, pitkälle edennyt syöpä laadut ja lyhyempi kokonaiselossaoloaikaa kuin vähemmän ilme. Monimuuttuja-analyysi osoitti, että Tim-3 ilmentyminen oli riippumaton tekijä ennustamiseksi ennustetta kohdunkaulan syövän. On merkittävää, alas-ekspressiota sääteleviä Tim-3-proteiinin esti muuttoliike ja invaasion Hela-solujen. Tutkimuksemme osoittaa, että ilmaus Tim-3 kasvainsoluissa voi olla itsenäinen ennustetekijä potilaille, joilla on kohdunkaulan syöpä. Lisäksi Tim-3 ilmentyminen voi edistää etäpesäkkeiden mahdollisuus kohdunkaulan syövistä.

Citation: Cao Y, Zhou X, Huang X, Li Q, Gao L, Jiang L, et al. (2013) Tim-3 Expression in Kohdunkaulan syöpä Edistää kasvainmetastaasit. PLoS ONE 8 (1): e53834. doi: 10,1371 /journal.pone.0053834

Editor: Pierre Busson, Institute of syöpäoppi Gustave Roussy, Ranska

vastaanotettu: 27 syyskuu 2012; Hyväksytty: 06 joulukuu 2012; Julkaistu: 15 tammikuu 2013

Copyright: © 2013 Cao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä artikkeli tukivat National Science Foundation of China (nro 81001049) ja National Science Fund for Distinguished Young Scholars of China (nro 81025011). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Nykyinen tutkimukset edelleen osoittamaan vahvaa korrelaatiota Tim-3 ilmaisun ja kasvaimeen liittyvän immunosuppression [1] – [3]. Sakuishi ym [4] todettiin, että Tim-3 ilmentyi CD8

+ kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL) hiirissä, jotka kantoivat kiinteitä kasvaimia. Kaikki Tim-3

+ TIL koekspressoimaan PD-1, ja tällainen TIL edustaa hallitseva osa T-solujen infiltroivat kasvaimet. Tim-3

+ PD-1

+ TIL näytteille vakavin loppuun fenotyypin määritelty epäonnistuminen lisääntyä ja tuottaa IL-2, TNF ja IFN-γ. Yhdistetty kohdistaminen on Tim-3 ja PD-1 polkuja on tehokkaampi palauttamaan kasvaimen vastaisen immuniteetin kuin kumman tahansa reitin yksin. Zhou et ai [5] havaitsi saman ilmiön hiirten levitetään akuutti myelooinen leukemia. Jopa melanoomapotilailla, ylössäätely Tim-3 ja PD-1-ekspressiota on myös havaittu liittyvän kasvaimen antigeeni-spesifinen CD8

+ T-solujen toimintahäiriön [6]. Edellisessä tutkimuksessa havaittiin, että Tim-3 ilmentyy edullisesti lymfooma johdettu endoteelisolujen ja tukahdutti aktivointi CD4

+ T-lymfosyyttien aktivoitumisen kautta interleukiini-6-STAT3 kautta. Tim-3 myös helpotti perustamista lymfooma siedätyshoitoa [7]. Kuitenkin myös Tim-3 ilmentyy myös syöpäsolujen muissa ei-hematologinen syövissä jää avoimeksi kysymys.

Kohdunkaulan syöpä on kasvain, joka on hallussaan erillisiä kasvaimeen liittyviä antigeenejä (TAA). Ihmisen papilloomavirukset (HPV: t) on osoitettu aiheuttavan etenevän muutoksia kohdunkaulan epiteelin, joka johtaa kohdunkaulan syöpä. Yli 99% kohdunkaulan maligniteettien satama HPV (lähinnä HPV-16 ja HPV-18). E6 ja E7 ovat kaksi proteiinia ilmaiseman virus, joka ovat välttämättömiä taudin alkamisen ja etenemisen syövän [8]. Useat tutkimukset [9], [10] osoittavat, että on olemassa muita mahdollisia rooleja kuten Fas-FasL järjestelmä ja menetys HLA luokka I immuuni paeta kohdunkaulan syöpä. Koska monet reitit ovat mahdollisesti mukana kohdunkaulan syövän, mietimme jos Tim-3, antigeeni, joka on ollut mukana kehittää erilaisia ​​syöpiä, voi myös olla rooli kehitettäessä kohdunkaulan syövän. Lisäksi edellisessä tutkimuksessa todettiin, että Tim-3 yliekspressoitiin epiteelisyövissä. Nämä syyt yhdistettynä sai meidät kiinnostunut tutkii rooli Tim-3 kohdunkaulan syövän.

Kaksi viimeaikaiset tutkimukset [11], [12] on tunnistettu Tim-3 ilme leukemiaso- kantasoluja (LSC) potilailla, joilla akuutti myelooinen leukemia (AML). Tim-3

+ AML solut pystyivät liuottaa AML ja anti-ihmisen Tim-3-vasta-aine esti AML siirteen on xenotransplant malli. Vaikka anti-Tim-3-vasta-aineita näyttävät vähentää metastaattista potentiaalia syöpäsolujen, toimintamekanismi ei ole täysin ymmärretty. Tässä tutkimuksessa käytimme ADV-antisense Tim-3 alas-säädellä Tim-3 kohdunkaulan syövän Hela solulinjaa ja sitten arvioitiin kyky syöpäsolujen siirtää ja hyökätä.

tuloksia tästä tutkimus vahvisti mRNA ja proteiini ilmentymiseen Tim-3 kohdunkaulan syövän solulinjoissa ja paljasti ensimmäistä kertaa, että Tim-3 ilmentyy kliinisen ensisijainen kohdunkaulan syöpäsolujen verrattuna CIN ja krooninen kohdunkaulan. Lisäksi potilailla, joilla on korkea ilmentymisen Tim-3 oli merkitsevästi suurempi metastaattista potentiaalia ja kehittynyt syöpä laadut ja lyhyempi kokonaiselossaoloaikaa kuin vähemmän Tim-3 ilme. Siksi Tim-3 voi mahdollisesti olla itsenäinen ennustetekijä potilaille, joilla on kohdunkaulan syöpä. Olemme myös havainneet, että ADV-antisense Tim-3 voi estää maahanmuutto- ja invaasion Hela-solujen. Yhdistettynä edellisessä tutkimuksessa, jossa havaittiin, että Tim-3 aktivoi IL-6-STAT3 polku tukahduttaa aktivointi CD4

+ T-lymfosyytit, tutkimuksemme avaa mahdollisuuden, että Tim-3 voi edistää etäpesäkkeiden kautta aktivoinnin IL-6-STAT3-reitin.

Materiaalit ja menetelmät

potilaat

Näytteet 43 kohdunkaulan syöpä kudoksiin, 22 CIN kudosten ja 20 krooninen kohdunkaulan kudokset olivat peräisin potilaista, jotka koki ensisijainen leikkaus kohdunkaulan sairauksien laitoksella Gynecologic Oncology in Tongji Hospital (Huazhong tiede ja teknologia, Wuhan, Kiina) 2004-2006. Kaikki valitut kohdunkaulan syöpä kudoksiin täyttivät seuraavat kriteereillä: ei ollut mikä tahansa muu pahanlaatuinen kasvain, ilman neoadjuvant hoitoa ennen leikkausta. Kaikki potilaat antoivat tietoisen kirjallisen suostumuksensa analyysi niiden kudoksen tutkimustarkoituksiin. Tutkimus hyväksyi eettinen komitea on Tongji sairaalan analysointia ihmisen kudoksista. Potilaat olivat ikä 27-67 vuotta (mediaani-ikä, 39 vuotta). Histologinen tutkimus leikatusta kohdunkaulan kudoksissa tehtiin seuraavat hematoksyliinillä eosiini (H inkuboitiin Tim-3-vasta-aine (1:1000, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) yön yli 4 ° C: ssa; pesty; ja inkuboitiin piparjuuriperoksidaasi-leimattua sekundaarista vasta-ainetta aasin anti-vuohi lgG: llä (1:5000) 1 h huoneen lämpötilassa. Lopuksi blotit kehitettiin käyttäen tehostettua kemiluminesenssidetektiolla (Amersham Life Science). Alustavassa kokeessa, löysimme NK-92 solulinjaa pääasiassa ilmaisi Tim-3-proteiinin, kun taas THP-1-solulinja ei ilmentänyt Tim-3-proteiinia. Yhteensä proteiini uutetaan NK-92-solulinjaa käytettiin positiivisena kontrollina ja Tim-3-proteiinin, kun koko proteiini uutetaan THP-1-solulinjaa käytettiin negatiivisena kontrollina.

Immunofluoresoivat Detection of HeLa Cell Line

HeLa-solut otettiin talteen yhdistelmä trypsiiniä ja etyleenidiamiinitetraetikkahappo (EDTA) ja pestiin PBS: ssä, ja kasvatettiin coverslip. Sitten solut fiksoitiin 95% ethnol ja blokattiin 1% BSA: ssa 1 tunnin ajan, ja sitten niitä inkuboitiin primäärisen vasta-aineen 4 ° C: ssa yön yli. Primaarista vasta-ainetta käytettiin olivat vuohen anti-Tim-3 (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) laimennoksena 1:100. Näytteet sitten pestiin PBS: ssä 5 minuutin ajan 3 kertaa. Negatiivinen kontrolli laseja inkuboitiin ilman primaarista vasta-ainetta. Aasin anti-vuohi-IgG: llä konjugoituna FITC: n kanssa laimennettu 2% BSA /PBS: ään laimennus 1:100 inkuboitiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa, solun tuma värjättiin PI laimennoksena 1:1000, tarkastetaan konfokaalimikroskoopilla.

adenovirusmutantit

AdEasy järjestelmä (MP Biomedicals) käytettiin tässä tutkimuksessa rakentaa rekombinantti replikaatiovialliset adenovirusvektori nimetty ADV-antisense Tim-3, joka sisälsi fragmentin käänteinen Tim- 3 cDNA (ep 198-1312). Standardiprotokollia seurattiin kuten aiemmin on kuvattu [14]. ADV-GFP, joka sisältää GFP-geenin valvonnassa Rousin sarkoomaviruksen pitkää terminaalista toistoa promoottorin alueella leikattiin E1 adenovirusgeenien käytettiin kontrollina tässä tutkimuksessa. Hela-solut infektoitiin ADV-antisense Tim-3 tai ADV-GFP on asianmukaista MOI määritettiin Apoptosis määritys 2 tuntia, sitten niitä viljeltiin vielä 24 tunnin ajan ja altistettiin myöhemmissä kokeissa.

Apoptosis Assay

Lyhyesti, HeLa-solut infektoitiin eri tiitterit adenoviruksen mutanttien tai käsitelty PBS: llä 72 tuntia. Sitten solut kiinnitettiin 70% etanolilla 1 h, pestiin PBS: llä, ja käsiteltiin RNaasi 15 minuutin ajan 37 ° C: ssa ja värjättiin sitten 50 ug /ml propidiumjodidia. Solut kerättiin ja alistettiin FACS-analyysi sub-G1 väestöstä.

haavan paraneminen Määritys

soluja kasvatettiin konfluenssiin 6-kuoppaiselle viljelylevylle. Lineaarinen haava tehtiin raaputtamalla yksikerroksista steriilillä 10-ul pipetin kärki. Haavoittuneen yksittäiskerroksia pestiin 3 kertaa säännöllisin väliaineen ja inkuboitiin tuoreessa, seerumia. Valokuvat otettiin 0 h, 24 h ja 48 h jälkeen haavoittaen faasikontrastimikroskopiassa.

TranswellTM invaasiomääritys

Solun hyökkäystä analysoinnissa käytettiin Transwell kammiot (Costar, Cambridge, MA, USA) 8-um huokosia polykarbonaatti suodattimia, jotka oli päällystetty matrigeelin ™ (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Infektoidut solut adenovirusmutantit 24 h ympättiin ylä- kammiot seerumia tiheydellä 2,0 x 10

4 kuoppaa kohti, ja 500 ui 10% naudan sikiön seerumia sisältävää alustaa pantiin alempaan kammio kuin chemo-houkutinta. 48 tunnin jälkeen 37 ° C: ssa 5% CO2: ta, solut kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä ja värjättiin 0,1% kristalliviolettiliuoksella. Solujen yläpinnan suodattimen poistettiin vanupuikot. Tunkeutuneet solujen alapuolella suodattimen valokuvattiin ja laskettiin faasikontrastimikroskopiassa (x 200 suurennoksilla). Kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena.

Tilastollinen analyysi

SPSS tilasto-ohjelmalla ohjelmaa käytettiin testaamaan korrelaatiot määrällisten muuttujien perustamalla nonparametric lineaarisen regression. Tiedot esitetään keskiarvoina ± SD vähintään kolmen kokeen ja analysoitiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä, jota seuraa Student-Newman-Keuls-testi. Kaplan-Meier-menetelmää käytettiin arvioitaessa yleistä eloonjäämisaste kuin ajan funktiona. Survival erot analysoitiin käyttäen log-rank-testi. Coxin suhteellinen vaara mallia käytettiin yhden ja usean analysointi ennustavat tekijät. Kaikki p-arvot olivat kaksipuolisia, ja

P

0,05 pidettiin merkittävänä. SPSS (versio 11.5) käytettiin kaikkiin tilastollisia menetelmiä.

Tulokset

Tim-3 ilmentyy edullisesti Kohdunkaulan syöpä Tissue

Analysoimme osiin kasvainkudoksen 43 potilaista, jotka leikattiin kohdunkaulan syövän, 22 potilaalla on CIN ja 20 potilaalta, joilla on krooninen kohdunkaulan. Positiivinen värjäys Tim-3-proteiinia nähtiin vain 15,0% (3 out of 20) kroonisten kohdunkaulan, mutta 50,0% (11 out of 22) CIN ja 65,1% (28 out of 43) kohdunkaulan syövän värjättiin positiivisesti Tim-3-proteiinin (kuvio. 1A-D). Kun ilmaus Tim-3-proteiinin edelleen verrattiin semikvantitatiivinen immunologista H-pisteytys, kohdunkaulan syövän ja CIN näkyy paljon korkeampi Tim-3 sijoituksen kuin krooninen kohdunkaulan kudokseen. (0,905 ± 0,584, 0,558 ± 0,123 vs. 0,102 ± 0,075;

P

0,01) (taulukko 1).

(A) kohdunkaulan levyepiteelikarsinooma syöpä, (B) kohdunkaulan adenokarsinooma, (C ) CIN-muutos, ja (D) krooninen kohdunkaulan kudokseen. Alkuperäinen suurennus × 200.

Tim-3 Expression korreloi ennusteeseen viittaavia parametrit

korreloi Tim-3 ilmaisun tietoja ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia, kuten ikä, histologinen tyyppi, kliininen luokalla, histologinen luokka, etäpesäke ja kokonaiseloonjääminen. Korkea immunologista Tim-3 havaittiin merkitsevästi korreloida kliinisen laadun (

p

= 0,018), histologinen arvosana (

p

= 0,038) ja etäpesäkkeiden (

p

= 0,004). Ei ollut merkittäviä korrelaatioita iän (

p

= 0,178) ja histologinen tyyppi (

p

= 0,773) (taulukko 2).

Lopussa meidän seurantajakson aikana, 15 potilasta kuoli Tim-3 positiivinen ryhmän, kun 3 in Tim-3 negatiivinen ryhmä, 5 vuoden pysyvyys oli 46,4%

vs

80% vastaavasti (

P

= 0,006) (Kuva. 2).

vertailu viiden vuoden kumulatiivinen-selviytymisen käyrä kohdunkaulan syövän potilaiden välillä Tim-3 positiivinen ilme (katkoviiva) ja Tim-3 negatiivinen ilmaus (paksu viiva) näytetään.

Tim-3 on ilmoitettuna kohdunkaulan syöpä Solulinjat

RT-PCR ja western blot analyysiä käytettiin havaitsemaan Tim-3 mRNA ja proteiini tasoilla kahdessa ihmisen kohdunkaulan syöpäsolun linjat Hela ja SiHa. Kuten odotettua, 749-bp tuote havaittiin olevan läsnä näissä kahdessa solulinjassa, mikä vahvistaa läsnäolo Tim-3-mRNA: n ilmentymisen. p-aktiini oligonukleotideja käytettiin havaittiin 180 bp: n RNA: n kaistalla, ja niitä käytettiin kontrollina (kuvio. 3A). 33-kd bändi havaittiin vahvistaa Tim-3-proteiinin ilmentymisen (Fig. 3B). Konfokaalimikroskopia käytettiin testaamaan solunosasijaintia Tim-3. Tim-3 jaettiin koko sytoplasmassa (vihreä fluoresenssi) ja Hela solulinjan, ilman jakeluun nucleus (punainen) (Fig. 3C).

(A) Tim-3 transkriptit havaittiin Hela ja SiHa solulinjoissa. Mallit Eri kaistojen seuraavasti: Kaista 1, yhteensä RNA PBL; Kaista 2, cDNA PBL; kaista 3, yhteensä RNA SiHa; kaista 4, cDNA SiHa; kaista 5, yhteensä RNA Hela; kaista 6, cDNA Hela. (B) Tim-3-proteiinin määritettiin Western blotting HeLa ja SiHa solulinjat. (C) Hela-solut värjättiin immunofluoresenssimenetelmällä anti-Tim-3-vasta ja havaitut konfokaalisella laserkeilauksen mikroskooppi. Tim-3-proteiinin (vihreä, nuolenpää) on sytoplasmassa Hela. Soluytimet (punainen) visualisoitiin värjäämällä PI.

tukahduta Tim-3 Expression Inhibioitu Migration ja Invasion Helan Cells

edelleen ymmärtää korrelaatio Tim-3 ja kasvaimen etäpesäke, me tartunnan Hela-solujen kanssa ADV-antisense Tim-3. Tällä infektiokerroin (MOI) 1, ADV-antisense Tim-3 tartunnan Hela-solut osoittivat merkitsevästi vähentynyt Tim-3 ilmaisutapoja vähäinen solukuoleman vastausta; Näin ollen, tämä pitoisuus on käytetty seuraavissa kokeissa (Fig. 4A-B). Koska syöpäsolujen maahanmuutto- ja invaasiota liittyvät suoraan etäpesäkkeiden, haavan paranemista määritys ja solun invaasiomääritys suoritettiin sen määrittämiseksi, tukahduttaminen Tim-3 lauseke estää Hela solujen vaeltamiseen ja invaasiota. Hela-solut infektoitiin joko ADV-antisense Tim-3 tai ADV-GFP kontrollina arvioitiin 24 h ja 48 h. Kuten kuviossa 5A-B, 24 h ja 48 h vastaavasti ADV-antisense Tim-3 infektoidut solut osoittivat 40% ja 70% haavan sulkemiseen, kun taas ADV-GFP infektoidut solut osoittivat 60% ja 100%, mikä viittaa siihen, että inhibitio Tim-3 ilmaisu vähentynyt migraatio Hela-solujen. Kuten kuviossa 5C-D määrä Hela-solut, jotka läpi suodattimen ADV-antisense Tim-3 ryhmä (151 ± 33) oli selvästi pienempi kuin vuonna ADV-GFP ryhmä (545 ± 48), joka osoittaa, että inhibitio Tim-3 ilmentyminen tukahdutetaan Hela soluinvaasiota in vitro.

(A) Western blottaus suoritettiin havaitsemiseksi Tim-3 ilmentyminen HeLa-soluissa tartunnan ADV-GFP ja ADV- antisense Tim-3 tai käsitelty PBS: llä. (B) Tyypillinen tulos solun apoptoosia määritettiin virtaussytometrialla HeLa-soluissa tartunnan ADV-antisense Tim-3 ja ADV-GFP tai käsitelty PBS: llä. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD kolmen rinnakkaisen.

(A) Cell migraatiokykyä määritettiin haavan paranemista määrityksessä. Valokuvat otettiin heti (0 h), 24 tunnin ja 48 tunnin jälkeen haavoittaen. (B) kvantifiointi haavan. Tiedot esittää keskimääräinen etäisyys solun siirtymisen haava-alueen 24 tunnin ja 48 tunnin kuluttua haavoittaen kolmea riippumatonta haavojen ryhmää kohti. (C) kyky solujen hyökätä Matrigel analysoitiin transwell invaasiomääritys kautta geelimatriisiin. Hela-soluja joko tartutettiin ADV-GFP tai ADV-antisense Tim-3, 10 tunnin kuluttua elinkelpoisten invasiivisia solut kiinnitettiin ja laskettiin. Arvot ja virhepalkkeja esitetty tässä kuvaaja edustaa keskiarvot ja keskihajonta vastaavasti kolmen itsenäisen kokeen. (D) edustaja kuvia Transvvell- invaasiomääritys.

Keskustelu

Meidän edellinen työ, huomasimme, että Tim-3 ilmentyy edullisesti lymfooma johdettujen endoteelisolujen (EC) , ja että taso Tim-3 B-solujen lymfooma endoteelin läheisesti korreloi sekä levittämiseen ja huonon ennusteen. Tim-3

+ EC moduloidaan T-solujen vaste lymfooma korvike antigeenejä tukahduttamalla aktivoituminen CD4

+ T-lymfosyyttien aktivoitumisen kautta interleukiini-6-STAT3-reitin, inhiboimalla Th1-polarisaatio, joka tarjoaa suojaavan immuniteetin, ja helpottaa perustaminen lymfooma siedätyshoitoa. Vaikka tutkimukset viittaavat siihen, että Tim-3 on osallisena immuunijärjestelmän säätelyyn kasvaimia, sen suoran ekspression kasvainsolun ja sen toiminta tuumorimetastaasissa olivat vielä tuntematon.

Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että Tim-3 oli ilmentyy kohdunkaulan syövän kudoksissa, ja sen ilmentyminen korreloi merkitsevästi kehittynyt syöpä laadut (

p

= 0,018), histologinen laadut (

p

= 0,038), etäpesäkkeitä (

p

= 0,004) ja lyhyempi eloonjäämisen (

p

= 0,006). Läsnäolo Tim-3-mRNA: n ja proteiinin kaksi kohdunkaulan syövän solulinjat (Hela ja Siha) lisäksi lokalisoinnin Tim-3 sytoplasmaan Hela-solun vahvisti, että Tim-3 todellakin ilmaistu kohdunkaulan syövän solujen. Selventää välisen yhteyden Tim-3 ja kasvaimen etäpesäke, käytimme ADV-antisense Tim-3 tehdä haavan paranemista määritys ja siirtokuoppaan invaasiomääritys. Olemme havainneet, että ADV-antisense Tim-3 infektoidut solut osoittivat 40% ja 70% haavan sulkeutumisen 24 tunnin ja 48 tunnin vastaavasti, verrattuna 60% ja 100% nähdään ADV-GFP-infektoitujen solujen. Lisäksi huomattavasti vähemmän Hela-solujen läpi suodattimen ADV-antisense Tim-3 ryhmä (151 ± 33) kuin että ADV-GFP ryhmä (545 ± 48). Nämä tulokset viittaavat vahvasti siihen, että alas-ekspressiota sääteleviä Tim-3 vähentää maahanmuuttoa ja invaasion Hela-solujen merkittävästi.

mukaisesti Tutkimuksessamme Wiener et ai [15] havaitsivat myös, että Tim-3 ilmentyi ei ainoastaan ​​syöttösolujen noin ihosyövän, vaan myös kasvainsolujen kudosleikkeiden ihmisen melanoomasolulinjat WM35 ja HT168-M1. Samalla Kikushige ja Jan [11], [12] tunnistettiin Tim-3 ilme leukemia kantasoluja (LSC) potilailla, joilla on akuutti myelooinen leukemia. Sen määrittämiseksi, onko Tim-3 on yleisesti ilmaistu kasvainsoluissa, lisätutkimuksia muita syöpäsoluja tarvita.

Huolimatta edistyksestä ymmärtämisessä osallistumista Tim-3 kasvaimen immuniteetin, välisen yhteyden Tim-3 ilmaisun ja kasvainsolun itse ei ole vielä määritelty. Yksi silmiinpistävä havainnot on, että kun käytimme ADV-antisense Tim-3 alas-säätelemään Tim-3 HeLa-soluissa, sekä muuttoliike ja invaasion HeLa soluja estyy merkittävästi. Todellakin, ennätyksensä ilmaus Tim-3 korreloi merkitsevästi etäpesäkkeitä (

p

= 0,004) kohdunkaulan syöpäpotilailla. Seuraava askel olisi selvittää, kuinka Tim-3 ilmentyminen korreloi kasvaimen etäpesäke ja jotka reitit ovat mukana? Aiemmissa työssä, olemme varmistaneet, että Tim-3 voi aktivoida IL-6-STAT3 reitin. Tim-3: n ekspressio lisääntyi n johdettu IL-6 lähes 10-kertaiseksi, ja lisäksi IL-6 lisäsi merkittävästi Fosforyloidun STAT3 (p-STAT3). Julkaistujen tutkimusten mukaan [16] – [19], IL-6-STAT3 reitti on tärkeä rooli tuumorimetastaasissa. STAT3 voi edistää premetastatic kapealla muodostumista ja metastaattisen solut voivat paeta pro-apoptoottinen vaikutus TNF-α lisäämällä autokriinisen IL-6-STAT3 signalointia. Lisäksi esto p-STAT3 parantaa IFN-α tehoa vastaan ​​metastaattinen melanooma hiirimallissa. Näiden pohjalta aikaisempia havaintoja ja meidän päätuloksia oletamme, että Tim-3 saattaisi helpottaa kasvaimen etäpesäke kautta IL-6-STAT3 reitin. Koska etäinen etäpesäke on tärkeä tekijä eloonjäämisen yksilöiden kohdunkaulan syöpä, Tim-3 voi olla kriittinen prognostinen kohdunkaulan syövälle.

Yhdessä meidän tutkimus osoittaa, että Tim-3 paitsi säätelee negatiivisesti anti -tumor immuniteetti, mutta vaikuttaa myös syövän kehitystä suoraan sen ilmentymistä syöpäsoluissa. Ensimmäistä kertaa olemme liittyvä ilmaus Tim-3 tuumorisoluissa huonompi kliinisiä patologisia parametreja kohdunkaulan syöpä. Lisäksi olemme havainneet, että inhibitio Tim-3-proteiinin ilmentyminen voi estää kasvaimen etäpesäke. Näin ollen on järkevää tulevia kokeita tutkia Tim-3 kohteena syövän hoidossa, kasvainten immunoterapia, ja kontrolliryhmän metastaattisen sairauksia.